簡(jiǎn)析牛結(jié)核病的檢測(cè)

張學(xué)峰內(nèi)蒙古包頭市達(dá)茂聯(lián)合旗農(nóng)牧業(yè)局

簡(jiǎn)析牛結(jié)核病的檢測(cè)

張學(xué)峰
內(nèi)蒙古包頭市達(dá)茂聯(lián)合旗農(nóng)牧業(yè)局

牛結(jié)核?。˙ovine Tubercu1osis,BTB）是由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起的一種人獸共患的慢性消耗性傳染病，可通過感染牛的分泌物或排泌物或牛奶等經(jīng)消化道或呼吸道傳染人或者其它動(dòng)物，此外，BTB還導(dǎo)致奶牛逐進(jìn)性消瘦、產(chǎn)乳率和乳質(zhì)下降、肺結(jié)核及其它器官結(jié)核和損害等。BTB對(duì)牛和人的健康仍然存在嚴(yán)重威脅，是國際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定必須通報(bào)的疾病之一，在我國列為二類動(dòng)物疫病。在中國，由于奶牛飼養(yǎng)量增加和以個(gè)體或私營企業(yè)飼養(yǎng)為主的飼養(yǎng)模式，BTB呈現(xiàn)蔓延趨勢(shì)。

一、BTB的免疫反應(yīng)情況

準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)是奶牛場(chǎng)有效防控BTB的前提，如何選擇有效的檢測(cè)方法就顯得尤為重要。牛早期感染牛分枝桿菌，機(jī)體免疫為細(xì)胞免疫，此時(shí)應(yīng)選擇針對(duì)細(xì)胞免疫的檢測(cè)方法如γ-干擾素檢測(cè)法和結(jié)核菌素（PPD）試驗(yàn)；牛感染BTB到中后期才出現(xiàn)體液免疫，此階段產(chǎn)生的特異性抗體可以被常見的抗體檢測(cè)方法檢測(cè)到，如：BTB抗體檢測(cè)ELISA和膠體金試紙條。牛感染牛分枝桿菌后免疫反應(yīng)示意圖如下：

由于結(jié)核病的特殊的免疫學(xué)特性以及復(fù)雜的病理變化和免疫應(yīng)答，一種診斷方法很難對(duì)結(jié)核病做出準(zhǔn)確的診斷，醫(yī)院在對(duì)人的結(jié)核病進(jìn)行確診時(shí)都要采用好幾種方法進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)；檢測(cè)BTB也是如此，BTB的診斷也必須要綜合幾種不同的診斷方法互相彌補(bǔ)不足，盡可能地提高檢測(cè)的敏感性和特異性、排除非特異性因素的干擾，降低因誤診帶來的經(jīng)濟(jì)損失。

二、BTB檢測(cè)方法介紹

γ-干擾素檢測(cè)法：通過檢測(cè)牛感染BTB后外周血中致敏淋巴細(xì)胞再次受到牛型結(jié)核菌素或禽型結(jié)核菌素刺激所釋放的特異性γ-干擾素，針對(duì)牛結(jié)核病細(xì)胞免疫階段，早期感染階段。商品化的試劑盒采用ABS-ELISA方法，大大提高了檢測(cè)靈敏度，是OIE推薦認(rèn)可的BTB診斷方法。該方法克服了PPD判讀的主觀性，縮短了反應(yīng)時(shí)間，已經(jīng)在許多國家（澳大利亞、愛爾蘭、美國）用于BTB的檢測(cè)。

PPD試驗(yàn)：針對(duì)BTB感染中前期有效，在相當(dāng)數(shù)量的PPD試驗(yàn)陽性牛中找不到特征病變，分不到細(xì)菌，或者分到非典型的分支桿菌，有5%的假陽性（7/ 98）?？梢杂帽容^結(jié)核菌素試驗(yàn)降低假陽性率，方法就是同時(shí)注射禽型PPD和牛型PPD，根據(jù)兩種結(jié)核菌素的皮厚差值而判斷結(jié)果。

抗體檢測(cè)ELISA：ELISA試劑盒采用融合蛋白做為檢測(cè)抗原能大幅度提高ELISA檢測(cè)方法的敏感性，特異地檢測(cè)到BTB體液免疫階段所產(chǎn)生的抗體即中晚期（無變應(yīng)期）的抗體，目前國內(nèi)外很多廠家均有生產(chǎn)和銷售商品化的BTB抗體檢測(cè)ELISA試劑盒。

