阿奇霉素對(duì)大鼠胃排空及胃動(dòng)素濃度影響的研究

張梅　董湘玉

阿奇霉素對(duì)大鼠胃排空及胃動(dòng)素濃度影響的研究

張梅董湘玉

目的：觀察大鼠用不同劑量阿奇霉素灌胃后，胃排空時(shí)間及血漿胃動(dòng)素濃度的變化，探討阿奇霉素致胃腸道癥狀的可能機(jī)制。方法：80只SD大鼠隨機(jī)分為10組，對(duì)照組、小劑量1 d組、小劑量3d組、小劑量6d組、中劑量1d組、中劑量3d組、中劑量6d組、大劑量1d組、大劑量3d組、大劑量6d組；觀察組大鼠用阿奇霉素灌胃，小劑量組、中等劑量組、大劑量組分別為3mg/100g、6mg/100g、12mg/100g。所有大鼠先用SPECT行胃排空檢測(cè)，試餐為含有99mTc-DTPA的牛奶，用專用軟件分析原始數(shù)據(jù)，得到全胃半排時(shí)間（GET1/2）、50min末殘留率、胃排空曲線。胃排空檢測(cè)結(jié)束后，經(jīng)腹主動(dòng)脈采集動(dòng)脈血2ml，運(yùn)用放免法測(cè)定血漿胃動(dòng)素濃度。結(jié)果：小劑量組、中劑量組、大劑量組全胃半排時(shí)間明顯縮短，與正常對(duì)照組（64.21±7.24）min比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。觀察組血漿胃動(dòng)素濃度，小劑量組與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05；中劑量組、大劑量組與正常對(duì)照組比較明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。結(jié)論：阿奇霉素可促進(jìn)胃排空。阿奇霉素促進(jìn)胃排空的機(jī)制可能為小劑量下僅為胃動(dòng)素樣作用；中劑量、大劑量時(shí)除胃動(dòng)素樣作用外，有內(nèi)源性胃動(dòng)素參與。

阿奇霉素；大鼠；胃排空；胃動(dòng)素

阿奇霉素是治療支原體肺炎的一線用藥，因其具有抗菌譜廣、組織濃度高、體內(nèi)分布廣、半衰期長(zhǎng)、無須皮試等優(yōu)點(diǎn)在臨床上得到了廣泛應(yīng)用，但在使用過程中，患者胃腸道反應(yīng)強(qiáng)烈，直接影響了該藥的繼續(xù)使用，甚至患者中斷用藥［1］。研究阿奇霉素致胃腸道反應(yīng)的機(jī)制及防治措施顯得尤為重要。已有的資料顯示，大環(huán)類脂類藥物有胃動(dòng)素樣作用，需要研究人員思考的是胃排空的改變是單純由阿奇霉素引起的、還是因?yàn)槟c激素參與了這種改變。核素胃排空檢測(cè)是目前測(cè)定胃動(dòng)力的經(jīng)典方法；胃動(dòng)素是胃腸激素中影響胃腸動(dòng)力的主要因素之一。本研究通過測(cè)定服用不同劑量阿奇霉素、不同時(shí)間段大鼠核素胃排空、血漿胃動(dòng)素含量，進(jìn)一步證實(shí)阿奇霉素對(duì)胃排空的影響，以及這種影響與胃動(dòng)素含量改變的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物80只wistar大鼠，體重（180±20）g，雌雄不限，甘肅省中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（甘）2011-0001。普通實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，自由進(jìn)水、飲食。

1.2藥品與試劑99Mo-99mTc發(fā)生器（北京原子高科有限公司）、亞錫噴替酸標(biāo)記藥盒（江蘇原子能研究所）、胃動(dòng)素放免試劑盒（上海安研醫(yī)學(xué)試劑有限公司）、阿奇霉素（0.125g）（東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司）。

1.3主要設(shè)備單光子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層掃描儀（SPECT）（美國GE公司）、SN-695B型智能放免γ測(cè)量?jī)x（上海日環(huán)儀器）、TD25-WS多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（湖南長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)有限公司）、三洋-20℃低溫冰箱（日本三洋公司）。

1.4實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⑴c分組將80只體重為（180±20）g 的wistar大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為10組：對(duì)照組（8只）；小劑量1天組（8只）、小劑量3天組（8只）、小劑量6天組（8只）；中劑量1天組（8只）、中劑量3天組（8只）、中劑量6天組（8只）；大劑量1天組（8只）、大劑量3天組（8只）、大劑量6天組（8只）。所有動(dòng)物均適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。對(duì)照組：適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后行胃排空檢測(cè)；胃排空檢測(cè)結(jié)束后立即采取動(dòng)脈血2ml。實(shí)驗(yàn)組：所有實(shí)驗(yàn)組大鼠均給予阿奇霉素灌胃，采取不同劑量、不同時(shí)間段進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，即先進(jìn)行胃排空實(shí)驗(yàn)，后采取動(dòng)脈血。

