竹鼠沙門(mén)氏菌與鏈球菌混合感染的診斷

祝　宇，時(shí)永強(qiáng)，王奇惠，楊子江 ，曲偉杰*

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明650201）

竹鼠沙門(mén)氏菌與鏈球菌混合感染的診斷

祝宇，時(shí)永強(qiáng)，王奇惠，楊子江 ，曲偉杰*

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明650201）

∶竹鼠是食用和藥用的上等野味補(bǔ)品，市場(chǎng)空間巨大，隨著近年來(lái)人工養(yǎng)殖的繁盛，竹鼠的有關(guān)疾病日益增多。本文對(duì)前來(lái)云南農(nóng)業(yè)大學(xué)附屬動(dòng)物醫(yī)院就診的竹鼠進(jìn)行了臨床檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查。通過(guò)病理剖檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定、生化試驗(yàn)及體內(nèi)外寄生蟲(chóng)檢查等，診斷竹鼠是由于沙門(mén)氏菌和鏈球菌混合感染引起的死亡。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明分離得到的菌株對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟、慶大霉素極度敏感，對(duì)環(huán)丙沙星等高度敏感；對(duì)氨芐青霉素、恩諾沙星等中度敏感；對(duì)諾氟沙星、新霉素等低敏敏感；對(duì)環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素等不敏感。

∶竹鼠；沙門(mén)氏菌；鏈球菌；藥敏試驗(yàn)

1　前言

竹鼠又名竹貍、芒貍、竹鼬、冬毛老鼠、竹根豬、冬芒貍等，因主要取食竹子而得名。在生物分類學(xué)中屬于脊椎動(dòng)物亞門(mén)、哺乳綱、嚙齒目、竹鼠科、竹鼠屬，是一種較大的嚙齒類動(dòng)物。中華竹鼠主要分布在我國(guó)的中部和南部地區(qū)。越南和緬甸北部等也有分布［1］。中華竹鼠是一種皮肉兼用、營(yíng)養(yǎng)和藥用經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的珍貴野生動(dòng)物。隨著人們生活水平的不斷提升，竹鼠的需求量也越來(lái)越大，捕捉野生竹鼠家養(yǎng)也很難滿足市場(chǎng)的需求。竹鼠以竹子、植物的根莖和農(nóng)作物秸稈作為主食，馴化后能以各種植物秸稈為食。我國(guó)從20世紀(jì)90年代初開(kāi)始人工馴養(yǎng)竹鼠取得成功后，至今已經(jīng)成為市場(chǎng)需求量大、風(fēng)險(xiǎn)低、經(jīng)濟(jì)效益和開(kāi)發(fā)價(jià)值高的新型特種養(yǎng)殖業(yè)［2］。

然而，隨著竹鼠養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，由于缺乏竹鼠營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)、環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)和品種標(biāo)準(zhǔn)等，在飼養(yǎng)竹鼠時(shí)飼喂?fàn)I養(yǎng)比例不當(dāng)、籠舍設(shè)計(jì)不合理等問(wèn)題，導(dǎo)致竹鼠的發(fā)育不良，抵抗力下降，各類疾病隨之增多［3］，嚴(yán)重影響了竹鼠養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。而在中華竹鼠的飼養(yǎng)技術(shù)方面也有報(bào)道報(bào)告［4］，鏈球菌病是由肺炎鏈球菌引起的一種急性敗血性傳染病。本次通過(guò)臨床觀察、病理解剖、細(xì)菌分離鑒定、生化試驗(yàn)及藥敏試驗(yàn)等為竹鼠沙門(mén)氏菌和鏈球菌混合感染的診斷提供參考。

2　發(fā)病情況

6只病例來(lái)自云南省彌勒市一中華竹鼠養(yǎng)殖場(chǎng)，該竹鼠養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)模約有400只左右。送達(dá)時(shí)已有2只死亡。據(jù)主訴近日養(yǎng)殖場(chǎng)竹鼠開(kāi)始出現(xiàn)少食，部分食欲廢絕，精神萎靡，毛發(fā)粗亂，隨后腹瀉、漸漸消瘦、脫水，進(jìn)而死亡。死前沒(méi)有進(jìn)行任何藥物治療。

3　臨床癥狀

對(duì)送檢的6只發(fā)病竹鼠（其中2只已死亡）進(jìn)行臨床觀察，病鼠呈流淚、噴嚏、消瘦、被毛粗亂、身倦、嗜睡、繼而尿失禁。病程平均3～5d，食欲廢絕后，糞便稀軟，發(fā)生腹瀉。肛門(mén)附近被稀軟糞便附著，但視診在病鼠體表并沒(méi)發(fā)現(xiàn)寄生蟲(chóng)。