膠體金試紙條：運(yùn)用膠體金層析技術(shù)特異性地檢測(cè)BTB體液免疫階段所產(chǎn)生的抗體即中晚期 （無變應(yīng)期）的抗體，適用于臨床上奶牛有咳嗽、消瘦或者是下痢的疑似結(jié)核病牛只的欄間現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，無需專業(yè)人士和儀器設(shè)備，具有快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)。

幾種檢測(cè)方法的特點(diǎn)如下：

方法 　優(yōu)勢(shì) 　缺點(diǎn) 　檢測(cè)階段PPD試驗(yàn) 　價(jià)格相對(duì)便宜，傳統(tǒng)方法 　耗時(shí)、費(fèi)力、費(fèi)人，結(jié)果因人為因素有所誤差，可疑牛需重檢，有假陽性結(jié)果中前期，細(xì)胞免疫階段干擾素檢測(cè) 　結(jié)果準(zhǔn)確，OIE和出入境檢疫的確診方法操作較為繁瑣，需要專業(yè)實(shí)驗(yàn)室和人員，成本較高中前期，細(xì)胞免疫階段抗體ELISA 　特異、敏感、準(zhǔn)確、快速，能大批量檢測(cè)需要專業(yè)實(shí)驗(yàn)室和人員 　中后期，體液免疫階段金標(biāo)卡 　特異、準(zhǔn)確、快速，無需儀器設(shè)備和專業(yè)人員，適合現(xiàn)場(chǎng)檢疫敏感性不如 G-干擾素檢測(cè)、ELISA等方法，成本略高中后期，體液免疫階段γ-

目前采集血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)即可覆蓋牛結(jié)核感染的所有階段。

三、推薦BTB檢測(cè)方案

方案1：實(shí)驗(yàn)室平行檢測(cè)

PPD檢測(cè)按照國標(biāo)（GB/T18645－2002），應(yīng)用牛提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)然采用PPD檢測(cè)復(fù)核γ-干擾素陽性試驗(yàn)結(jié)果是比較穩(wěn)妥的方式，但PPD試驗(yàn)比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，并不適用于大范圍的檢測(cè)，并且與非致病性環(huán)境分枝桿菌（土壤分枝桿菌、禽型分枝桿菌等）有交叉反應(yīng)，假陽性率高；故此僅僅是推薦選擇性采用。

平行檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)在于能快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)全群所有階段的感染牛，是普查牛群牛結(jié)核病最快捷和最全面的檢測(cè)方案，減少了假陰性牛群的存在，對(duì)凈化牛群意義重大；但需要全群做兩項(xiàng)檢測(cè)，增加了檢測(cè)成本和陽性牛處理成本。

方案2：序列檢測(cè)方案

序列檢測(cè)方案使用牛結(jié)核γ-干擾素ELISA試劑盒進(jìn)行初篩，陰性再用牛結(jié)核病ELISA試劑盒或膠體金試紙條進(jìn)行檢測(cè)，相較于方案1平行檢測(cè)節(jié)約了檢測(cè)成本，減少了假陽性牛的處理費(fèi)用，節(jié)約了凈化成本；但也可能保留了假陰性牛，對(duì)牛結(jié)核病感染情況的監(jiān)測(cè)摸底不徹底，延長(zhǎng)了凈化時(shí)間。

四、檢測(cè)要求分析

要達(dá)到牛結(jié)核病的凈化，比較好的做法是：檢測(cè)細(xì)胞免疫的γ-干擾素檢測(cè)法或PPD試驗(yàn)與檢測(cè)血清抗體的ELISA方法或膠體金試紙條配合使用，互相彌補(bǔ)不足，盡可能地提高檢測(cè)的敏感性和特異性、排除非特異性因素的干擾，降低因誤診帶來的經(jīng)濟(jì)損失。

1.發(fā)現(xiàn)病牛應(yīng)立即撲殺，也可隔離飼養(yǎng)，定期檢測(cè)。若有開放性結(jié)核病灶，立即撲殺，并無害化處理。優(yōu)秀的高產(chǎn)奶牛或種牛，可用鏈霉素或者異煙肼利福平治療。

2.對(duì)疑似牛隔離飼養(yǎng)，1月后復(fù)檢。仍為疑似，繼續(xù)隔離。過25～30天重檢，結(jié)果仍疑似按照陽性處理。

3.污染牛群一年檢疫4次。陽性牛進(jìn)行分群。剩余的陰性牛應(yīng)間隔30～45天，連續(xù)監(jiān)測(cè)3次，陰性者為假定健康群。該群或陽性率3%以下，應(yīng)該每年2次以上的檢疫。若無陽性牛在經(jīng)過1～1.5年連續(xù)3次檢疫，結(jié)果為陰性者，確定為健康群。