湖南永州地區(qū)豬乙型腦炎感染情況血清學(xué)調(diào)查

廖光宇，劉　成，肖建華，陳名海，李陽(yáng)玉，陳名鋒（.湖南省永州市藍(lán)山縣畜牧水產(chǎn)局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 永州 45800；.湖南省永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物科學(xué)技術(shù)系，湖南 永州 45000；.湖南省永州市藍(lán)山縣楠市鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站，湖南 永州 45800）

湖南永州地區(qū)豬乙型腦炎感染情況血清學(xué)調(diào)查

廖光宇1，劉成2，肖建華3，陳名海1，李陽(yáng)玉1，陳名鋒1（1.湖南省永州市藍(lán)山縣畜牧水產(chǎn)局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 永州 425800；
2.湖南省永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物科學(xué)技術(shù)系，湖南 永州 425000；
3.湖南省永州市藍(lán)山縣楠市鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站，湖南 永州 425800）

為準(zhǔn)確掌握湖南永州地區(qū)豬乙型腦炎（JE）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)豬JE）感染情況的流行動(dòng)態(tài)，筆者于2014年5月至2015 年1月從該地區(qū)11個(gè)縣（區(qū)）采集的801份豬血清用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法（以下簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA法）檢測(cè)豬的JEV IgG抗體。結(jié)果顯示，801份血清中，豬JE抗體陽(yáng)性371份，豬JE抗體陽(yáng)性率為46.32%，表明湖南永州地區(qū)存在普遍的豬JE感染。本地區(qū)不同區(qū)域、不同季節(jié)甚至豬不同年齡階段，豬群JE抗體陽(yáng)性率均有所不同，說(shuō)明湖南永州地區(qū)豬JE感染具有一定的地域性和季節(jié)性。

乙型腦炎；血清學(xué)；調(diào)查；豬

日本乙型腦炎（Japanese encephalitis，JE）簡(jiǎn)稱(chēng)乙腦，是由日本乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）引起的一種重要的人獸共患傳染病，是嚴(yán)重威脅人畜健康的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性傳染病。日本乙型腦炎病毒（JEV）屬于黃病毒科黃病毒屬，最為常見(jiàn)的以三帶嚎庫(kù)蚊為主要傳播媒介的病毒性腦炎，豬是乙型腦炎病毒（JEV）的重要儲(chǔ)存宿主和擴(kuò)增宿主，是乙型腦炎（JE）的主要傳染源，是引起母豬繁殖障礙的主要病原之一，對(duì)豬的致死率不高，但可引起懷孕母豬流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎，也可引起公豬睪丸急性炎癥反應(yīng)或不育，可導(dǎo)致懷孕母豬流產(chǎn)、死胎，導(dǎo)致公豬睪丸炎，可能引起仔豬神經(jīng)癥狀，從而給生豬養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失。

為準(zhǔn)確掌握湖南永州地區(qū)豬乙型腦炎（JE）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)豬JE）感染情況的流行動(dòng)態(tài)，筆者于2014年5月至2015年1月從該地區(qū)11個(gè)縣（區(qū)）采集的801份豬血清用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法（以下簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA法）檢測(cè)豬的JEV IgG抗體。結(jié)果顯示，801份血清中，豬JE抗體陽(yáng)性371份，豬JE抗體陽(yáng)性率為46.32%，表明湖南永州地區(qū)存在普遍的豬JE感染。不同區(qū)域、不同季節(jié)甚至豬不同年齡階段，豬群JE抗體陽(yáng)性率均有所不同，說(shuō)明了湖南永州地區(qū)豬JE感染具有一定的地域性和季節(jié)性。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1待檢血清對(duì)湖南永州地區(qū)的冷水灘區(qū)、零陵區(qū)、祁陽(yáng)縣、東安縣、雙牌縣、道縣、江永縣、江華縣、寧遠(yuǎn)縣、藍(lán)山縣和新田縣共9縣2區(qū)的32個(gè)豬場(chǎng)隨機(jī)采集801頭豬的血樣，用臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（5810R）離心血樣，分離血清，血清樣品清亮，無(wú)溶血，置-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2主要儀器及器材酶標(biāo)儀（MULTISKAN MK3），購(gòu)自Thermo公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（5810R），購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司。50μL、100μL、200μL精確微量移液器，一次性移液器吸頭等。