投藥量計(jì)算［2］：根據(jù)人和鼠給藥劑量換算公式dB= dA*RB/RA*（WA/WB）*1/3，阿奇霉素人類使用劑量為10mg/kg，換算為大鼠用藥劑量為60 mg/kg，即6 mg/100g。實(shí)驗(yàn)中AM劑量分別約相當(dāng)于人抗感染等效劑量的0.5、1、1.5和2.5倍。將不同劑量組的大鼠分別在阿奇霉素灌胃后第1天、第3天、第6天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.5放射性核素胃排空實(shí)驗(yàn)所有實(shí)驗(yàn)大鼠在檢查前24小時(shí)禁食、不禁水，清除墊料。將新鮮的高锝酸鹽淋洗液標(biāo)記的99Tc-DTPA加入牛奶，充分?jǐn)噭颍瑢?shí)驗(yàn)餐放射性活度為1mci/ml，5ml針管抽取實(shí)驗(yàn)餐1ml灌胃，灌胃后立即將大鼠仰臥位固定在特殊裝置上，固定完成后將大鼠頭朝里置于SPECT檢查床上，大鼠在探頭中心視野區(qū)。分別于0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50min用單光子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層儀行腹部靜態(tài)平面顯像，共11幀。SPECT探頭配置低能平行孔準(zhǔn)直器，采集條件為：ZOOM 1.5、矩陣128×128、時(shí)間30秒。圖像采集完成，目測(cè)法勾畫全胃感興趣區(qū)（region of interesting，ROI），用胃排空專用軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，獲得全胃時(shí)間—放射性曲線、全胃半排時(shí)間（half gastric emptying time，GET1/2）等參數(shù)。

1.6放免法測(cè)定血漿胃動(dòng)素同期對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組大鼠共80只，放射性核素胃排空檢測(cè)結(jié)束后，開腹暴露腹主動(dòng)脈，5ml針管穿刺腹主動(dòng)脈，采取動(dòng)脈血2ml，將動(dòng)脈血加入含有7.5%EDTA二鈉30μl和抑肽酶40μl的聚苯乙烯試管內(nèi)，混勻，靜置2小時(shí)后放入離心機(jī)管架內(nèi)，3000轉(zhuǎn)/min，10min，取上清液，將裝有上清液的子彈頭試管放入-20℃冰箱內(nèi)備用。實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)將標(biāo)本放在4℃冰箱冷藏，實(shí)驗(yàn)前2小時(shí)將標(biāo)本取出。再次3000轉(zhuǎn)/min，10min，取上清液。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血漿motilin的含量，嚴(yán)格按照說明書步驟操作。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。P＜0.05為差異有顯著性意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠全胃半排時(shí)間對(duì)照組全胃半排時(shí)間是（54.48±12.08）min，小劑量組（小劑量組vs對(duì)照組，t=2.910，P＜0.05）、中劑量組（中劑量組vs對(duì)照組，t= 2.781，P＜0.05）、大劑量組（大劑量組vs對(duì)照組，t= 3.484，P＜0.05）胃排空明顯加快，與對(duì)照組比較，半排時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組組內(nèi)不同時(shí)間段全胃半排時(shí)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。結(jié)果提示，阿奇霉素可促進(jìn)胃排空，促進(jìn)胃排空能力隨劑量增加而增加；在同一劑量下，排空能力未見改變。見表1。

2.250min末胃殘留率比較對(duì)照組50min末胃殘留率為（44.51±7.43）%，小劑量組（小劑量組vs對(duì)照組，t= 3.474，P＜0.05）、中劑量組（中劑量組vs對(duì)照組，t= 2.327，P＜0.05）、大劑量組（大劑量組vs對(duì)照組，t= 2.681，P＜0.05）胃殘留率明顯降低，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組組內(nèi)不同時(shí)間段胃殘留率比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。見表1。

表1　各組全胃半排時(shí)間及50分鐘末殘留率和胃動(dòng)素濃度

2.3胃排空曲線胃排空曲線是以時(shí)間（min）為橫坐標(biāo)、以不同測(cè)定點(diǎn)胃內(nèi)放射性計(jì)數(shù)與即可放射性計(jì)數(shù)百分比為縱坐標(biāo)。觀察時(shí)間點(diǎn)放射性計(jì)數(shù)百分比越低提示胃排空能力更強(qiáng)、排空速度更快。本研究中，除第1次（即刻）采集點(diǎn)外，所有觀察組各時(shí)間點(diǎn)胃內(nèi)放射性計(jì)數(shù)百分比明顯低于對(duì)照組，直觀提示觀察組胃排空加快。見圖1。

