RP—HPLC測(cè)定不同儲(chǔ)藏溫度的余甘子精粉中單寧酸沒食子酸的含量變化

任嬌　陳平　王芬　周國(guó)麗　范源

摘要：目的測(cè)定余甘子精粉在不同溫度儲(chǔ)藏下沒食子酸、單寧酸活性成分的含量變化，分析余甘子精粉中活性成分最適宜的儲(chǔ)存溫度。方法將余甘子精粉分別置于30℃、5℃、-20℃環(huán)境下避光保存，利用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）進(jìn)行沒食子酸、單寧酸含量測(cè)定。結(jié)果隨儲(chǔ)存溫度的升高，余甘子精粉中沒食子酸和單寧酸的含量從-20～5℃有所升高，從5℃～30℃之間都明顯的下降。結(jié)論余甘子精粉中沒食子酸和單寧酸在不同溫度儲(chǔ)存下含量不同，5℃時(shí)含量達(dá)到最高，可為余甘子精粉的儲(chǔ)存及養(yǎng)護(hù)提供一定參考。

關(guān)鍵詞：余甘子精粉；沒食子酸；單寧酸；反相高效液相色譜

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）10-0069-03

Determination of Tannins and Gallic Acid Content in Emblica Powder

at Different Storage Temperatures by RP-HPLC

REN Jiao1， CHEN Ping1， WANG Fen1， ZHOU Guoli1， FAN Yuan2

（1. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan；

2. The First Affiliated Hospital of Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Ynnan）

【Abstract】Objective： To determine the content change of gallic acid and tannic acid activity in emblica powder stored at different temperatures and to analyze best storage temperature for active ingredients in emblica powder. Methods： Emblica powder was kept in dark place in 30℃， 5℃ and -20℃ of environment and RP-HPLC was used to determine gallic acid and tannic acid content. Results： With the increase of storage temperature， the gallic acid and tannic acid content in emblica powder increased from -20 to 5℃ to some extent and significantly decreased from 5℃ to 30℃. Conclusion： The gallic acid and tannic acid content in emblica powder is different at different storage temperatures. When stored at 5℃， its content is highest. The study can provide certain reference for the storage and conservation of emblica powder.

【Key words】emblica powder， gallic acid， tannic acid， RP-HPLC

余甘子（Fructus Phyllanthi）是大戟科（Euphorbiaceae）、葉下珠屬（Phyllanthus）植物余甘子（Phyllanthus emblica L.）的果實(shí)。又名油甘子、滇橄欖、橄欖子、庵摩勒、久如拉、麻頂幫，氣微、味甘、酸、澀，性涼。它在中國(guó)、印度、伊朗、阿富汗等17個(gè)國(guó)家的藥物體系和我國(guó)中藥、藏藥、蒙藥、傣藥、維吾爾民族藥等傳統(tǒng)藥物體系中應(yīng)用極廣。余甘子整株植物作為藥食兩用的植物，各個(gè)器官應(yīng)用廣泛，共涉及42種藥用或保健功能[1]。作為一味重要的傳統(tǒng)民族藥，已被載入多版《中華人民共和國(guó)藥典》[2]（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）。

余甘子精粉是采用噴霧干燥技術(shù)，通過提取余甘子果實(shí)的有效成分而得到的一種速溶粉。余甘子精粉呈土黃色或淺黃色，含有豐富的維生素C、E多種氨基酸，富含鞣質(zhì)、有機(jī)酸、酚類，還含有相當(dāng)數(shù)量的能清除自由基的超氧化物歧化酶（SOD），其中每克含量高達(dá)482.14單位[2]。且無(wú)明顯的毒副作用[3-4]。具有清熱涼血、消食健胃、生津止渴、抗衰老、防癌癥等多種保健與治療的作用而廣泛應(yīng)用。

目前對(duì)余甘子精粉質(zhì)量的控制多集中在黃酮和多糖類成分。酚類化合物是其藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一[5-7]，其中沒食子酸、單寧酸為傳統(tǒng)中藥的常見酚類成分之一。

余甘子精粉在不同溫度儲(chǔ)存中活性成分易發(fā)生褐變對(duì)其產(chǎn)品的穩(wěn)定性均有較大的影響。為提高余甘子精粉的利用，本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法測(cè)定在不溫度儲(chǔ)存條件下，余甘子精粉中單寧酸和沒食子酸的含量[8]確定最適宜儲(chǔ)存的溫度。

2材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)試劑滇橄欖精粉樣品（龍潤(rùn)集團(tuán)有限責(zé)任公司）；單寧酸對(duì)照品和沒食子酸對(duì)照品（索萊寶生物科技有限公司）；50%甲醇；0.2%磷酸（色譜純）；甲醇（色譜純）。

