外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在惡性腫瘤中的應(yīng)用及臨床意義研究

張國(guó)泰安市腫瘤防治院檢驗(yàn)科，山東泰安　271000

外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在惡性腫瘤中的應(yīng)用及臨床意義研究

張國(guó)
泰安市腫瘤防治院檢驗(yàn)科，山東泰安271000

目的 分析外周血T細(xì)胞亞群測(cè)定在惡性腫瘤患者中的臨床應(yīng)用價(jià)值及及意義。方法 隨機(jī)收集該院2014年1月—2016年1月收治的患惡性腫瘤的100例患者進(jìn)行研究，且將其分為研究組。同時(shí)選取同期于該院進(jìn)行健康體檢的100名正常人群作為對(duì)照組進(jìn)行對(duì)照研究。通過流式細(xì)胞術(shù)分別對(duì)兩組研究對(duì)象的外周血T細(xì)胞亞群水平進(jìn)行檢測(cè)，主要包括T淋巴細(xì)胞（CD3+細(xì)胞）、輔助性T細(xì)胞（CD4+細(xì)胞）、抑制性T細(xì)胞（CD8+細(xì)胞）、CD4+/CD8+細(xì)胞等水平。結(jié)果 研究組患者的CD3+細(xì)胞（57.31±7.76）%，顯著低于對(duì)照組（72.34±6.78）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。研究組患者的CD4+細(xì)胞（35.75±7.47）%，顯著低于對(duì)照組（45.23±5.49）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。研究組患者的CD8+細(xì)胞（33.98±8.46）%，顯著高于對(duì)照組的（28.37±6.17）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。研究組患者的CD4+/CD8+細(xì)胞（0.93±0.49），顯著低于對(duì)照組（1.57±0.59），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)可作為評(píng)估惡性腫瘤患者治療及預(yù)后情況的重要參考，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

外周血；T細(xì)胞亞群；惡性腫瘤；臨床價(jià)值

［Abstract］Objective To analyze the clinical application value and significance of T lymphocyte subsets in patients with malignant tumor.Methods Random selection 100 patients with malignant tumor in our hospital were collected from January 2014 to January 2016 called study group.100 healthy checking people were selected as control group.To compare and test the two groups of subjects peripheral blood T cell subsets levels by using of flow cytometry respectively,including T lymphocytes（CD3+cells,helper T cells（CD4+）cells,inhibition of T cells（CD8+cells,CD4+/CD8+cell levels.Results The CD3+cells（57.31±7.76）%in the study group were significantly lower than control group（72.34±6.78）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD4+cells（35.75±7.47）%in the study group were significantly lower than control group（45.23±5.49）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD8+cell（33.98+8.46）% of the study group was significantly higher than that of the control group（28.37±6.17）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD8+CD4+/cells（0.93±0.49）in the study group were significantly lower than control group （1.57±0.59）,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The detection of T lymphocyte subsets in peripheral blood can be used as an important reference for the evaluation of treatment and prognosis of patients with malignant tumor,and it is worth of promotion.

［Key words］Peripheral blood；T cell subsets；Malignant tumor；Clinical value

惡性腫瘤主要發(fā)生于機(jī)體免疫功能較低時(shí)，且會(huì)導(dǎo)致患者機(jī)體的免疫功能進(jìn)一步受損，而免疫功能受損又是導(dǎo)致患者的腫瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的重要因素之一［1］。相關(guān)研究表明，T細(xì)胞亞群等細(xì)胞免疫在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、抗腫瘤中均發(fā)揮著非常重要的效果［2］。為了分析惡性腫瘤患者與健康體檢人群外周血T細(xì)胞亞群的差異性，旨在為惡性腫瘤患者的免疫生物學(xué)反應(yīng)提供參考，該研究隨機(jī)收集該院2014年1月—2016年1月間收治的患惡性腫瘤的100例患者及同期的100名健康體檢人群進(jìn)行臨床研究，通過流式細(xì)胞術(shù)分別對(duì)兩組研究對(duì)象的外周血T細(xì)胞亞群水平進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

