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    一例豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌混合感染的診斷

    2016-09-21 01:37:10杜海燕韓俊偉河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心河南新鄉(xiāng)453000河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所河南新鄉(xiāng)453000
    甘肅畜牧獸醫(yī) 2016年12期
    關(guān)鍵詞:新鄉(xiāng)市圓環(huán)病原

    杜海燕,韓俊偉(.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,河南 新鄉(xiāng) 453000;.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 新鄉(xiāng) 453000)

    一例豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌混合感染的診斷

    杜海燕1,韓俊偉2
    (1.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,河南 新鄉(xiāng) 453000;2.河南新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 新鄉(xiāng) 453000)

    豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)為主要病原引起仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥,以體質(zhì)下降、呼吸困難、腹瀉、消瘦等為主要特征,可導(dǎo)致豬群產(chǎn)生嚴(yán)重免疫抑制,從而繼發(fā)多種病原繼發(fā)感染,是當(dāng)前中國豬群感染最普遍的傳染病之一。對某養(yǎng)豬戶送檢仔豬進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷,結(jié)合臨床癥狀確診為豬圓環(huán)病毒2型繼發(fā)大腸桿菌混合感染。

    豬圓環(huán)病毒2型;大腸桿菌;混合感染

    1 發(fā)病情況

    該養(yǎng)殖戶共飼養(yǎng)生豬300余頭,品種為大約克,2016年1月份,豬群相繼發(fā)病,先后死亡60頭斷奶仔豬,死亡率達(dá)到20%(60/300)。目前仍有12頭豬在發(fā)病,病豬體溫升高到40.5~40.7 ℃,精神萎頓,眼瞼水腫,喜睡,耳部、胸腹部、臀部及四肢等均有暗紅色或紫紅色出血斑;咳嗽、打噴嚏;部分仔豬腹瀉,呼吸困難,后驅(qū)無力,瀕死前臥地不起,表現(xiàn)發(fā)抖等癥狀。豬群曾接種豬瘟和口蹄疫疫苗。

    2 解剖病變

    剖檢發(fā)現(xiàn)皮下有出血,全身淋巴結(jié)腫大,切面呈大理石樣病變;腸系膜出血,胃腸脹氣;肝臟腫大質(zhì)脆;脾臟有少量出血點(diǎn),邊緣呈齒狀丘疹;腎臟腫大有針尖樣出血點(diǎn)。肺有出血點(diǎn)且局部肉變;心臟內(nèi)膜少許出血。

    3 實(shí)驗(yàn)室診斷

    3.1細(xì)菌學(xué)診斷

    3.1.1細(xì)菌分離培養(yǎng)

    剖檢時(shí)分別用接種環(huán)無菌條件下取兩頭死亡豬的肝、脾、腎及淋巴結(jié)接種于鮮血瓊脂培養(yǎng)基,置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,觀察在血液瓊脂培養(yǎng)基上長出乳白色、圓形、邊緣整齊、凸起、半透明、β溶血菌落,經(jīng)染色鏡檢為革蘭氏陰性桿菌;后接種于麥康凱培養(yǎng)基上,37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察在麥康凱培養(yǎng)基上長出粉紅色菌落,經(jīng)生化試驗(yàn)初步鑒定為大腸桿菌。

    3.1.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果

    取上述血液瓊脂培養(yǎng)基上所長細(xì)菌的純培養(yǎng)物,選擇常用的抗菌素進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn),結(jié)果見表1:

    藥敏試驗(yàn)結(jié)果

    由藥敏試驗(yàn)結(jié)果可知,在與其他幾種抗菌藥物比較后,發(fā)現(xiàn)分離出的大腸桿菌對大多數(shù)藥物有耐藥性,頭孢噻呋鈉對該致病菌抑制效果較為敏感,舒坦西林和重瀉一針靈等藥物相對也敏感,可以選擇頭孢噻呋鈉、舒坦西林和重瀉一針進(jìn)行相應(yīng)治療。

    3.2PCV2病原核酸檢測

    3.2.1DNA提取 分別取病豬的淋巴結(jié)、脾臟組織研磨,反復(fù)凍融3次,8 000 rpm離心10 min,取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

    3.2.2PCR擴(kuò)增 針對PCV2的特異性基因,合成一對引物:P1:AAGGGCTGGGTTATG GTATG/P2:CGCTGGAGAAGGAAAAATGG,預(yù)期擴(kuò)增特異性核苷酸片段大小為353 bp,PCR反應(yīng)體系:DNA模板5 μg,PCR Buffer 5 μl,MgCl23 μl,Taq酶1 μl,上下游引物各1 μl;PCR反應(yīng)程序:94 ℃預(yù)變性5 min,94 ℃ 30 s,58 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min,30個(gè)循環(huán)后,72 ℃延伸7 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,結(jié)果見圖1。

    圖1 DL2000分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);-:陰性對照;

    由圖1可知,從送檢樣本的淋巴結(jié)和脾臟提取DNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增后,檢出豬圓環(huán)病毒2型病毒352 bp特異性核酸片段,說明送檢豬感染豬圓環(huán)病毒2型,并且推斷豬群存在豬圓環(huán)病毒2型的感染。

    4 防治建議

    根據(jù)該養(yǎng)殖場豬群發(fā)病情況、剖檢變化、實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)及分子生物學(xué)診斷可以確定該豬場發(fā)病主要是由豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌病混合感染。豬圓環(huán)病毒2型在豬群中普遍存在,因侵害免疫系統(tǒng)使機(jī)體的免疫抑制,進(jìn)而導(dǎo)致其他病原的繼發(fā)感染,促使死亡率升高。為防止病情進(jìn)一步蔓延,應(yīng)隔離病豬,將病死豬深埋無害化處理。豬群發(fā)病常常是由多種病原共同作用造成發(fā)病率和死亡率升高,本次發(fā)病為豬圓環(huán)病毒感染使機(jī)體抵抗力下降,另外加上冬季寒潮不斷侵襲,保暖措施不當(dāng)造成仔豬應(yīng)激反應(yīng),大腸桿菌趁機(jī)侵入機(jī)體,使病情更為嚴(yán)重。

    建議對豬群進(jìn)行緊急免疫接種,定期進(jìn)行免疫效果監(jiān)測,確保免疫效果。對于豬群出現(xiàn)圓環(huán)病毒2型感染目前沒有治療效果確切的藥物,可行的方法是服用抗生素減少細(xì)菌繼發(fā)感染,藥敏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大腸桿菌對大多數(shù)藥物的耐藥性較強(qiáng),僅對重瀉一針靈、頭孢噻呋鈉和舒坦西林中度敏感,可以聯(lián)合或輪換選用敏感性藥物進(jìn)行治療,防止濫用藥造成耐藥菌株的產(chǎn)生。加強(qiáng)仔豬的飼養(yǎng)管理,搞好環(huán)境衛(wèi)生,強(qiáng)化預(yù)防消毒,定期對免疫抗體監(jiān)測,改善豬舍飼養(yǎng)條件,減少豬群應(yīng)激,采用全進(jìn)全出飼養(yǎng)制度,引進(jìn)豬只后做好隔離觀察,對養(yǎng)殖場顯得尤為重要。

    (編輯:晏兵兵)

    S828

    B

    1006-799X(2016)12-0042-02

    杜海燕(1983-),女,河南獲嘉人,助理獸醫(yī)師,主要從事動(dòng)物疫病診斷與防治工作。

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