Rb表達水平與胃癌中醫(yī)證型的相關性研究

王雨村　劉宏斌　何欣　杜小正

·臨床研究·

Rb表達水平與胃癌中醫(yī)證型的相關性研究

王雨村劉宏斌何欣杜小正

目的：檢測Rb基因在胃癌不同中醫(yī)證型中的表達水平及變化，探討Rb基因與胃癌中醫(yī)證型的關系。方法：選取2012 年10月至2014年10月在甘肅省腫瘤醫(yī)院胃腸外科入院行手術治療的胃癌患者162例，以慢性淺表性胃炎或正常胃組織標本為對照組，使用免疫組織化學技術檢測胃癌組織和正常組織標本中Rb表達情況，并在顯微鏡下觀察記錄組織細胞的陽性表達水平。結果：不同類型的中醫(yī)證型中，Rb蛋白表達由弱到強依次為：氣血虧虛型＜氣滯血瘀型＜痰濕凝結型＜肝氣犯胃型＜脾胃虛寒型＜胃熱傷陰型，且Rb陽性表達與中醫(yī)證型之間呈負相關（r=-0.228，P＜0.01），并與胃癌的分級、分期存在一定的相關性。結論：Rb基因的表達在不同胃癌中醫(yī)證型中存在演變趨勢。

胃癌；中醫(yī)證型；Rb；免疫組化；相關性

胃癌是常見的消化道腫瘤。全球每年大概有一百萬新發(fā)胃癌病例，約有70萬人死于胃癌及其并發(fā)癥，在惡性腫瘤死因中位列第二位［1-3］。在我國，每年大約有2萬人被檢出患有胃癌，病死率男性（40.8/10萬）和女性（18.6/10萬），分別是歐美發(fā)達國家的4.2～7.9倍和3.8～8.0倍［4，5］。研究表明，Rb基因與胃癌的侵襲及轉移有關，并且，原癌基因、抑癌基因及細胞因子在氣滯血瘀證和邪熱內蘊證中的表達存在差異性，由此推測出中醫(yī)證型與胃癌發(fā)生發(fā)展過程中基因的表達可能存在關聯［6］。本研究對胃癌6個中醫(yī)證型與Rb基因表達進行分析研究，探討胃癌中“證”的實質，以期為中醫(yī)藥治療胃癌、預測其轉歸提供新思路。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2012年10月至2014年10月就診于甘肅省腫瘤醫(yī)院胃腸外科病理確診并手術治療的胃癌患者162例，其中女性64例，男性98例，平均年齡（53.1±7.4）歲。根據胃癌分級系統，其中Ⅰ級41例，Ⅱ級82例，Ⅲ級39例；根據胃癌TNM分期，其中Ⅰ期28例（ⅠA期10例、ⅠB期18例），Ⅱ期49例（ⅡA期22例、ⅡB期27例），Ⅲ期46例（ⅢA期19例、ⅢB期14例、ⅢC期13例），Ⅳ期39例。根據胃癌中醫(yī)分型（中醫(yī)證型參照《中醫(yī)胃癌診療指南（草案）》［7］），其中胃熱傷陰28例，脾胃虛寒39例，痰濕凝結17例，肝氣犯胃36例，氣血虧虛19例，氣滯血瘀23例。以慢性淺表性胃炎或正常胃組織標本為對照組。胃癌組織標本蠟塊由甘肅省腫瘤醫(yī)院病理科提供。

1.2主要儀器與試劑CH-212型顯微鏡購自奧林巴斯集團公司，AO-82型石蠟切片機由廣州晟龍實驗儀器設備有限公司生產。鼠抗人C-erbB-2免疫組化單克隆抗體、免疫組化試劑盒、3，3-二氨基聯苯胺（Di?aminobenzidine，DAB）顯色試劑盒、檸檬酸抗原修復液、多聚賴氨酸防脫片劑、EDTA抗原修復液均購自邁新生物技術有限公司。

