上皮性卵巢腫瘤血清中RASSF1A基因異常甲基化檢測及臨床評價

劉金鈺，楊雪，李艷艷，高春英.吉林省腫瘤醫(yī)院婦瘤一科，吉林長春　30000；.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院婦瘤一科，吉林長春　30000

上皮性卵巢腫瘤血清中RASSF1A基因異常甲基化檢測及臨床評價

劉金鈺1，楊雪2，李艷艷1，高春英1
1.吉林省腫瘤醫(yī)院婦瘤一科，吉林長春130000；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院婦瘤一科，吉林長春130000

目的探究上皮性卵巢腫瘤血清中RASSF1A基因異常甲基化檢測與臨床意義。方法選擇2014年2月—2016年2月于該院接受治療的88例卵巢腫瘤患者，其中上皮性卵巢癌44例為觀察組，良性腫瘤患者44例為對照組，再檢測對比兩組RASSF1A基因異常甲基化。結(jié)果觀察組血清RASSF1A基因異常甲基化比率為56.8%顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05；WHO病理II級、III級患者血清中RASSF1A基因異常甲基化比率為60.0%、81.8%均顯著高于I級患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05；FIGO分級III～I(xiàn)V級患者血清中RASSF1A基因異常甲基化比率為80.0%顯著高于I～I(xiàn)I級患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。結(jié)論在臨床上診斷上皮性卵巢腫瘤可對RASSF1A基因異常甲基化進(jìn)行檢測，可為臨床治療與預(yù)后提供新思路，具有重要臨床參考價值。

上皮性卵巢腫瘤；血清；RASSF1A基因；甲基化；檢測

［Abstract］Objective To explore the RASSF1A gene in epithelial ovarian cancer serum abnormal methylation detection and clinical significance.Methods From February 2014 to February 2016 in our hospital treated 88 cases of patients with ovarian tumors，including epithelial ovarian cancer in 44 cases of observation group，and 44 patients with benign tumor as the control group，to detect abnormal compared two groups of RASSF1A gene methylation.Results Observation group serum abnormal methylation rate of RASSF1A gene is 56.8%higher than that of control group，with statistical difference，P＜0.05；WHO pathological class II，III grade patients serum abnormal methylation rate of RASSF1A gene is 60.0%，81.8%were significantly higher than that of patients with grade I，statistically difference，P＜0.05；FIGO class III～I(xiàn)V in serum in patients with abnormal methylation rate of RASSF1A gene is 80.0%higher than that of grade I～I(xiàn)I patients，statistically difference，P＜0.05.Conclusion In clinical diagnosis of epithelial ovarian tumor of RASSF1A gene abnormal methylation detection，can provide new ideas for clinical treatment and prognosis，has the important clinical reference value.

［Key words］Epithelial ovarian tumor；Serum；RASSF1A gene；Methylation；Test

在卵巢癌中上皮性卵巢癌是較為常見組織類型。上皮性卵巢癌約為卵巢良性腫瘤50%，約為卵巢原發(fā)性惡性腫瘤85%，且是女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中死亡率最高的，嚴(yán)重影響了女性健康［1］。近些年研究顯示，在多數(shù)腫瘤發(fā)展期間RASSF1A基因發(fā)揮著重要作用［2］。該研究選擇2014年2月—2016年2月于該院接受治上皮性卵巢癌44例，良性腫瘤患者44例，檢測對比以上兩組RASSF1A基因異常甲基化，并給予臨床評價，以便于上皮性卵巢腫瘤早期診斷。現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

在2014年2月—2016年2月該院收治的88例卵巢腫瘤患者中，44例為上皮性卵巢癌為觀察組，44例為良性卵巢腫瘤為對照組，且均經(jīng)病理學(xué)確診。其中觀察組年齡為37～69歲，平均年齡為（51.4±10.2）歲，WHO病理分級：18例I級，15例II級，11例III級，經(jīng)FIGO分期：29例I～I(xiàn)I期，15例III～I(xiàn)V期。對照組年齡為38～68歲，平均年齡為（51.6±14.8）歲。兩組在一般資料上差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05。

1.2方法

1.2.1采集樣本 兩組均于術(shù)前1 d空腹采集3～5 mL的外周靜脈血，于室溫中保存1 h，后經(jīng)4 000 r/min 20 min離心，然后收集上層血清，在-80℃下保存。