隨機(jī)收集該院收治的患惡性腫瘤的100例患者進(jìn)行研究，且將其分為研究組。入選標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均經(jīng)臨床病理檢查明確診斷，且均經(jīng)相關(guān)臨床檢查明確診斷；②均無合并其他嚴(yán)重免疫性疾病者；③患者及家屬均簽署知情同意書，且自愿參與該研究。研究組中，男性患者61例，女性患者39例；最低年齡31歲，最高年齡67歲，平均年齡（54.16±10.76）歲；腫瘤分類：胃癌患者25例，肺癌患者22例，肝癌患者13例，惡性淋巴瘤患者14例，乳腺癌患者11例，結(jié)直腸癌患者15例。同時(shí)選取同期于該院進(jìn)行健康體檢的100名正常人群作為對(duì)照組進(jìn)行對(duì)照研究，其中男性對(duì)象58名，女性對(duì)象42名；最低年齡26歲，最高年齡73歲，平均年齡（55.93±13.67）歲。兩組患者的性別、年齡等基線資料對(duì)比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），存在臨床可比性。

1.2研究方法

1.2.1儀器及試劑儀器選用Beckman Eepics XL型流式細(xì)胞儀、溶血素、流式試劑盒CD45-FITC/CD4-RD1/ CD8-ECD/CD3-PC5及CD3-FITC/CD16CD56-ECD。試劑選用Cy標(biāo)記的鼠抗人 CD3和CD4單克隆抗體、FITC標(biāo)記的鼠抗人CD8單克隆抗體、PE標(biāo)記的鼠抗人CD16和CD56單克隆抗體。

1.2.2測(cè)定方法通過直接免疫熒光標(biāo)記全血溶血法［3］檢測(cè)兩組對(duì)象外周血中淋巴表面抗原的表達(dá)情況，具體操作包括：抽取兩組對(duì)象的空腹靜脈血2 mL，放入具有抗凝劑的試管中，分別取經(jīng)標(biāo)記過的10 μL單克隆抗體CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5及CD3-FITC/CD16CD56-ECD放入試管中，再加入100 μL抗凝過的外周全血，搖勻，于室溫下進(jìn)行染色15 min，且行同型對(duì)照。然后加入溶血素FACS 450 μL，搖勻后置于室溫避光下10 min，然后行溶血處理；細(xì)胞洗滌，常規(guī)進(jìn)行1 500 rpm/5 min低速離心后去除上清液，加1 mL PBS，混勻后重復(fù)1次洗滌操作；再加入1mL PBS重選細(xì)胞，混勻，制成單細(xì)胞懸液。最后放置于流式細(xì)胞儀中進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品中檢測(cè)的細(xì)胞需超過5 000個(gè)，通過軟件對(duì)細(xì)胞中各個(gè)標(biāo)記細(xì)胞的比例進(jìn)行計(jì)算。檢測(cè)指標(biāo)包括T淋巴細(xì)胞（CD3+細(xì)胞）、輔助性T細(xì)胞（CD4+細(xì)胞）、抑制性T細(xì)胞（CD8+細(xì)胞）、CD4+/CD8+細(xì)胞等水平。

1.3統(tǒng)計(jì)方法

對(duì)該研究所得數(shù)據(jù)進(jìn)行詳細(xì)記錄并構(gòu)建數(shù)據(jù)庫(kù)，以SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理和分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）來表示，當(dāng)P＜0.05時(shí)，則為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1惡性腫瘤患者與健康人群的外周血T細(xì)胞亞群水平對(duì)比

研究組患者的CD3+細(xì)胞（57.31±7.76）%，顯著低于對(duì)照組（72.34±6.78）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.5856，P=0.0000）。研究組患者的CD4+細(xì)胞（35.75±7.47）%，顯著低于對(duì)照組（45.23±5.49）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 10.2261，P=0.0000）。研究組患者的CD8+細(xì)胞（33.98±8.46）%，顯著高于對(duì)照組的（28.37±6.17）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.3577，P=0.0000）。研究組患者的CD4+/CD8+細(xì)胞（0.93±0.49），顯著低于對(duì)照組（1.57±0.59），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.3448，P=0.0000）。見表1。

表1　惡性腫瘤患者與健康人群的外周血T細(xì)胞亞群水平對(duì)比（±s）

表1　惡性腫瘤患者與健康人群的外周血T細(xì)胞亞群水平對(duì)比（±s）

組別CD3+細(xì)胞（%）CD4+細(xì)胞（%）CD8+細(xì)胞（%）CD4+/CD8+細(xì)胞研究組（n=100）對(duì)照組（n=100）t P 57.31±7.76 72.34±6.78 14.5856 0.0000 35.75±7.47 45.23±5.49 10.2261 0.0000 33.98±8.46 28.37±6.17 5.3577 0.0000 0.93±0.49 1.57±0.59 8.3448 0.0000

