HPLC法同時(shí)測(cè)定黨參中5種核苷和堿基

王高峰

(貴州工程職業(yè)學(xué)院 生命科學(xué)系,貴州銅仁 565200)

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HPLC法同時(shí)測(cè)定黨參中5種核苷和堿基

王高峰

(貴州工程職業(yè)學(xué)院 生命科學(xué)系,貴州銅仁 565200)

建立了超聲輔助提取結(jié)合高效液相色譜(HPLC)測(cè)定黨參中胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷含量的方法。黨參的最佳提取條件為:20倍量的純凈水超聲提取60 min,提取2次。采用Venusil MP C18(2)色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)分離和測(cè)定目標(biāo)分析物,流動(dòng)相為甲醇-水梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm,體積流量1.0 mL/min,柱溫35 ℃。結(jié)果表明,5種化學(xué)成分的質(zhì)量濃度與峰面積的線性關(guān)系良好(R2>0.9995),平均回收率為97.05%～101.08%,RSD≤3.01%。不同產(chǎn)地黨參核苷類(lèi)成分含量有所差異,18個(gè)黨參樣品中胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷、腺苷及核苷總量介于68.71～478.82、171.33～629.60、33.63～140.05、221.31～651.37、143.26～511.78、679.87～2011.67 μg/g之間。本研究所建立方法操作簡(jiǎn)便,精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好,準(zhǔn)確可靠,適用于黨參藥材中5種核苷和堿基成分的同時(shí)測(cè)定,為全面客觀地認(rèn)識(shí)黨參藥材功效物質(zhì)基礎(chǔ)、豐富和發(fā)展黨參藥材多指標(biāo)評(píng)價(jià)體系研究提供科學(xué)依據(jù)。

高效液相色譜法,黨參,核苷,堿基

黨參(RadixCodonopsis)具有健脾益肺、養(yǎng)血生津等功效,為常用補(bǔ)氣中藥之一[1],現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí),其水溶性成分具有顯著的抗胃潰瘍、抗氧化、抗血小板聚集、抗血栓等多種生物活性[2],常用于冠心病、高脂血癥、調(diào)節(jié)胃腸功能、腫瘤等[3]患者的保健和治療作用?，F(xiàn)行版中國(guó)藥典(2010年版一部)以黨參中醇溶性浸出物(45%乙醇)的含量來(lái)控制黨參藥材的質(zhì)量,規(guī)定其質(zhì)量分?jǐn)?shù)不得少于55.0%,但未明確具體的指標(biāo)成分,以此作為藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)過(guò)于籠統(tǒng)[1]。前期研究工作表明,黨參中含有腺苷[4]、尿嘧啶[5]等核苷類(lèi)物質(zhì),而核苷類(lèi)物質(zhì)具有調(diào)節(jié)免疫功能、調(diào)節(jié)血糖、促進(jìn)腸道修復(fù)、降低血壓、抗心律失常、抗缺血性損傷等生物活性[6],因此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)HPLC法建立同時(shí)測(cè)定黨參中核苷及游離堿基成分的方法,對(duì)其成分進(jìn)行定性定量分析,以期為全面客觀地認(rèn)識(shí)黨參藥材物質(zhì)基礎(chǔ)、豐富和發(fā)展黨參藥材多指標(biāo)評(píng)價(jià)體系研究提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

黨參新鮮根山西省平順縣青羊鎮(zhèn)老馬嶺村等地,每份樣品均取自30株成熟植株根以保證樣品代性,經(jīng)作者本人鑒定為桔?？浦参稂h參Codonopsispilosula(Franch.)Nannf. 的干燥根(表1),均為人工栽培樣品；甲醇色譜純，美國(guó)Fisher公司；其他試劑均為分析純；水娃哈哈牌純凈水。

尿苷對(duì)照品、腺嘌呤對(duì)照品、腺苷對(duì)照品(批號(hào):110887-200202、886-200001、110879-200202)中國(guó)食品藥品檢定研究院;胞苷對(duì)照品、鳥(niǎo)苷對(duì)照品南京都萊生物技術(shù)有限公司,純度大于98%。