4　病理剖檢

解剖4只病鼠和2只死鼠。共同的病理變化為皮毛粗亂、腹部、全身皮膚沒(méi)有出血點(diǎn)，肛門(mén)周圍有糞便；心外膜有白色囊狀物；肝臟腫大且有壞死灶，紫褐色；脾有出血性壞死灶；腎臟均正常；肺腫大出血；腸鼓氣、腸黏膜出血等病變。視診，沒(méi)有檢出寄生蟲(chóng)及寄生蟲(chóng)卵等。（見(jiàn)下圖1-4）

圖1　肝臟壞死灶　

圖2　脾臟腫大

圖3　腸黏膜出血

圖4　肺臟出血

5　實(shí)驗(yàn)室檢查

5.1材料與方法

5.1.1材料

5.1.1.1病料∶來(lái)自云南省昆明市彌勒市一中華竹鼠養(yǎng)殖場(chǎng)的6只病鼠的病料，對(duì)竹鼠分別編號(hào)1-6。

5.1.1.2主要儀器工具和設(shè)備∶手術(shù)剪刀、鑷子、手術(shù)刀，手術(shù)器械托盤(pán)，橡膠手套，無(wú)菌口罩，自封袋，記號(hào)筆，新潔爾滅，解剖托盤(pán)、工業(yè)用鹽、載玻片、玻璃棒、小瓶（青霉素瓶）、瓷盆、小燒杯、過(guò)濾網(wǎng)、普通肉湯、麥康凱培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、細(xì)菌微量生化管、藥敏紙片、單人單面超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫?fù)u床、顯微鏡等。

5.2.1方法

5.2.1.1細(xì)菌增菌在無(wú)菌超凈工臺(tái)上用接種環(huán)挑取適量組織病料，接種到普通肉湯培養(yǎng)基和LB瓊脂培養(yǎng)基，于37℃恒溫培養(yǎng)16-24h。

5.2.1.2細(xì)菌分離培養(yǎng)使用接種環(huán)將增菌培養(yǎng)的菌種接種于普通瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基37℃恒溫培養(yǎng)18-24h，觀察菌落生長(zhǎng)情況；選取可疑單菌在普通肉湯中增菌，一部分接種于麥康凱培養(yǎng)基37℃恒溫培養(yǎng)18-24h，觀察菌落生長(zhǎng)情

況；另一部分接種血平板和LB瓊脂（藥敏）上培養(yǎng)37℃，16-24h［5］。然后再分別挑取單個(gè)菌落經(jīng)革蘭氏染色，在光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)菌的形和染色情況。

5.2.1.3細(xì)菌生化試驗(yàn)細(xì)菌的生化鑒定參照姚火春等的方法［6］進(jìn)行，挑取可疑單菌置于盛有葡萄糖、乳糖、甘露醇、麥芽糖、硫化氫、VP、吲哚等微量生化反應(yīng)管中，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果；另一部分挑取可疑單菌置于盛有七葉苷、甘露醇、山梨醇、乳糖、菊糖、棉實(shí)糖、海藻糖、水楊苷等微量生化反應(yīng)管中，37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果。

5.2.1.4藥敏試驗(yàn)將增菌培養(yǎng)的菌種混合后用涂布法接種于LB培養(yǎng)基，取10種藥敏紙片做藥敏試驗(yàn)37℃恒溫培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果。

6　結(jié)果

6.1細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果一部分，37℃恒溫培養(yǎng)18-24h后分離得到一種菌落，命名為M。M在普通瓊脂培養(yǎng)基上形成中等大小、圓形、表面光滑、無(wú)色半透明、邊緣整齊的菌落；而在麥康凱培養(yǎng)基上形成淺橙色菌落（見(jiàn)圖5）；經(jīng)過(guò)鏡檢呈兩端頓圓的革蘭氏陰性菌，疑為沙門(mén)氏菌。另一部分，在血瓊脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑菌落，直徑為0.5mm-1.0mm。灰白色、半透明、表面光滑、卵圓形、邊緣整齊，周圍有α溶血環(huán)。然后從平板上挑去菌落經(jīng)革蘭氏染色，進(jìn)行鏡檢，觀察呈鏈狀排列，疑似鏈球菌。

圖5　M菌株在麥康凱上的結(jié)果

6.2生化試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，根據(jù)生化特性鑒定，可以確定M菌株為沙門(mén)氏菌。根據(jù)文獻(xiàn)［7］該結(jié)果生化指標(biāo)符合鏈球菌屬生化指標(biāo)。

