絕經(jīng)前后乳腺癌組織E2和ER、TGF-β1、Bcl-2的比較

徐少艷

絕經(jīng)前后乳腺癌組織E2和ER、TGF-β1、Bcl-2的比較

徐少艷

目的探討乳腺癌患者絕經(jīng)前后腫瘤組織雌二醇（E2）、雌激素受體（ER）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）和B-淋巴細(xì)胞白血病-2基因（Bcl-2）表達(dá)水平的變化。方法分別選取絕經(jīng)前乳腺癌患者（n=68）和絕經(jīng)后乳腺癌患者（n=49），術(shù)中取癌組織及癌周正常組織，檢測E2水平、ER陽性率和TGF-β1和Bcl-2的表達(dá)情況。結(jié)果絕經(jīng)后乳腺癌患者癌組織E2水平與絕經(jīng)前患者無顯著差異（P>0.05），且兩者均高于癌周正常組織（P<0.01）；兩組癌組織的TGF-β1和Bcl-2表達(dá)水平均高于癌周正常組織（P<0.01），但組間無差異（P>0.05）；絕經(jīng)前、絕經(jīng)后兩組各有18例（52.9%）、16例（47.1%）ER陽性患者，其陽性率無組間差異（P>0.05）；經(jīng)線性回歸分析，ER陽性患者的癌組織TGF-β1和Bcl-2水平均與其E2含量呈正相關(guān)（P<0.05），而ER陰性患者未表現(xiàn)出顯著相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論絕經(jīng)前和絕經(jīng)后癌組織TGF-β1和Bcl-2的表達(dá)量均受E2水平的影響，且在ER陽性患者中的表現(xiàn)尤為顯著。

乳腺癌；絕經(jīng)；雌激素；TGF-β1；Bcl-2

作為女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展是多種因素共同作用的結(jié)果，其中，雌激素分泌水平和功能異常是其發(fā)病機(jī)制的經(jīng)典學(xué)說[1]。進(jìn)一步研究表明[2]，細(xì)胞凋亡信號通路同樣介導(dǎo)了乳腺癌的發(fā)病進(jìn)程，免疫細(xì)胞異常凋亡和腫瘤細(xì)胞無限制增殖，促成了乳腺癌的免疫逃逸和病灶轉(zhuǎn)移。B-淋巴細(xì)胞白血病-2基因（B-cell lymphorma/leukemia-2 gene,Bcl-2）是與惡性腫瘤的增殖活性密切相關(guān)的凋亡調(diào)控基因之一，相關(guān)研究表明[3]，Bcl-2的組織表達(dá)水平不僅與乳腺癌的起病有關(guān)，與其分型和分期也有一定的聯(lián)系。轉(zhuǎn)化生長因子 β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）在細(xì)胞的生長和分化中起誘導(dǎo)作用，是腫瘤細(xì)胞發(fā)生惡性增殖和遷移始動因素之一[4]。雌激素、Bcl-2及TGF-β1均參與了乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，然而對于三者之間是否有相互聯(lián)系，國內(nèi)外研究報(bào)道甚少。本研究選取女性機(jī)體雌激素水平分水嶺-絕經(jīng)期為觀測點(diǎn)，探討絕經(jīng)后雌激素的自然變更對腫瘤組織TGF-β1和Bcl-2表達(dá)水平的影響。

1　資料與方法

1.1病例資料收集本院2010年3月～2015年7月收治并行手術(shù)切除的乳腺癌患者117例為研究對象，術(shù)前均經(jīng)臨床和影像聯(lián)合診斷為乳腺癌，并由術(shù)后病理確診。其中49例絕經(jīng)后 （完全停經(jīng)時間＞1年）患者為絕經(jīng)后組，年齡49～64（54.3±6.75）歲；病理分型：導(dǎo)管癌41例，導(dǎo)管原位癌18例；臨床分期：Ⅱ期11例，Ⅲ期42例，Ⅳ期6例。另外68例絕經(jīng)前（包括絕經(jīng)期和絕經(jīng)前期）患者為絕經(jīng)前組，年齡33～51（40.3±6.75）歲；病理分型：導(dǎo)管癌44例，導(dǎo)管原位癌24例；臨床分期：Ⅱ期11例，Ⅲ期52例，Ⅳ期5例。兩組在病理分型和臨床分期方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

2　結(jié)果

2.1兩組E2水平變化情況絕經(jīng)后組癌組織E2水平為（153.4±8.4）pg/ml，絕經(jīng)前組為（155.6±9.3）pg/ml，兩者無顯著差異（P>0.05）；絕經(jīng)后組癌周正常組織E2水平為 （32.8±4.3）pg/ml，絕經(jīng)前組為（33.2±3.9）pg/ml，兩者也無顯著差異（P>0.05），且均低于各組的癌組織水平（P<0.01）。