圖1　各組胃排空曲線

2.4各組大鼠血漿胃動(dòng)素比較對(duì)照組血漿胃動(dòng)素為（64.21±7.24）ng/L，小劑量1d、3d、6d胃動(dòng)素含量分別為（67.84±7.63）ng/L、（60.15±10.28）ng/L、（66.80± 9.05）ng/L，與對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05；中劑量組（中劑量組vs對(duì)照組，t=4.073，P＜0.05）、大劑量組（大劑量組vs對(duì)照組，t=3.965，P＜0.05）不同時(shí)間段血漿胃動(dòng)素水平明顯增高，與對(duì)照組比較，差異有顯著性。

2.5全胃半排時(shí)間（GET1/2）與血漿胃動(dòng)素相關(guān)性分析全胃半排時(shí)間（GET1/2）與血漿胃動(dòng)素濃度呈負(fù)相關(guān)，r=-0.785，P＜0.01。即血漿胃動(dòng)素濃度越高，胃排空越快。結(jié)果證實(shí)阿奇霉素可通過提高血漿胃動(dòng)素濃度，加快胃排空。

3　討論

胃是消化系統(tǒng)的重要組成部分，具有儲(chǔ)存食物、消化食物、分泌胃腸激素的功能。目前認(rèn)為，胃可分為近端胃、胃中間橫帶、遠(yuǎn)端胃，不同區(qū)域在食物排空的不同階段發(fā)揮著特殊功能［3］。Indireshkumar等［4］提出了“蠕動(dòng)泵”和“壓力泵”的概念，胃排空與平滑肌的收縮力、幽門的阻力以及幽門與十二指腸運(yùn)動(dòng)的協(xié)調(diào)性有緊密關(guān)系。在生理狀態(tài)下，液體通過壓力差排空，而固體、半固體主要通過胃竇的蠕動(dòng)和十二指腸運(yùn)動(dòng)的協(xié)調(diào)性排空。中樞神經(jīng)系統(tǒng)、胃腸激素、胃動(dòng)素受體激動(dòng)劑、食物成分、食物形態(tài)及食物顆粒大小均能影響胃排空速度。阿奇霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，研究認(rèn)為有促胃排空作用，這一作用過程中是否有內(nèi)源性胃動(dòng)素參與，是本研究的重點(diǎn)。

本研究中，不同劑量組阿奇霉素均可引起胃排空增快，與對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）。與李娟等［5］的研究結(jié)果一致，研究人員對(duì)大鼠按不同劑量阿奇霉素灌胃，用酚紅測(cè)定胃排空率，研究發(fā)現(xiàn)不同劑量組胃排空均較對(duì)照組排空加快。李靜等［6］認(rèn)為阿奇霉素可通過增加胃內(nèi)壓促進(jìn)胃排空，同時(shí)具有劑量依賴性，大劑量作用出現(xiàn)時(shí)間早，作用效應(yīng)更強(qiáng)。阿奇霉素與紅霉素同屬大環(huán)內(nèi)酯類，其促進(jìn)胃排空的機(jī)理一致。董燕平［7］的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大環(huán)內(nèi)酯類可改變胃電節(jié)律，通過提高胃電頻率、增高幅值促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)作用呈量效關(guān)系，小劑量下可誘發(fā)IMCⅢ相，劑量增加后可致胃腸平滑肌強(qiáng)烈收縮，引起惡心、嘔吐等不適。但胃排空時(shí)間的縮短與血漿胃動(dòng)素的升高并不同步，在本研究中，小劑量下全胃半拍時(shí)間較對(duì)照組縮短，分別（54.48±12.08）min、（42.54±5.21）min、（41.37±6.43）min、（43.09±8.77）min，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；而同期血漿胃動(dòng)素濃度并未見改變，（64.21±7.24）ng/L、（67.84±7.63）ng/L、（60.15±10.28）ng/ L、（66.80±9.05）ng/L，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中劑量、大劑量組，胃動(dòng)素變化明顯，與對(duì)照組比較，差異有顯著性，P＜0.05。提示阿奇霉素促進(jìn)胃排空的作用，在小劑量下僅為胃動(dòng)素樣作用，劑量增大以后，除胃動(dòng)素樣作用外，也有內(nèi)源性胃動(dòng)素參與。

胃動(dòng)素受體激動(dòng)劑研究顯示［8］，胃動(dòng)素受體激動(dòng)劑影響了食管、管道下段括約肌及胃動(dòng)力，增加了胃內(nèi)壓力，大劑量時(shí)食管運(yùn)動(dòng)功能紊亂，出現(xiàn)低振幅及收縮能力下降。研究［9］顯示紅霉素可以改善糖尿病胃輕癱和胃排空障礙，紅霉素增加了低位食管壓力，抑制了餐后的胃食管反流［10］。胃動(dòng)素受體激動(dòng)劑可以明顯加速胃排空，胃動(dòng)素受體激動(dòng)劑引發(fā)的是不規(guī)則的強(qiáng)烈的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的胃竇收縮［11］，這不同于胃竇規(guī)律的收縮。

