實(shí)驗(yàn)器具污染對(duì)酶抑制率法檢測農(nóng)藥殘留的影響

□ 李肖霞　禪城區(qū)張槎街道農(nóng)產(chǎn)品檢測和動(dòng)物防疫檢疫站

實(shí)驗(yàn)器具污染對(duì)酶抑制率法檢測農(nóng)藥殘留的影響

□ 李肖霞禪城區(qū)張槎街道農(nóng)產(chǎn)品檢測和動(dòng)物防疫檢疫站

酶抑制法是現(xiàn)階段常用的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測方法，具有檢測速度快、成本低、操作簡單的優(yōu)點(diǎn)，得到了廣泛應(yīng)用，并已成為蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥快速檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)方法。而在實(shí)際操作中實(shí)驗(yàn)器具重復(fù)使用造成的污染往往會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性，因此為弄清樣品污染的原因，對(duì)該實(shí)驗(yàn)器具的污染情況進(jìn)行檢測，并對(duì)需要注意的環(huán)節(jié)進(jìn)行分析，以期對(duì)今后從事殘留分析的同行有所幫助。

材料與方法

儀器與試劑

1儀器

全自動(dòng)/高感度農(nóng)藥殘留速測儀（臺(tái)灣綠輝）、超聲波清洗儀（上海睿祺電子設(shè)備有限公司）。

2試劑

農(nóng)藥殘留檢測試劑盒（臺(tái)灣綠輝）、敵敵畏（佛山市大興生物化工有限公司）。

實(shí)驗(yàn)器具中污染物的提取

本實(shí)驗(yàn)僅針對(duì)重復(fù)使用的實(shí)驗(yàn)器具。在做農(nóng)藥殘留試驗(yàn)時(shí)，前處理用到鑷子、剪刀、平底小試管，檢測時(shí)用到反應(yīng)盤（96孔），因此通過不同方法對(duì)這些器具進(jìn)行清洗，再對(duì)農(nóng)藥殘留情況進(jìn)行檢測。

1鑷子、剪刀

取10個(gè)，每個(gè)用2 mL農(nóng)藥殘留緩沖溶液反復(fù)沖洗，收集沖洗液，待測定。

2平底小試管

取10個(gè)，每個(gè)用2 mL農(nóng)藥殘留緩沖溶液蕩洗內(nèi)壁，收集蕩洗液，待測定。

3反應(yīng)盤

取10個(gè)反應(yīng)盤，每個(gè)用2 mL農(nóng)藥殘留緩沖溶液反復(fù)沖洗反應(yīng)孔，收集沖洗液，待測定。

實(shí)驗(yàn)器具清洗方法對(duì)農(nóng)藥殘留祛除效果的考察

主要考察實(shí)驗(yàn)室常用的2種清洗方法。先取0.5 mL敵敵畏，加入5 000 mL自來水，混勻。取鑷子、剪刀、平底小試管和微孔板，浸泡10 min后取出，晾干，作為陽性實(shí)驗(yàn)器具。按以下方法清洗。

1方法1

取鑷子、剪刀、平底小試管和反應(yīng)盤各10個(gè)，先用自來水反復(fù)沖洗5次，然后置于5 000 mL自來水中，加入10 g洗衣粉，浸泡10 min，取出用毛刷刷洗（反應(yīng)盤禁止刷洗），然后用自來水沖洗5次，再用蒸餾水沖洗3次，于40 ℃恒溫干燥箱中烘干。按照1.2.1、1.2.2、1.2.3項(xiàng)下方法制備污染物提取液。

2方法2

取鑷子、剪刀、平底小試管和反應(yīng)盤各10個(gè)，先用自來水反復(fù)清洗5次，然后置于盛有4 000 mL蒸餾水的超聲波清洗機(jī)中，加入8 g洗衣粉，超聲清洗15 min，取出用自來水沖去泡沫，再次用蒸餾水重復(fù)超聲清洗2次，每次5 min，于40 ℃恒溫干燥箱中烘干。按照1.2.1、1.2.2、1.2.3項(xiàng)下方法制備污染物提取液（注意：反應(yīng)盤應(yīng)單獨(dú)清洗）。

檢測

1準(zhǔn)備

試劑盒取出放置回溫，按要求用蒸餾水配備緩沖液、酵素和混合劑待用。

2檢測

按試劑盒方法進(jìn)行檢測：于反應(yīng)盤內(nèi)依次加入50 μL樣品待測液，50 μL酵素，靜置反應(yīng)3 min，加入50 μL混合液，同時(shí)用緩沖液代替樣液作對(duì)照，于405 nm波長下讀取結(jié)果。

結(jié)果

檢測結(jié)果見表1、表2?？梢钥闯?，經(jīng)方法1清洗后，大部分器具的農(nóng)藥殘留抑制率（標(biāo)準(zhǔn)值50%）仍然較高，其中剪刀和反應(yīng)盤檢出了農(nóng)藥殘留陽性，并且反應(yīng)盤由于不能刷洗所以殘留量較高。經(jīng)方法2清洗后，無器具檢出農(nóng)藥殘留陽性，抑制率也較方法1降低，但清洗后的實(shí)驗(yàn)器具也仍有農(nóng)藥殘留，說明清洗方法未能將農(nóng)藥殘留徹底去除。

表1　方法1的陽性檢出率（%）

表2　方法2的陽性檢出率（%）

討論

從試驗(yàn)結(jié)果來看，清洗不干凈會(huì)使實(shí)驗(yàn)器具殘留農(nóng)藥，由此產(chǎn)生的污染可對(duì)酶抑制率法檢測農(nóng)藥殘留試驗(yàn)產(chǎn)生干擾。首先，鑷子、剪刀、平底小試管上殘留的農(nóng)藥，在樣品提取過程中，可將樣品嚴(yán)重污染。其次，在樣品檢測過程中，反應(yīng)盤上的有機(jī)磷農(nóng)藥經(jīng)過累加后，可造成抑制率增大。因此，在做農(nóng)藥殘留的檢測時(shí)，實(shí)驗(yàn)樣品就容易出現(xiàn)假陽性。

由實(shí)驗(yàn)可見，超聲波清洗方法對(duì)農(nóng)藥的祛除效果較好，但仍然有農(nóng)藥殘留。因此建議今后應(yīng)用酶抑制率法做農(nóng)藥殘留分析最好用一次性實(shí)驗(yàn)器具。如果要重復(fù)使用，應(yīng)使用大功率的超聲波清洗機(jī)，若有檢出陽性樣品，應(yīng)增加清洗時(shí)間，因?yàn)榍逑磿r(shí)間越長，超聲波功率越大，氣泡越大對(duì)有機(jī)磷去除效果越好。