LC-20A型高效液相色譜儀日本島津,PDA檢測(cè)器;DZF-6050MBE型電熱恒溫真空干燥箱上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;SB-5200DTN型超聲波清洗機(jī)寧波新芝生物科技股份有限公司;TDZ5-WS型多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司;CP225D型分析天平德國(guó)Sartorius公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件色譜柱:VenusilMP C18(2)柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相:A相為甲醇,B相為水,進(jìn)行梯度洗脫(0 min,1% A;10 min,5% A;15 min,15% A;21 min,17% A;25 min,20% A;30 min,24% A);檢測(cè)波長(zhǎng):260 nm;體積流量:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL;柱溫:35 ℃。

1.2.2對(duì)照品溶液的制備分別精密稱(chēng)取減壓干燥至恒重的胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷對(duì)照品適量,加純凈水溶解并制成質(zhì)量濃度分別為0.58、0.55、0.55、0.55、0.59 mg/mL的對(duì)照品貯備液,備用。

1.2.3供試品溶液的制備精密稱(chēng)取黨參粉末(過(guò)50目篩)1.0 g,置50 mL具塞錐形瓶中,精密加純凈水20 mL,室溫下超聲提取60 min(超聲功率600 W,工作頻率40 kHz),放至室溫,搖勻,倒入離心管中,4000 r/min離心10 min,過(guò)濾,重復(fù)操作1次,合并提取液,以純凈水定容至50 mL量瓶中,用前倒入離心管中,4000 r/min離心15 min,取上清液以0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò),即得。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)限和定量限分別精密吸取各對(duì)照品貯備液適量,加純凈水定容至25 mL制成混合對(duì)照品溶液,胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷質(zhì)量濃度分別為58.00、66.00、22.00、110.00、59.00 μg/mL,置于4 ℃的冰箱內(nèi),臨用前以0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)。并逐級(jí)稀釋,得到一系列不同質(zhì)量濃度的5種核苷混合對(duì)照品溶液,在1.2.1項(xiàng)條件下進(jìn)行測(cè)定,以對(duì)照品的峰面積(y)對(duì)相應(yīng)的質(zhì)量濃度(x)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍;逐步稀釋各對(duì)照品溶液,按信噪比(S/N)約為3計(jì)算檢測(cè)限(LOD),以S/N約為10計(jì)算定量限(LOQ)。

1.2.5精密度實(shí)驗(yàn)分別精密取含胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷58.00、66.00、22.00、110.00、59.00 μg/mL的混合對(duì)照品溶液,按1.2.1項(xiàng)條件下同一天內(nèi)進(jìn)樣6次,以測(cè)定的平均峰面積計(jì)算日內(nèi)精密度;連續(xù)測(cè)定3 d,以測(cè)定的平均峰面積計(jì)算日間精密度。

1.2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一黨參樣品6份(S16),按1.2.3項(xiàng)下條件制備供試品溶液,記錄其色譜峰面積,通過(guò)計(jì)算RSD以考察本方法的重復(fù)性。

1.2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將配制好的供試品溶液(S16)在常溫條件下密閉放置,分別于0、2、4、8、12、24 h測(cè)定,記錄其色譜峰面積,通過(guò)計(jì)算RSD以考察本樣品的穩(wěn)定性。

1.2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的黨參樣品約0.50 g(S16),共9份,分別精密加入胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷對(duì)照品貯備溶液適量,按1.2.3項(xiàng)下條件制備供試品溶液,驗(yàn)證本方法的準(zhǔn)確性,計(jì)算加樣回收率。

1.2.9樣品含量測(cè)定制備18批樣品溶液,平行3份,測(cè)定其5種核苷和堿基的含量。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。

2　結(jié)果與討論

2.1色譜條件的選擇與優(yōu)化

核苷和堿基類(lèi)化合物極性大,較難分離,本實(shí)驗(yàn)比較了以下4種色譜柱Innoval AQ C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),Venusil XBP C18(L)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),Durashell C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)和Venusil MP C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Venusil MP C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)對(duì)5種核苷和堿基類(lèi)成分達(dá)到了良好的分離,第2～3種色譜柱不能很好的分離5種核苷和堿基類(lèi)成分,而第1種色譜柱峰形較差。同時(shí)比較了不同的流動(dòng)相組成如乙腈-水、甲醇-水、乙腈-甲酸水溶液和甲醇-甲酸水溶液對(duì)樣品的分離效果,發(fā)現(xiàn)甲醇-水做流動(dòng)相時(shí)分析物的分離效果較好。因此最終選擇了Venusil MP C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)和甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫。在190～400 nm下用PDA檢測(cè)器對(duì)混合對(duì)照品進(jìn)行光譜掃描并保存全光譜,可以觀測(cè)到胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷在260 nm處都有較大的吸收峰,故選擇260 nm作為其檢測(cè)波長(zhǎng)。按照1.2項(xiàng)條件下色譜條件進(jìn)行分析,各成分分離度良好,對(duì)照品和樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