綜上所述，阿奇霉素可促進(jìn)胃排空，促進(jìn)胃排空的作用與劑量大小有關(guān)；中劑量、大劑量阿奇霉素可改變血漿胃動(dòng)素濃度；阿奇霉素促進(jìn)胃排空的作用于血漿胃動(dòng)素濃度的改變不同步，小劑量下僅為胃動(dòng)素樣作用；中劑量、大劑量時(shí)，除了胃動(dòng)素樣作用外，可能內(nèi)源性胃動(dòng)素的作用更明顯。

［1］王海生，王海燕.阿奇霉素不良反應(yīng)及預(yù)防分析［J］.臨床合理用藥，2009，2（1）:53.

［2］孫敬方.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:357-358.

［3］楊鵬，嚴(yán)祥，劉純，等.功能性消化不良患者胃中間橫帶面積百分比與胃排空的關(guān)系［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)＜醫(yī)學(xué)版＞，2009，35（2）:20-23.

［4］Depoortere I，Thijis T，Van Assche G，et al.Dose-dependent effects of recombination human inteleukin-11 on contractile properties in rabbit 2，4，6-trinitrobenzene sulfonic acid colitis［J］.J Pharmacol Exp Ther，2000，294（3）:983-990.

［5］李娟，朱玉云，王德才.阿奇霉素對(duì)胃排空及胃平滑肌條收縮活動(dòng)的影響［J］.中華消化雜志，2002，22（5）:312-313.

［6］李靜，鄧麗君，陸杰.阿奇霉素對(duì)胃內(nèi)壓和胃電的影響［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，35（9）:1355-1357.

［7］董燕平.紅霉素對(duì)小兒胃電節(jié)律的影響46例分析［J］.中華兒科雜志，1999，37（3）:151.

［8］Korimilli A，parkman HP.Effect of atilmotin，a motilin receptor agonist，on esophageal，lower esophageal sphincter and gastric pressures［J］.Dig Dis Sci，2010，55（2）:300-306.

［9］Janssens J，Peeters TL，Vantrappen G，et al.Improvement of gastric emptying in diabetic gastroparesis by erythromycin preliminary studies［J］.N Engl J Med，1990，322（15）:1028-1031.

［10］Tack J，Janssens J，Vantrappen G，et al.Effect of erythromycin on gastric motility in controls and in diabetic gastroparesis［J］.Gastroenterology，1992，103（1）:72-79.

［11］Mitselos A，Vanden Berghe P，Peeters TL，et al.Differences in motilin receptor desensitization after stimulation with motilion or motilides are due to alternative receptor trafficking［J］.Biochem pharmacol，2008，75 （5）:1115-1128.

Effects of Azithromycin on gastric empting and plasma motilin in rats

Zhang Mei1，Dong Xiangyu2.1.Department of Pediatrics，General Hospital of Lanzhou Petrochemical，Lanzhou 730060，China；2.Department of Pediatrics，the Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou 730030，China

Objective:To investigate the effects of azithromycin on gastric emptying and plasma motilin in rats，thus exploring mechanism of azithromycin to Gastrointestinal Symptom.Methods:There were 10 groups randomly dividing in eighty Sprague-Dawley（SD）rats，i. e，the normal control group，small doses 1 day group，small doses 3 day group，small doses 6 day group，middle doses 1 day group，middle dos-es 3 day group，middle doses 6 day group，large doses 1 day group，large doses 3 day group，large doses 6 day group，8 in each group.The rats of observer groups were gastrogavaged by azithromycin.The dosage were 3mg/100g，6mg/100g and 12mg/100g，respectively.First，gastric emptying was measured in unanesthetized rats by single photon emission computed tomography（SPECT）after gavaged milk loaded with technetium-99m diethylenetriamine pentaacetic acid（（99m）Tc-DTPA），the gastric half-emptying time were calculated.Subsequently，blood was collected from the abdominal aorta to measure plasma motilin.Results:GET1/2 were more significantly decreased in observer groups than in control groups.There was no significant in concentration of motilin in small dose groups compared to control groups.The plasma motilin of latter groups were significantly increased compared to control groups，P＜0.05.Conclution:Azithromycin could promote gastric emptying.Not only motilin-like effection，but also endogenous motilin participation took part in the mechanisms of promoting gastric emptying.

作者單位：730060甘肅 蘭州，蘭州石化總醫(yī)院內(nèi)科（張梅）；730030甘肅 蘭州，蘭州大學(xué)第二醫(yī)院兒科（董湘玉）

Azithromycin；rats；gastric emptying；motilin

A

1004-2725（2016）03-0165-04

張梅，E-mail:2050141944@qq.com