1.3方法

1.3.1組織標本的處理。 將組織蠟塊切成約5μm厚的切片，平鋪在載玻片上（實驗前預先用多聚賴氨酸處理）室溫下干燥。干燥后置于恒溫烤箱內60℃過夜備用。每次染色前，均需將標本切片再次置于恒溫烤箱內，60℃烘烤50-60分鐘后才可使用。

1.3.2免疫組化。石蠟切片二甲苯脫蠟、乙醇脫水后，抗原修復；將抗原修復好的切片SP法免疫組化染色，DAB顯色，蘇木素染色，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，最后鏡檢。

2.3陽性標準切片在40×10倍視野下，計數50個腫瘤細胞，每張切片至少計數5個視野范圍。陽性標準［8］：陽性細胞百分數≤10%計為無陽性表達；11%-30%為（+）；31%-70%為（++）；＞70%為（+++）。

2.4統計學方法所有數據采用SPSS19.0統計學軟件進行處理。胃癌的各項觀察指標采用描述性統計，中醫(yī)證候各組間應用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1胃癌組織中Rb蛋白的表達水平胃癌組織中Rb的陽性率為53.7%，與正常組織及慢性胃炎組織相比，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。在3級腫瘤分級中，Rb陽性表達率分別為63.4%、56.1%、38.5%，與正常胃及慢性胃炎組織相比，差異有統計學意義，見表2。胃癌TNM腫瘤分期中，Rb蛋白在腫瘤的4個分期中陽性率分別為64.3%、61.2%、54.3%、35.9%，與對照組相比，經統計學處理，表明差異有統計學意義，見表3。

表1　Rb蛋白的表達水平（例）

表2　Rb在不同胃癌分級中的表達水平（例）

表3　Rb在不同胃癌分期中的表達水平（例）

2.2中醫(yī)證型在不同胃癌分級中的表達情況Ⅰ級胃癌患者中以脾胃虛寒型最多，共12例，占29.3%，氣滯血瘀型最少，共3例，占7.3%；Ⅱ級胃癌患者中肝氣犯胃型最多，共21例，占25.6%，胃熱傷陰型最少，共7例，占8.5%；Ⅲ級胃癌患者中胃熱傷陰型最多，共17例，占43.6%，痰濕凝結型最少，共2例，占5.1%。見表4。

表4　中醫(yī)證型在不同胃癌分級中的表達情況［例（%）］

2.3中醫(yī)證型在不同胃癌分期中的表達情況將胃癌標本按TNM體統分期，Ⅰ期患者中以胃熱傷陰型最多，共11例，占39.3%，痰濕凝結型最少，共1例，占3.6%；Ⅱ期患者中以肝氣犯胃型最多，共15例，占30.6%，氣滯血瘀型最少，共3例，占6.1%；Ⅲ期患者以脾胃虛寒型最多，共17例，占37.0%，氣血虧虛型最少，共2例，占4.3%；Ⅳ期以氣滯血瘀型最多，共10例，占25.6%，痰濕凝結型最少，共3例，占7.7%。見表5。

表5　中醫(yī)證型在不同胃癌分期中的表達情況［例（%）］

2.4胃癌不同中醫(yī)證型中Rb的表達情況不同中醫(yī)證型胃癌組織中Rb陽性表達不同，=11.312，P＜0.05，差異具有統計學意義。Rb陽性表達與中醫(yī)證型之間呈負相關，r=-0.228，P＜0.01。Rb蛋白陽性表達率由弱到強依次為：氣血虧虛型（15.8%）＜氣滯血瘀型（21.7%）＜痰濕凝結型（29.4%）＜肝氣犯胃型（41.7%）＜脾胃虛寒型（46.2%）＜胃熱傷陰型（53.6%）。見表6。