表3　對(duì)照品的線性關(guān)系和范圍Table 3　Linearity and ranges of control products

圖1　對(duì)照品(A)及S16號(hào)樣品(B)的HPLC圖Fig.1　HPLC fingerprinting of control products(A)and S16 sample(B)注:1.胞苷;2.尿苷;3.腺嘌呤;4.鳥(niǎo)苷;5.腺苷。

2.2提取條件的選擇與優(yōu)化

目前文獻(xiàn)中多采用回流提取法[7]和超聲提取法[8],本實(shí)驗(yàn)考察了這2種方法,以獲得最佳的提取效率。結(jié)果表明,黨參中5種成分的總量平均值超聲提取法(1186.10±0.01 μg/g)顯著高于回流提取法(593.04±0.09 μg/g),故選擇超聲提取法。以5種核苷和堿基的總量為考察指標(biāo),選取甲醇和水的體積比(A)、提取時(shí)間(B)、溶劑用量(C)和提取次數(shù)(D)為考察因素,采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(表2)。由表2可知,供試品最佳提取工藝為加20倍量的純凈水超聲提取2次,每次60 min。

表2　超聲提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2　Results of orthogonal experiment of ultrasonic extraction

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)限和定量限

結(jié)果表明,胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷質(zhì)量濃度分別在0.58～58.00、0.66～66.00、0.22～22.00、1.10～110.00、0.59～59.00 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9995以上,結(jié)果見(jiàn)表3。

2.4精密度實(shí)驗(yàn)

胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷日內(nèi)精密度RSD分別為0.97%、0.86%、1.10%、1.05%、0.84%,其日間精密度RSD分別為1.37%、1.46%、1.23%、1.51%、1.84%。結(jié)果表明,以胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷所建立的高效液相色譜法及檢測(cè)儀器檢測(cè)時(shí)精密度良好。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷的含量分別為227.60±0.09、330.08±0.03、83.36±0.04、362.08±0.02、252.24±0.04 μg/g,RSD分別為2.29%、1.50%、1.24%、1.83%、1.79%,表明該方法的重復(fù)性較好。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷色譜峰面積的RSD分別為2.76%、1.91%、2.65%、2.38%、2.63%,說(shuō)明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)

黨參(S16)中5種核苷和堿基的平均回收率在97.05%～101.08%,RSD 1.19%～3.01%,符合分析要求,結(jié)果見(jiàn)表4。表明上述實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度較高,能應(yīng)用于黨參中核苷和堿基類(lèi)活性成分的檢測(cè)與分析。

2.8樣品的含量測(cè)定

按外標(biāo)兩點(diǎn)法定量,分別計(jì)算胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷的含量,結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5可知,18批黨參藥材均含有胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷和腺苷成分,表明不同產(chǎn)地黨參中核苷和堿基類(lèi)成分較為相似。18批黨參樣品的含量測(cè)定結(jié)果顯示:胞苷、尿苷、腺嘌呤、鳥(niǎo)苷、腺苷及核苷總含量分別在范圍68.71～478.82、171.33～629.60、33.63～140.05、221.31～651.37、143.26～511.78、679.87～2011.67 μg/g,平均含量分別為222.36、369.11、55.72、458.20、333.96、1440.82 μg/g。表明不同產(chǎn)地黨參藥材中各核苷和堿基的含量具有明顯差異,產(chǎn)于山西省平順縣龍溪鎮(zhèn)和杏城鎮(zhèn)的黨參品種含量較高,也與其歷來(lái)黨參(潞黨)的道地產(chǎn)區(qū)相映證[9]。同時(shí)作者也發(fā)現(xiàn)相同種植區(qū)的不同種植基地的黨參藥材中核苷和堿基的含量也有一定差異,這是否與環(huán)境條件、栽培技術(shù)、田間管理等有關(guān)[10-11]。因此,進(jìn)行黨參栽培時(shí),栽培基地的選擇對(duì)黨參的品質(zhì)形成具有重大影響,文中實(shí)驗(yàn)結(jié)果將對(duì)黨參的栽培基地選擇具有一定的指導(dǎo)意義。