2.2兩組的ER陽性表達(dá)率經(jīng)免疫組化鑒定（圖1），絕經(jīng)前、絕經(jīng)后兩組各有18例（52.9%）、16例（47.1%）ER陽性患者，其陽性率比較無組間差異（P>0.05）。

圖1　乳腺癌組織中陽性ER和陰性ER的免疫組化染色結(jié)果（×100）

圖2　兩組腫瘤組織TGF-β1和Bcl-2表達(dá)情況對比（免疫組織化學(xué)SP二步法DAB顯色×200)

2.3兩組TGF-β1和Bcl-2表達(dá)情況兩組癌組織的TGF-β1和Bcl-2水平均高于癌周正常組織 （P< 0.01，圖2），但無組間差異（P>0.05）。

2.4癌組織TGF-β1和Bcl-2水平與E2含量相關(guān)性分析經(jīng)線性回歸分析，ER陽性患者的癌組織TGF-β1和Bcl-2水平均與其癌組織E2含量呈正相關(guān)（P<0.05，圖3）。Bal-2表達(dá)水平與E2水平的回歸公式為：y(Bcl-2)=0.0032x（E2）＋0.1411,R2= 0.6678（P<0.05）；TGF-β1表達(dá)水平與E2水平的回歸公式為：y(TGF-β1)=0.0047x（E2）-0.025，R2= 0.6547（P<0.05）。

圖3　E2陽性患者癌組織TGF-β1和Bcl-2表達(dá)與E2水平線性關(guān)系

3　討論

乳腺癌是典型激素依賴性疾病之一，據(jù)不同地區(qū)的臨床統(tǒng)計(jì)[5-7]，約55%～65%的乳腺癌患者由雌激素亢進(jìn)引發(fā)。然而，作為雌激素水平急轉(zhuǎn)而下的分水嶺，絕經(jīng)期對乳腺癌患者的生存健康并未表現(xiàn)出改善作用。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)表明[8]，部分絕經(jīng)后乳腺癌患者面臨較絕經(jīng)前等同的腫瘤細(xì)胞增殖率或病灶轉(zhuǎn)移率。本研究針對這一矛盾，對乳腺癌患者絕經(jīng)后的雌激素水平變更及其對細(xì)胞凋亡相關(guān)因子TGF-β1、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響，做了初步研究，并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道對結(jié)果分析如下。

首先，受機(jī)體整體內(nèi)分泌水平的影響，絕經(jīng)后患者的體內(nèi)E2水平發(fā)生大幅度的降低。然而本研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后乳腺癌患者癌組織內(nèi)部E2仍保持高水平，說明乳腺癌病灶組織的E2不受整體雌激素水平降低的影響。

其次，本研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)前后乳腺癌患者癌組織TGF-β1和Bcl-2的表達(dá)水平無組間差異，均顯著高于癌周正常組織。本研究認(rèn)為，TGF-β1和Bcl-2異常分泌和表達(dá)上調(diào)均為乳腺癌的重要致病因素，而且兩者與E2之間，可能存在相互激動作用。既往研究表明[9-11]，E2可通過TGF-β1活化發(fā)揮多重病理功能，如直接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性分化和增殖；促進(jìn)腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，使瘤體細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變，更加適應(yīng)遷徙運(yùn)動，從而加重病灶轉(zhuǎn)移率；提高基質(zhì)金屬蛋白酶活性，加速細(xì)胞外基質(zhì)降解，從而誘發(fā)更為嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)等。同屬于凋亡相關(guān)因子，TGF-β1和Bcl-2之間也有一定的聯(lián)系，體外干預(yù)實(shí)驗(yàn)已證實(shí)[12-13]，TGF-β1可促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，從而發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡作用，協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞的生長和增殖。本研究認(rèn)為，隨著絕經(jīng)后免疫功能的衰退，對腫瘤細(xì)胞的抑制力減弱，致使其繁殖能力增強(qiáng)，是在外圍E2降低的情況下，TGF-β1和Bcl-2表達(dá)量依舊偏高的重要因素之一。然而，TGF-β1和Bcl-2是否為腫瘤內(nèi)部雌激素居高不下的誘導(dǎo)因子，僅能做出初步推論，尚需深入研究加以證實(shí)。

