化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)乙肝病毒感染性標(biāo)志物的臨床應(yīng)用

楊 梅，晏 紅

（四川省江油市第二人民醫(yī)院，1.檢驗(yàn)科，2.輸血科，四川　江油　621701）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)乙肝病毒感染性標(biāo)志物的臨床應(yīng)用

楊 梅1，晏 紅2

（四川省江油市第二人民醫(yī)院，1.檢驗(yàn)科，2.輸血科，四川江油621701）

目的 探討化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)乙肝病毒感染性標(biāo)志物的臨床應(yīng)用效果。方法 抽取我院2013年1月至2014年1月接收的疑似乙型肝炎病人800例，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）分別檢測(cè)患者的乙肝病毒血清標(biāo)志物。結(jié)果 HBsAg、HBeAg、HBeAb的檢出率CLIA高于ELISA（P＜0.01），兩種方法HBsAb、HBcAb的檢出率無明顯差異（P＞0.05）；低水平HBsAg檢測(cè)ELISA敏感性低于CLIA；ELISA檢出的最低濃度為0.128 IU/mL，CLIA法檢出的最低濃度為0.031IU/mL。結(jié)論 采用CLIA檢測(cè)乙肝病毒感染性標(biāo)志物相比ELISA更準(zhǔn)確，可有效應(yīng)用于乙肝臨床診斷和病情動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

化學(xué)發(fā)光免疫法； 乙肝病毒； 臨床應(yīng)用

乙型肝炎病毒（HBV）簡(jiǎn)稱乙肝病毒，該病毒感染率較高，感染后表現(xiàn)為急慢性肝炎、肝硬化和肝癌等多種臨床特征，危害人類身體健康，給家庭帶來嚴(yán)重的身心和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此及時(shí)并準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)HBV感染對(duì)于防治乙肝意義重大［1］。通常臨床上判斷乙肝感染主要是根據(jù)乙肝的血清標(biāo)志物，但通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對(duì)HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)不能進(jìn)行定量分析，臨床上難以判斷患者HBV感染復(fù)制狀況［2］?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析將化學(xué)發(fā)光反應(yīng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，該方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、能進(jìn)行快速定量分析，彌補(bǔ)了ELISA檢測(cè)的不足，已逐漸應(yīng)用于HBV血清學(xué)標(biāo)志物的定量測(cè)定［3-4］。本文采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）分別檢測(cè)患者的乙肝病毒血清標(biāo)志物，并對(duì)比分析檢測(cè)結(jié)果。

DOI：10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.04.027

收稿日期：2015-10-12；修回日期：2015-11-12

作者簡(jiǎn)介：楊梅（1974—），女，四川江油人，大專，主管檢驗(yàn)技師，研究方向：免疫。Tel：15328117832；E-mail：yangmei_7832@ 163.com

材料和方法

1 臨床資料

抽取我院2013年1月至2014年1月接收的疑似乙型肝炎病人800例，其中男性患者424例，女性患者376例；病人年齡在27～78歲之間，平均年齡為43.4±6.5歲。所有患者均早餐空腹抽取靜脈血，在室溫環(huán)境下30min以后開始凝固收縮并逐步析出血清。

2 儀器與試劑

乙肝ELISA診斷檢測(cè)儀采用上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司KHB-st-360型酶標(biāo)儀，檢驗(yàn)試劑為廈門新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)。化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)儀為安圖生物L(fēng)UMO化學(xué)發(fā)光儀，檢測(cè)試劑為安圖化學(xué)發(fā)光試劑。由國家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供乙肝血清標(biāo)志物的定值參比血清［5］。

3 方法

將提取的800例患者血清平均分為兩份，分別運(yùn)用ELISA和CLIA兩種方法檢測(cè)HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五項(xiàng)乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物指標(biāo)，具體操作方式按照試劑盒說明進(jìn)行，質(zhì)控以定值參比血清為標(biāo)準(zhǔn)。

4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

ELISA和CLIA兩種方法判斷標(biāo)準(zhǔn)為：測(cè)定值≥參考值上限為陽性，否則為陰性。HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的參考值上限分別為0.2ng/mL、10.0mIU/mL、0.05NCU/mL、2.0NCU/mL、1.5NCU/mL［6］。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)ELISA和CLIA兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行兩組配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 ELISA與CLIA檢測(cè)HBV血清標(biāo)志物的結(jié)果

800例患者HBsAg、HBeAg、HBeAb的檢出率CLIA高于ELISA（P＜0.01），兩種方法HBsAb、HBcAb的檢出率無明顯差異（P＞0.05），見表1。

表　1 ELISA與　CLIA檢測(cè)　800例患者血清　HBV標(biāo)志物結(jié)果

2 ELISA與CLIA低水平HBsAg檢測(cè)

500例CLIA檢測(cè)HBsAg結(jié)果為低水平陽性標(biāo)本，ELISA檢測(cè)出368例（73.6%），見表2，當(dāng)HBsAg低水平檢測(cè)值大于1.0 IU/mL時(shí)，ELISA與CLIA方法檢測(cè)結(jié)果相同。小于1.0 IU/mL時(shí)ELISA檢測(cè)結(jié)果低于CLIA法（P＜0.01）。