2.2不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細(xì)胞亞群水平對(duì)比

不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細(xì)胞亞群水平對(duì)比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2　不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細(xì)胞亞群水平對(duì)比（±s）

表2　不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細(xì)胞亞群水平對(duì)比（±s）

調(diào)查內(nèi)容　分類CD3+細(xì)胞（%）CD4+細(xì)胞（%）CD8+細(xì)胞（%）CD4+/CD8+細(xì)胞性別年齡（歲）男（n=61）女（n=39）31～41（n=32）42～53（n=30）54～67（n=28）58.52±9.41 58.16±9.15 58.74±10.36 57.78±9.16 58.03±8.46 33.41±8.42 34.16±9.24 33.75±6.49 33.95±8.42 34.09±8.31 33.72±7.62 32.94±6.75 32.74±8.12 33.14±7.86 33.34±9.26 0.97±0.39 0.96±0.42 0.98±0.36 0.99±0.32 0.96±0.38

3　討論

隨著近年來人們物質(zhì)文化生活水平的不斷提高和飲食生活習(xí)慣的不斷變化，惡性腫瘤患者的發(fā)病例數(shù)亦在逐漸增加，嚴(yán)重影響了廣大患者的身體生命健康及生活質(zhì)量。惡性腫瘤患者的病情進(jìn)展時(shí)，患者機(jī)體的免疫功能下降是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的主要因素［4-5］。惡性腫瘤患者機(jī)體的免疫系統(tǒng)主要通過免疫應(yīng)答來對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)展進(jìn)行抑制，而T淋巴細(xì)胞接到的細(xì)胞免疫是腫瘤免疫的主要方向，T淋巴細(xì)胞異?？蓪?dǎo)致患者機(jī)體中的腫瘤細(xì)胞避開機(jī)體免疫的監(jiān)視進(jìn)行增殖分化。惡性腫瘤患者的發(fā)生、發(fā)展過程中，其分泌的可溶性免疫抑制因子會(huì)阻止CD4+T細(xì)胞的出現(xiàn)及成熟，而誘導(dǎo)出現(xiàn)CD8+T細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致患者的CD4+/CD8+比值和NK細(xì)胞所占的比例降低［6-7］。

楊德芬［8］研究表明，惡性腫瘤組患者的CD3+細(xì)胞水平（57.41±8.49）%、CD4+細(xì)胞水平（35.83±7.52）%均相對(duì)較低，且與正常人群的 CD3+細(xì)胞水平（72.28± 7.01）%、CD4+細(xì)胞水平（45.12±5.53）%比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，加強(qiáng)對(duì)外周血T細(xì)胞亞群的監(jiān)測(cè)可為患者的腫瘤進(jìn)展、治療及預(yù)后情況作出一定的預(yù)測(cè)，以便臨床進(jìn)行針對(duì)性的預(yù)防治療，進(jìn)而有效提高療效。該次研究結(jié)果顯示，研究組患者的CD3+細(xì)胞水平（57.31±7.76）%、CD4+細(xì)胞水平 （35.75±7.47）%、CD4+/CD8+細(xì)胞 （0.93± 0.49）均顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.5856、10.2261、8.3448，P=0.0000）。研究組患者的CD8+細(xì)胞水平（33.98±8.46）%顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 5.3577，P=0.0000）。這提示惡性腫瘤患者與健康體檢人群的免疫功能存在明顯的差異，而惡性不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細(xì)胞亞群水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），這提示患者的免疫紊亂為共性問題，不可因性別、年齡等差異而忽視。

綜上所述，外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)可作為評(píng)估惡性腫瘤患者治療及預(yù)后情況的重要參考，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

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Clinical Significance of Peripheral Blood T Cell Subsets Detection in Malignant Tumors

ZHANG Guo
Tai'an Tumour Prevention and Treatment Hospital,Tai'an,Shandong Province,271000 China

R730

A

1674-0742（2016）08（b）－0026-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.23.026

張國(guó)（1966.6-），男，山東泰安人，本科，主治醫(yī)師，研究方向：腫瘤、結(jié)核病相關(guān)臨床檢驗(yàn)。

2016-05-16）