此外，既往研究表明[14-15]，E2對多種細(xì)胞的凋亡過程存在調(diào)試作用，并且主要通過其受體ER來實(shí)現(xiàn)，然而其具體機(jī)制尚無定論。ER是雌激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路作用于靶組織的樞紐組件，也是乳腺癌治療領(lǐng)域的重要研究靶點(diǎn)。以ER干預(yù)為基礎(chǔ)建立起來的激素替代療法和免疫療法改善了數(shù)以萬計(jì)乳腺癌患者的生存前景。正常生理?xiàng)l件下，子宮中的ER主要作用是刺激子宮生長。但在病理?xiàng)l件下，也可能促進(jìn)腫瘤組織的增生。本組病例中僅ER陽性患者的癌組織TGF-β1和Bcl-2水平與E2含量表現(xiàn)出顯著相關(guān)性，在ER陰性患者卻沒有，說明ER陽性乳腺癌患者的TGF-β1和Bcl-2水平變化更容易受到E2水平的影響。以往有研究指出，乳腺癌細(xì)胞的生長受ER和孕激素受體（progesterone receptor,PR）的調(diào)控，其表達(dá)情況對于指導(dǎo)內(nèi)分泌治療意義重大。而本研究則證實(shí)了ER可能是E2調(diào)節(jié)TGF-β1 和Bcl-2表達(dá)、影響腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵物質(zhì)之一。

綜上所述，乳腺癌患者絕經(jīng)后癌組織內(nèi)部的E2含量可獨(dú)立于外周雌激素變更而保持較高水平，且癌組織內(nèi)部 E2水平是決定腫瘤細(xì)胞TGF-β1和Bcl-2的表達(dá)量的關(guān)鍵因素，在ER陽性患者的表現(xiàn)尤為顯著。

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Comparison of E2 and ER,TGF-beta1 and Bcl-2 levels between patients with breast cancer before and after menopause

Xu ShaoyanDepartment of Pathology,People'shospital of Linzi District,Zibo,Shandong,255400,China

ObjectiveTo explore the changes in the estradiol(E2),estrogen receptor(ER),transforming growth factor β1 (TGF-β1),and B-cell lymphorma/leukemia-2 gene(Bcl-2)levels of patients with breast cancer in menopause and post-menopause. MethodsPatients with breast cancer befoer(n=68)and after menopause(n=49)were selected in this study.Both tumor tissues andhealthy tissues around the tumor were obtained during the operation in order to detect the E2 levels,ER positive rate,and the expression of TGF-β1 and Bcl-2.ResultsThere was no significant difference in the E2 levels between the patients with breast caner before and after menopause(P>0.05),and their levels were allhigher than those of the normal tissues around the tumor(P<0.01). The two groups'TGF-β1 and Bcl-2 expression levels were allhigher than those of the normal tissues around the tumor(P<0.01),but the difference between the groups was not significant(P>0.05).There were 18 and 16 cases of positive ER(52.9%and 47.1%) among the premenopausal/postmenopausal patients,and there was no significant difference in the positive rates between the two groups of people(P>0.05).The simple linear regression analysis indicated that there was a positive correlation between the TGF-β1 and Bcl-2 levels in the tumor tissues of patients with positive ER and their E2 contents(P<0.05),while the correlation was not obvious in patients with negative ER(P>0.05).ConclusionThe TGF-beta1 and Bcl-2 expression levels in the tumors tissues of patients before and after menopause are influenced by E2 levels,especially in ER positive patients.

breast cancer;menopause;oestrogen;TGF-beta1;Bcl-2

R 737.9

A

1004-0188（2016）01-0044-04

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.01.016

255400山東 淄博，淄博市臨淄區(qū)人民醫(yī)院病理科

1.2研究方法所有患者均于手術(shù)過程中取腫瘤及腫瘤周邊正常組織，分裝于兩管。A管采用ELISA法檢測雌二醇（E2）含量，試劑盒由上海拜力生物科技有限公司提供。B管采用免疫組織化學(xué)SP二步法檢測雌激素受體（ER）、TGF-β1和Bcl-2表達(dá)情況：制備石蠟病理切片，60℃烘烤12h，二甲苯脫蠟，3.0%H2O2封閉；加一抗（1∶1000），4℃孵育12h，以PBS液反復(fù)漂洗3～4次；加二抗（1∶500），25～28℃孵育30 min；PBS液沖洗，DAB顯色，顯微鏡下觀察。試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。

1.3指標(biāo)評價方法在400倍視野下觀察免疫組化切片，取5個視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)和腫瘤細(xì)胞數(shù)，染成黃色者為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞率=陽性細(xì)胞數(shù)/腫瘤細(xì)胞數(shù)×100%。根據(jù)陽性細(xì)胞率評定陽性細(xì)胞得分：陰性記0分，陽性率1.0%～33%記1分，34%～66%記2分，＞66%記3分；將染色強(qiáng)度也進(jìn)行評分：陰性記0分，淡黃色記1分，黃色記2分，棕黃色記3分。陽性表達(dá)強(qiáng)度=陽性細(xì)胞得分+染色強(qiáng)度得分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例和率表示，比較行χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性考察行線性回歸分析；P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

（2015-08-26）