表1　

6.3藥敏試驗(yàn)結(jié)果由表2可知分離得到的菌株對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟、慶大霉素極度敏感，環(huán)環(huán)丙沙星等高度敏感；對(duì)氨芐青霉素、恩諾沙星等中度敏感；對(duì)諾氟沙星、新霉素等低敏敏感；對(duì)環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素等不敏感。

表2　

7　防治

每天清除廄舍內(nèi)和運(yùn)動(dòng)場(chǎng)上的糞便，讓廄舍通風(fēng)、干燥、保持清潔，空氣清新，全群添加新霉素混飼預(yù)防，隔離病鼠并且肌肉注射頭孢吡肟，通過(guò)用藥一個(gè)療程3d后病鼠好轉(zhuǎn)，全場(chǎng)未再出現(xiàn)新的病例。

8　討論

現(xiàn)今，腹瀉和肺炎等是竹鼠最常見(jiàn)的疾病，隨著竹鼠養(yǎng)殖也的空前發(fā)展，養(yǎng)殖竹鼠所需要面對(duì)的疾病挑戰(zhàn)也越來(lái)越多，往往不再是單一感染，而是呈混合式以及續(xù)發(fā)式感染，所以防治的難度也越來(lái)越高。本次通過(guò)臨床觀察、病理解剖、細(xì)菌分離鑒定、生化試驗(yàn)及藥敏試驗(yàn)、體內(nèi)外寄生蟲(chóng)檢查等確認(rèn)該竹鼠是沙門(mén)氏菌和肺炎鏈球菌混合感染。對(duì)于沙門(mén)氏菌［8］和鏈球菌型肺炎的診治已有相關(guān)報(bào)道，但兩者混合感染的報(bào)道不多。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明分離的菌種對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟、慶大霉素極度敏感，對(duì)環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素等不敏感，即有耐藥性。

在臨床上抗沙門(mén)氏菌的首選藥物是頭孢類藥物，選擇高敏感藥物抗鏈球菌感染往往能得到良好的治療。藥敏試驗(yàn)結(jié)果中環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素等有耐藥性和以前報(bào)道不一致，可能是在養(yǎng)殖過(guò)程中養(yǎng)殖場(chǎng)在飼料中的用藥有關(guān)系，讓菌株產(chǎn)生了耐藥性，也可能菌株產(chǎn)生了變異，使其具有了耐藥性。

從竹鼠病理解剖和臨床癥狀判斷，根據(jù)本試驗(yàn)藥敏結(jié)果，建議該養(yǎng)殖場(chǎng)選用頭孢類藥物進(jìn)行沙門(mén)氏菌感染的治療。對(duì)于鏈球菌型肺炎的感染，不使用藥物治療，用其他適當(dāng)治療方式亦可恢復(fù)。但是鏈球菌型肺炎也可能是續(xù)發(fā)感染。養(yǎng)殖戶也應(yīng)做好應(yīng)對(duì)竹鼠非傳染型和傳染型疾病的提前預(yù)防，減少發(fā)病率及死亡［9］。

9　小結(jié)

試驗(yàn)通過(guò)臨床觀察、病理剖檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化試驗(yàn)、體內(nèi)外寄生蟲(chóng)檢查及藥敏試驗(yàn)等確定發(fā)病竹鼠為沙門(mén)氏菌和鏈球菌肺炎混合感染。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明分離的菌種對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟、慶大霉素極度敏感，對(duì)環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素等耐藥。隨著竹鼠養(yǎng)殖業(yè)的空前發(fā)展，造成竹鼠疾病的因素也越來(lái)越多，除了病原性因素，還有養(yǎng)殖環(huán)境和飼養(yǎng)條件等的影響。保持環(huán)境的清潔和飼養(yǎng)管理的合理性是必要的，所以我們要加快加強(qiáng)對(duì)竹鼠方面的研究。做好早發(fā)現(xiàn)早治療，采取綜合措施防治疾病，最大程度的降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)及減少損失。

［1］卓智龍，賓石玉.銀星竹鼠的生物學(xué)特性研究［J］.廣西師范大學(xué).2.

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［3］龔大春，史小娜.竹鼠大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011，02：75-76.

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［7］陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)［M］.第三版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.206-207.

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S858.9

B

1003-8655（2016）04-0049-03

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31260629）

祝宇（1990-），碩士研究生，研究方向?yàn)楂F醫(yī)臨床診斷，lxzhuyu1992@163.com.

曲偉杰（1978-），副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝與中毒病。qwj1204@sohu.com