1.1.3主要試劑豬乙型腦炎酶聯(lián)免疫（ELISA）診斷試劑盒，由武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)：140307。主要檢測(cè)豬血清中乙型腦炎病毒IgG抗體。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，主要步驟如下：1：40稀釋待檢血清（195μL樣品稀釋液中加放5μL待檢血清）、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（23μL樣品稀釋液中加放6μL對(duì)照血清），取預(yù)包被的板，每孔加100μL待檢血清或?qū)φ昭澹?7℃溫育30min；每孔加200μL洗滌液洗板5次，每次靜置3min；每孔加酶標(biāo)二抗100μL，置 37℃溫育30min；洗滌5次，方法同上；每孔加底物A液和B液各50μL，室溫避光顯色10min；每孔加終止液50μL，10min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

1.2.2結(jié)果判定以空白空調(diào)零，在酶標(biāo)儀上測(cè)各空OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630值大于或等于0.6；陰性對(duì)照孔平均OD630值必須小于0.2；樣品OD630值大于0.42，判為陽(yáng)性，OD630值在0.38～0.42之間，判為可疑，OD630值小于0.38，判為陰性。

2　結(jié)果與分析

2.1湖南永州地區(qū)不同縣（區(qū)）各場(chǎng)豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果2014～2015年，在對(duì)湖南永州地區(qū)11個(gè)縣（區(qū)）的801份血清進(jìn)行豬JE抗體檢測(cè)中，抗體陽(yáng)性率為46.32%，表明湖南永州地區(qū)存在普遍的豬JE感染，其中，道縣、江華縣、寧遠(yuǎn)縣、藍(lán)山縣、新田縣5縣的豬JE抗體陽(yáng)性率均超過(guò)50%。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　2014～2015年湖南永州地區(qū)豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2湖南永州地區(qū)不同地域各場(chǎng)豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表2檢測(cè)結(jié)果顯示，豬JE具有明顯的區(qū)域性，主要是湖南永州地區(qū)南6縣，豬JE血清抗體陽(yáng)性率達(dá)到56.36%。由于南6縣地區(qū)人口密集，養(yǎng)豬場(chǎng)集中，給蚊蠅滋生及傳播本病創(chuàng)造較好的條件。根據(jù)調(diào)查顯示，該地區(qū)大部分豬場(chǎng)每年的 3～4月份會(huì)進(jìn)行豬JE疫苗的免疫，但由于以上客觀因素存在，目前還不能鑒定這么高的抗體陽(yáng)性率是為自然感染所致，還是疫苗免疫產(chǎn)生的抗體，該部分工作還有待于繼續(xù)研究。但是，根據(jù)臨床發(fā)病情況的調(diào)查，發(fā)現(xiàn)豬JE發(fā)病率較低，一般為零星散發(fā)。

表2　不同地域豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.32014～2015年湖南永州地區(qū)各季節(jié)豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果

在2014年5月至2015年1月的血清樣品的豬JE抗體檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)5、6月份豬JE抗體陽(yáng)性率較低，8月份血清抗體陽(yáng)性率最高，達(dá)到55.99%，7月份緊隨其后，達(dá)到47.50%見(jiàn)表3。在對(duì)豬進(jìn)行JE免疫后，2～3周產(chǎn)生抗體，所以5、6月份的抗體水平還沒(méi)有達(dá)到峰值，抗體陽(yáng)性率較低。1～2月后抗體水平達(dá)到更高水平，抗體陽(yáng)性率達(dá)到較高水平，起到更好的免疫保護(hù)效果，但由于夏季是豬JE的流行季節(jié)，再次感染幾率很大，免疫保護(hù)效果仍然不能達(dá)到理想的抗體陽(yáng)性率。

表3　各季節(jié)豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.42014～2015年湖南永州地區(qū)各年齡階段的豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果

在對(duì)各階段的豬JE的血清抗體檢測(cè)中，母豬的血清抗體陽(yáng)性率達(dá)到76.67%，公豬的血清抗體陽(yáng)性率達(dá)到75.00%，由于公母豬已多次免疫，說(shuō)明免疫效果不太好；而哺乳仔豬、保育豬、育肥豬的JE血清抗體陽(yáng)性率分別為36.20%、35.56%、38.89%見(jiàn)表4。由于哺乳仔豬、保育豬和育肥豬一般不做免疫，抗體陽(yáng)性說(shuō)明該階段豬JE感染率還是比較高的，由此也可推斷公母豬抗體陽(yáng)性率并不全是免疫所致，也有野毒感染的原因。