同時(shí),本文對(duì)平順縣虹梯關(guān)鄉(xiāng)界畔峧村的不同生長(zhǎng)年限中核苷和堿基化合物的測(cè)定表明,胞苷和腺嘌呤隨著生長(zhǎng)年限的增加而增加,與王愛(ài)娜[12]對(duì)黨參中蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的研究結(jié)果相一致,而尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷及核苷總量隨著生長(zhǎng)年限呈現(xiàn)遞減的趨勢(shì),與王秀文[13]對(duì)黨參中黨參炔苷等化合物的研究結(jié)果類(lèi)似,進(jìn)一步表明生長(zhǎng)年限對(duì)黨參化學(xué)成分有顯著性影響。本研究中不同生長(zhǎng)年限的黨參樣本量較少,為了進(jìn)一步證實(shí)不同生長(zhǎng)年限黨參與其品質(zhì)形成的相關(guān)性,后續(xù)研究將采集更多的黨參藥材樣本進(jìn)行系統(tǒng)研究。

樣品山西省平順縣東寺頭鄉(xiāng)秦光村(S5)栽培過(guò)程中使用壯根靈導(dǎo)致其核苷和堿基含量顯著低于其他樣品,與陳玉武[14]對(duì)黨參栽培過(guò)程中噴施黨參壯根靈而降低黨參炔苷含量的研究結(jié)果類(lèi)似,全面評(píng)價(jià)壯根靈對(duì)黨參藥材品質(zhì)的影響有待進(jìn)一步研究。

結(jié)果表明,不同產(chǎn)地的黨參藥材質(zhì)量差異較大,故有必要對(duì)黨參藥材的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià),以往對(duì)黨參的質(zhì)量控制研究報(bào)道很多,但至今尚無(wú)統(tǒng)一規(guī)范的質(zhì)量控制方法,本方法可作為《中國(guó)藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量評(píng)價(jià)指標(biāo)之一,該方法也為黨參生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)地環(huán)境選擇、農(nóng)藝措施提供了新的分析方法和依據(jù)。

3　結(jié)論

黨參在民間傳統(tǒng)用法是水煎劑,本文采用HPLC-UV方法,根據(jù)樣品峰最大吸收波長(zhǎng)和保留時(shí)間鑒定了黨參中的5個(gè)化合物,結(jié)果表明,黨參有紫外吸收的水溶性成分主要是核苷和堿基化合物。黨參所含核苷和堿基化合物可作為該藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)性成分之一,核苷和堿基化合物已被證實(shí)是重要的生物活性物質(zhì),與黨參藥效(增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血壓等)具有一定的關(guān)聯(lián)性。鑒于核苷和堿基類(lèi)成分在黨參藥材中含量為679.8672～2011.6720 μg/g,進(jìn)一步探討以其含量高低作為黨參藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣的衡量指標(biāo),很有必要。本方法操作簡(jiǎn)便,精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好,結(jié)果穩(wěn)定可靠,可作為黨參藥材的一個(gè)重要鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)手段之一,同時(shí)為闡明黨參及其相關(guān)制劑的藥理作用和質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

表4　加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Table 4　Results of the recovery rate test(n=3)

表5　不同產(chǎn)地黨參藥材中核苷和堿基的含量測(cè)定(μg/g,n=3)Table 5　Contents determination of nucleosides and bases in Radix Codonopsis materials from different producing areas(μg/g,n=3)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編. 中華人民共和國(guó)藥典(2010年版 一部)[S]. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:264-265.

[2]朱焰,魏均嫻. 黨參屬藥用植物研究狀況[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),1994,6(1):70-75.

[3]馮佩佩,李忠祥,原忠. 黨參屬藥用植物化學(xué)成分和藥理研究進(jìn)展[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,29(4):307-311.