表6　不同中醫(yī)證型中Rb表達情況

3　討論

多數學者認為，癌基因和抑癌基因的表達產物能反映細胞的增殖狀態(tài)，臨床上可作為早期診斷和預測預后的指標。Rb基因為機體內一種重要的細胞周期負性調控基因，是最早發(fā)現的抑癌基因［9］。有研究［10］表明，在所有人類腫瘤細胞中，均存在Rb基因表達異常（包括調控異常或基因突變）。張宇龍的研究［11］顯示，在進展期胃癌原發(fā)灶中，Rb蛋白高表達，且Rb蛋白的表達程度與胃癌腫瘤細胞的分化程度密切相關。有研究［12］提示，中藥胃復春聯合維A酸可上調抑癌基因Rb表達，并下調癌基因C-erbB-2的表達治療胃癌前病變，但該研究病例數不多，觀察隨訪時間不長。Rb蛋白參與胃癌的發(fā)生，且其與組織學類型、淋巴轉移率及浸潤深度有顯著相關性［13］。說明Rb蛋白表達缺失的胃癌更具侵襲、轉移的惡性生物學行為，并越到晚期，Rb蛋白越易發(fā)生缺失。

本研究中，Rb在胃癌組織中高表達，陽性率為53.7%，在正常胃組織和慢性胃炎組織中低表達（P＜0.05），說明Rb的異常表達與胃癌發(fā)生存在一定的相關性。本研究發(fā)現，中醫(yī)證型在胃癌分級與分期中的分布不同，且中醫(yī)證型與胃癌分期正相關，提示隨著胃癌病情的進展，腫瘤分期越來越晚，中醫(yī)證型也由實轉虛，呈現單純虛癥或者虛實夾雜。Rb蛋白陽性表達水平由弱到強分別為：氣血虧虛型＜氣滯血瘀型＜痰濕凝結型＜肝氣犯胃型＜脾胃虛寒型＜胃熱傷陰型。結果提示：Rb基因在不同胃癌中醫(yī)證型中存在演變趨勢。

胃癌的4個TNM分期中：Ⅰ期患者中以胃熱傷陰型最多，痰濕凝結型最少；Ⅱ期患者中以肝氣犯胃型最多，氣滯血瘀型最少；Ⅲ期患者以脾胃虛寒型最多，氣血虧虛型最少；Ⅳ期以氣滯血瘀型最多，痰濕凝結型最少。胃癌腫瘤Ⅰ期為本病的初級階段，癌腫對于胃上皮浸潤程度尚淺，病變程度較輕，本期患者正氣尚強，病情不明顯，常常未能引起患者的重視，此期以胃熱傷陰最多見；Ⅱ期患者由于癌腫已形成實體，處于邪正相爭的階段；Ⅲ期患者中以脾胃虛寒最多見，此期患者癌腫侵犯繼續(xù)加重，中醫(yī)辨證認為該期患者癥狀表現屬于虛實證；Ⅳ期患者中以氣滯血瘀者最多，此期患者多為腫瘤晚期患者，機體免疫功能減退，正氣消退，形體衰敗，正不勝邪。

西醫(yī)依據腫瘤的異型性將腫瘤分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級，分化程度越高表明癌細胞結構及功能越接近正常組織，其惡性程度越低。本次研究發(fā)現：腫瘤分級Ⅰ級胃癌患者中以脾胃虛寒型最多，氣滯血瘀型最少；Ⅱ級胃癌患者中肝氣犯胃型最多，胃熱傷陰型最少；Ⅲ級胃癌患者中胃熱傷陰型最多，痰濕凝結型最少。

綜上所述，胃癌組織中Rb表達水平高于正常組織及慢性胃炎組織，提示Rb基因的表達對胃癌的生長、浸潤和轉移有著重要作用。疾病的證型不同，則Rb蛋白的表達情況亦不同。

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1004-2725（2016）08-0580-04

730050甘肅 蘭州，甘肅省腫瘤醫(yī)院婦瘤科（王雨村），病理科（何欣）；730000甘肅 蘭州，甘肅省中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結合學院（王雨村、杜小正）；730050甘肅 蘭州，蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院普外科（劉宏斌）

劉宏斌，E-mail：liuhb2012@126.com