表2　CLIA方法與ELISA檢測(cè)低水平HBsAg結(jié)果

3 CLIA方法檢測(cè)HBsAg靈敏度

取1.0ng/mL HBsAg定值參比血清，運(yùn)用陰性血清進(jìn)行倍比稀釋，運(yùn)用兩種方法同時(shí)開展靈敏度檢測(cè)，結(jié)果顯示：ELISA最低檢出濃度為0.128IU/mL，CLIA法最低檢出濃度為0.031 IU/mL。

討 論

目前，準(zhǔn)確檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物是診斷和治療乙肝患者的關(guān)鍵，傳統(tǒng)的乙肝診斷方法是ELISA檢測(cè)方法，該方法快速簡(jiǎn)便，對(duì)乙肝的疾病診斷和療效具有一定作用。但該方法不能進(jìn)行定量檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定現(xiàn)象。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)在臨床上的發(fā)展，需要靈敏度高、特異性強(qiáng)的方法，CLIA法可以進(jìn)行定量檢測(cè)，有效彌補(bǔ)ELISA方法檢測(cè)上的不足，已成為HBV血清學(xué)標(biāo)志物測(cè)定的重要手段。

從本文ELISA與CLIA檢測(cè)患者的乙肝病毒血清標(biāo)志物結(jié)果可以看出，HBsAg、HBeAg、HBeAb的檢出率CLIA高于ELISA（P＜0.01），兩種方法HBsAb、HBcAb的檢出率無明顯差異（P＞0.05）。由于CLIA法采用的固相載體為順磁性微粒，顆粒體積小、表面積大，因此具有更大的反應(yīng)面積［7］。同時(shí)由于標(biāo)志物的循環(huán)利用，可以延長(zhǎng)發(fā)光時(shí)間，增加強(qiáng)度，準(zhǔn)確地顯示HBV感染進(jìn)程，提高了檢測(cè)靈敏度和檢出率［8-9］。

本文ELISA檢出的HBsAg最低濃度為0.128IU/mL，CLIA法檢出的HBsAg最低濃度為0.031IU/mL，低水平HBsAg檢測(cè)ELISA法敏感性低于CLIA法。檢測(cè)結(jié)果表明通過CLIA法可以對(duì)急性乙型肝炎患者更加迅速檢測(cè)出HBsAg，有效避免低水平HBsAg樣本的假陰性及漏檢現(xiàn)象。

綜上所述，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)乙肝病毒感染性標(biāo)志物相比ELISA法更準(zhǔn)確，可有效應(yīng)用于乙肝臨床診斷和病情動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，值得進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。

［1］陳瀑，史靜，鄒麟.HBsAg定量檢測(cè)在慢性乙型肝炎自然病程中的意義.中國微生態(tài)學(xué)雜志，2013，25（8）：928-930.

［2］譚凌卉.ELISA法檢測(cè)HBV血清標(biāo)志物影響因素的分析.湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，6（2）：20-23.

［3］朱雪娟，張欣欣.乙型肝炎病毒HBsAg定量檢測(cè)的臨床意義.中華肝臟病雜志，2011，19（8）：637-640.

［4］衛(wèi)曉青，黃秋芳，戴悅，等.低水平HBsAg 3種方法檢測(cè)結(jié)果比較.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（3）：283-286.

［5］李琦，尚曉泓.化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)感染性疾病抗原抗體的比較.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33 （7）：846-847.

［6］葛君利，王麗娜.影響ELISA法檢測(cè)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的因素.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31（3）：289-290.

［7］張冬梅.乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)的應(yīng)用體會(huì).當(dāng)代醫(yī)學(xué)雜志，2007，13 （2）：75-76.

［8］王海燕.定量檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物與乙肝病毒DNA的臨床意義.醫(yī)學(xué)新知雜志，2010，20（3）：196-199.

［9］黃晶，林花，奚麗，等.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)77286例乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物結(jié)果分析.臨床肝膽病雜志，2010，26（3）：324-325.

（潘子昂編輯）

Chemiluminescence Immunoassay Detection of Hepatitis B Virus Infection and Its Clinical Application

YANG Mei，YAN Hong
（Clinical Laboratory，The Second People’s Hospital of Jiangyou City，Jiangyou 621701，China）

Objective To explore chemiluminescence immunoassay detection of hepatitis B virus（HBV）and its clinical application as HBV infection marker.Methods Samples were extracted from January 2013 to January 2014，a total of 800 suspected hepatitis B patients.Chemiluminescence immunoassay（CLIA）and enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）were used to detect hepatitis B virus.Results Detection rates of HBsAg，HBeAg and HBe，Abby CLIA is higher than by ELISA（P＜0.01）；the detection rates in HBsAb，HBcAb has no obvious difference between two methods（P＞0.05）.Detection of HBsAg at lower concentration by ELISA had lower sensitivity than by CLIA.The minimum detectable concentration by ELISA was 0.128 IU/mL；the lowest detectable concentration by CLIA was 0.031 IU/mL.Conclusion Using chemiluminescence immunoassay to detect hepatitis B virus infection markers is more sensitive than use of ELISA.It is recommended to be applied in clinical diagnosis of hepatitis B and dynamic monitoring.

Chemiluminescence immunoassay； Hepatitis B virus； Clinical application