[4]LI Chia-ying,XU Hong-xi,HAN Quan-bin,et al. Quality assessment of Radix Codonopsis by quantitative nuclear magnetic resonance[J]. Journal of Chromatography A,2009,1216(11):2124-2129.

[5]賀慶,朱恩圓,王崢濤,等. 黨參化學(xué)成分的研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志,2006,41(1):10-12.

[6]張雪梅,楊豐慶,夏之寧. 食品中核苷類(lèi)成分的藥理作用

研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2012,33(9):277-282.

[7]周菊峰,黃蘭芳,郭方遒. LC-ESI-MS快速同時(shí)測(cè)定冬蟲(chóng)夏草中主要核苷類(lèi)成分[J]. 中國(guó)中藥雜志,2009,34(18):2349-2352.

[8]DUAN Bao-zhong,WANG Li-zhi,DAI Xin-hua,et al. Identification and Quantitative Analysis of Nucleosides and Nucleobases in Aqueous Extracts of Fritillaria Cirrhosa D. DON. Using HPLC-DAD and HPLC-ESI-MS[J]. Analytical Letters,2011,44(15):2491-2502.

[9]李震宇,王愛(ài)娜,劉曉節(jié),等. 潞黨參極性和非極性成分HPLC指紋圖譜研究[J]. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,42(1):56-62.

[10]鄒元鋒,劉莎,陳興福,等. RP-HPLC同時(shí)測(cè)定黨參中黨參炔苷與蒼術(shù)內(nèi)酯[J]. 藥物分析雜志,2011,31(5):923-926.

[11]段琦梅,梁宗鎖,楊東風(fēng),等. 黨參質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的建立及不同產(chǎn)地黨參質(zhì)量差異性分析[J]. 中草藥,2012,43(5):995-999.

[12]王愛(ài)娜,秦雪梅,張勇,等. 高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地黨參中蒼術(shù)內(nèi)酯的含量[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志,2005,40(18):1436-1437.

[13]王秀文,趙慧輝,劉養(yǎng)清,等. 不同生長(zhǎng)年限山西黨參的RP-HPLC指紋圖譜研究[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2010,17(3):45-46.

[14]陳玉武,丁永輝,李成義,等. 黨參壯根靈對(duì)黨參質(zhì)量影響的研究[J]. 藥物分析雜志,2011,31(2):254-257.

Simultaneous determination of five nucleosides and bases inRadixCodonopsisby high performance liquid chromatography

WANG Gao-feng

(Department of Life Sciences,Guizhou Engineering Vocational College,Tongren 565200,China)

Ultrasonic assisted extraction and methods of HPLC were established to determine cytidine,uridine,adenine,guanosine and adenosine inRadixCodonopsis. The best extraction condition for Radix Codonopsis was 20 times the amount of pure water to extract by ultrasonic for 60 min,and repeat it for 2 times. Samples were separated and determined by a Venusil MP C18(2)(4.6 mm×250 mm,5 μm)using methanol-water system as mobile phase. Flow rate was 1.0 mL·min-1,and detection wavelength for fingerprinting was 260 nm with 35 ℃ for column temperature. Mass concentration of 5 components had good linear relation with peak areas(R2>0.9995). And average recovery rates were from 97.05% to 101.81% with RSD ≤ 3.01%. The contents of nucleosides inRadixCodonopsisfrom different producing areas were different. The contents of cytidine,uridine,adenine,guanosine,adenosine and total nucleosides in 18 samples were listed as the followings:68.71～478.82,171.33～629.60,33.63～140.05,221.31～651.37,143.26～511.78 and 679.87～2011.67 μg/g. The method in this study was easily performed with good precision,stability and reproducibility,accurate and reliable,so it was suitable to simultaneously determine the 5 components of nucleosides and bases inRadixCodonopsis. This provide scientific basis for objectively recognizing material basis of pesticide effect ofRadixCodonopsisand developing multi-index evaluation system.

HPLC;RadixCodonopsis;nucleosides;bases

2015-07-15

王高峰(1979-)，男，本科，講師，主要從事生物制藥的教學(xué)與研究工作,E-mail：80887665@qq.com。

TS207.3

A

1002-0306(2016)05-0315-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.05.055