表4　各年齡階段的豬JE血清抗體檢測(cè)結(jié)果

3　小結(jié)與討論

3.1JE是一種人畜共患的自然疫源性傳染病，多種動(dòng)物和人感染后都可以成為本病的傳染源，豬的感染最為普遍。豬感染后出現(xiàn)病毒血癥的時(shí)間較長(zhǎng)，血液中的病毒含量較高，媒介蚊又嗜其血，而且豬的飼養(yǎng)量數(shù)量大，更新快，容易通過(guò)豬—蚊—豬的循環(huán)，擴(kuò)大病毒的傳播。一般預(yù)防此病是在流行季節(jié)來(lái)到之前進(jìn)行免疫，給動(dòng)物注射疫苗，不但可以預(yù)防此病的流行，而且還可以降低動(dòng)物的帶毒率。所以及時(shí)而準(zhǔn)確的血清抗體檢測(cè)，對(duì)于預(yù)防和降低乙型腦炎的流行具有重大意義。為了掌握豬JE在湖南永州地區(qū)的免疫保護(hù)效果及感染流行情況，從而為防治該病作出合理的評(píng)估，在該地區(qū)11個(gè)縣（區(qū)）的801份豬血清樣品的JE抗體檢測(cè)中，血清抗體陽(yáng)性數(shù)達(dá)到371份，抗體陽(yáng)性率達(dá)到46.32%，可見(jiàn)湖南永州地區(qū)的豬JE感染率較高，存在普遍的豬JE感染。

3.2豬JE具有明顯的季節(jié)性，蟲(chóng)媒是傳播JE的重要媒介。夏秋季節(jié)是蚊類(lèi)大量孳生的季節(jié)，也是JE的高發(fā)季節(jié)。因此，JE的免疫一般在流行季節(jié)來(lái)到之前進(jìn)行免疫。在2014年5月到2015年1月的血清樣品的乙型腦炎抗體檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)5、6月份JE抗體陽(yáng)性率不到40%，7、8月份陽(yáng)性率達(dá)到50.00%，而后抗體陽(yáng)性率下降。在對(duì)豬進(jìn)行JE免疫后，2～3周產(chǎn)生抗體，所以5、6月份的抗體水平還沒(méi)有達(dá)到峰值，抗體陽(yáng)性率較低。1～2個(gè)月后抗體水平達(dá)到更高水平，抗體陽(yáng)性率達(dá)到較高水平，起到更好的免疫保護(hù)效果，但由于夏季是乙型腦炎的流行季節(jié)，再次感染幾率很大，應(yīng)加強(qiáng)防控。

3.3本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)各年齡豬群豬JE抗體陽(yáng)性檢出率有所差別，哺乳仔豬、保育豬的JE血清抗體陽(yáng)性率分別為36.2%、35.56%。而永州位于湘南南部，地勢(shì)西南高，東北低，嚴(yán)冬期短，春夏多雨，日照充足，南（山區(qū)）北（丘陵）氣候差異較大，適宜于蚊蟲(chóng)繁殖，是湖南省JE的高發(fā)地區(qū)之一。應(yīng)加強(qiáng)對(duì)小規(guī)模飼養(yǎng)場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)的JE監(jiān)測(cè)，重點(diǎn)管理好幼齡動(dòng)物，控制JE流行區(qū)的家畜和家禽運(yùn)往非流行區(qū)，加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物（豬）和易感人群的預(yù)防接種、消滅傳播媒介等。

［1］殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)［M］.第二版.北京：科學(xué)出版社，1997：633-641.

［2］余波，等.豬流行性乙型腦炎的血清學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37（4）：222-223.

［3］范行良，等.流行性乙型腦炎減毒活疫苗SA14-14-2E基因的穩(wěn)定性［J］.病毒學(xué)報(bào)，2002，18（01）：39-47.

［4］趙承保，等.永州市40年間流行性乙型腦炎流行病學(xué)分析［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，1998，25（04）：462-463.

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.030

廖光宇（1958～），湖南省永州市藍(lán)山縣人，大專(zhuān)，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物養(yǎng)殖與疫病防控和動(dòng)物疫病檢疫