1.2.2提取DNA按提取試劑盒說明將樣本中基因組DNA提取出，每次約得到100 μL基因組DNA。經(jīng)2.5%瓊脂糖凝膠電泳、紫外分光光度法對DNA濃度、純度進(jìn)行檢測，并在-20℃冰箱內(nèi)保存。根據(jù)DNA甲基化試劑盒說明行DNA變性與亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，每次均可獲得10 μL修飾后基因組DNA，并在-20℃冰箱內(nèi)保存。

1.2.3檢測RASSF1A基因異常甲基化 采用PCR擴增甲基化引物、非甲基化引物。反應(yīng)中選擇20 μL體系，反應(yīng)條件：94℃4 min預(yù)變性，94℃30 s變性，60℃45 s退火，72℃1 min延伸，經(jīng)35次循環(huán)；72℃1 min再延伸。在2.5%瓊脂糖凝膠電泳中置入酶切產(chǎn)物檢測，電泳時間35 min，電壓為110 V，后行紫外凝膠成像系統(tǒng)分析。

1.3臨床觀察指標(biāo)

DNA異常甲基化：于RASSF1A基因異常甲基化引物下可擴增產(chǎn)物；不存在DNA異常甲基化：于非RASSF1A基因異常甲基化引物下可擴增產(chǎn)物。

1.4統(tǒng)計方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件行數(shù)據(jù)分析，且計數(shù)資料用百分率（%）表示，經(jīng)χ2檢驗，P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組血清RASSF1A基因異常甲基化情況對比

觀察組血清RASSF1A基因異常甲基化比率為56.8%顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。見表1。

表1　兩組血清RASSF1A基因異常甲基化情況對比

2.2觀察組不同病理分級與臨床分期血清中RASSF1A基因異常甲基化情況對比

WHO病理II級、III級患者血清中RASSF1A基因異常甲基化比率為60.0%、81.8%均顯著高于I級患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05；FIGO分級III～I(xiàn)V級患者血清中RASSF1A基因異常甲基化比率為80.0%顯著高于I～I(xiàn)I級患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。

表2　觀察組不同病理分級與臨床分期血清中RASSF1A基因異常甲基化情況對比

3　討論

RASSF1A基因是在肺癌中發(fā)現(xiàn)的新型候選抑癌基因，該研究顯示，RASSF1A基因是位于3p21.3區(qū)域中，在全部小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系內(nèi)其mRNA表達(dá)均體現(xiàn)為降低或缺失，可有效減緩癌細(xì)胞發(fā)展，促進(jìn)細(xì)胞成熟、分化與凋亡［3］。DNA甲基化為最早發(fā)現(xiàn)的DNA表現(xiàn)遺傳修飾途徑［4］。針對基因組DNA，其正常甲基化能夠有效維持細(xì)胞、組織器官正常功能，但異常甲基化會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)排序狀態(tài)紊亂，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展［6-8］。

該研究中，44例上皮性卵巢癌為觀察組，44例良性腫瘤患者為對照組，通過檢測對比兩組RASSF1A基因異常甲基化，結(jié)果顯示，觀察組血清RASSF1A基因異常甲基化比率為56.8%顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05；WHO病理II級、III級患者血清中RASSF1A基因異常甲基化比率為60.0%、81.8%均顯著高于I級患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05；FIGO分級III～I(xiàn)V級患者血清中RASSF1A基因異常甲基化比率為80.0%顯著高于I～I(xiàn)I級患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。表明RASSF1A基因異常甲基化檢測能夠為上皮性卵巢腫瘤診治及預(yù)后提供重要臨床輔助作用。此外，大量研究顯示，DNA甲基化能夠DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)以及DNA及蛋白質(zhì)間相互作用發(fā)生變化，進(jìn)而對基因表達(dá)進(jìn)行控制［9-10］。與本研究結(jié)果一致。

綜上所述，在臨床上診斷上皮性卵巢腫瘤可對RASSF1A基因異常甲基化進(jìn)行檢測，可為臨床治療與預(yù)后提供新思路，具有重要臨床參考價值。

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Epithelial Ovarian Cancer in Serum RASSF1A Gene Abnormal Methylation Detection and Clinical Evaluation

LIU Jin-yu1，YANG Xue2，LI Yan-yan1，GAO Chun-ying1
1.Department of gynecologic oncology，Jilin Provincial Cancer Hospital，Changchun，Jilin Province，130000 China；2.China Japan Union Hospital of Jilin University，Changchun，Jilin Province，130000 China

R737.31

A

2096-1782（2016）08-0007-03

10.19368/j.cnki.2096-1782.2016.08.007

劉金鈺（1981.8-），女，吉林舒蘭人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。

高春英（1962.8-），女，吉林長春人，本科，主任醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤，E-mail：369417735@qq.com。

2016-05-05）