2.2儀器Agilent HP1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；Agilent C18柱；電子天平CP114（奧豪斯儀器上海有限公司制造）；HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市正基儀器有限公司）；溫度計(jì)；回流裝置；抽濾器。

2.3HPLC的色譜條件

2.3.1 單寧酸的測(cè)定條件Agilent C18色譜柱；流動(dòng)相 水：甲醇（20%：80%）；溫度25℃；流速：0.5 mL/min；波長(zhǎng)275 nm；進(jìn)樣量2 uL；時(shí)間：10 min。

2.3.2沒食子酸的測(cè)定條件Agilent C18色譜柱；流動(dòng)相 0.2%磷酸：甲醇（95%：5%）；溫度25℃；流速1 mL/min；波長(zhǎng)273 nm；進(jìn)樣量10 uL；時(shí)間15 min。

2.4對(duì)照品溶液的制備

2.4.1 單寧酸對(duì)照品溶液的制備精密稱取0.00044 g單寧酸對(duì)照品，置于10 mL容量瓶中，用7 mL乙醇、2.9 mL水和0.1 mL丙酮的混合液定容，即得。

2.4.2沒食子酸對(duì)照品溶液的制備精密稱取0.0025 g沒食子酸對(duì)照品，置于10 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，即得。

2.5樣品溶液的制備

2.5.1單寧酸酸樣品溶液的制備取適量余甘子精粉，過60目篩，精密稱定3份5 g余甘子精粉，分別置于密封袋里，放在30℃、5℃、-20℃環(huán)境下避光保存72 h，置具塞錐形瓶中，按料液比1：30加入60%乙醇濃度，稱重，提取溫度85℃、回流提取時(shí)間1.5 h[9]，再次稱重，冷卻至室溫，用60%乙醇溶液補(bǔ)足失重，搖勻，真空抽濾一次，測(cè)量濾液體積，取2 mL續(xù)濾液用（0.45 um）微孔慮膜過濾，即得所需供試品。

2.5.2沒食子酸樣品溶液的制備取適量余甘子精粉，過60目篩，精密稱定3份5 g余甘子精粉，分別置于密封袋里，放在30℃、5℃、-20℃環(huán)境下避光保存72 h，置具塞錐形瓶中，精密加入250 mL的50%甲醇溶液，稱重，回流提取1 h[10]，冷卻至室溫，再次稱重，用50%甲醇溶液補(bǔ)足失重，搖勻，真空抽濾一次，測(cè)量濾液體積，取2 mL續(xù)濾液用（0.45 um）微孔慮膜過濾，即得所需供試品。

2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取對(duì)照品2.58 ug，置于10 mL容量瓶中，用乙醇、水、丙酮體積比為69.9、29.8、0.3%的溶液溶解并定容至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。按上述單寧酸色譜條件分別取2、4、6、8、10 uL不同體積進(jìn)樣，以單寧酸的峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性回歸方程y=5719.5x-1924.8，r=0.9974，結(jié)果表明：?jiǎn)螌幩岱迕娣e值與質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為0.516～2.58ug。

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取對(duì)照品2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，用50%的甲醇溶解定容至刻度，搖勻作為儲(chǔ)備液。分別精密吸取0.1、0.5、1、2、4 mL于10 mL容量瓶中，50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即配制成濃度為1、5、10、20、40 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣20 uL，以沒食子酸的峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性回歸方程y=114.7x+2.4554，r=0.9999，結(jié)果表明：沒食子酸峰面積值與濃度有良好的線性關(guān)系，線性范圍為1～10 ug/mL。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1-3及圖1-2。

4結(jié)論

以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出：不同溫度儲(chǔ)存下余甘子精粉中的單寧酸、沒食子酸活性成分會(huì)發(fā)生變化，其中較高溫易促使單寧酸、沒食子酸等活性物質(zhì)含量下降，當(dāng)儲(chǔ)存溫度在5℃時(shí)單寧酸、沒食子酸的含量最高。

近年來(lái)世界衛(wèi)生組織已將余甘子指定為世界廣泛種植的3種保健植物之一[11-13]。我國(guó)目前余甘子精粉產(chǎn)量較大，應(yīng)用廣。如果不注重儲(chǔ)存的溫度，可導(dǎo)致余甘子的褐變，影響到余甘子產(chǎn)品的質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)利用反相高效液相色譜法對(duì)其不同溫度儲(chǔ)存下的含量測(cè)定，研究并分析余甘子精粉適宜的儲(chǔ)存溫度，可以較好的保證其質(zhì)量，為余甘子精粉的儲(chǔ)存及養(yǎng)護(hù)提供一定參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]夏泉.中國(guó)葉下珠屬植物（phyllanthus）的生藥學(xué)及民族藥學(xué)研究[D].北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士論文，1997：134-142.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人名共和國(guó)中國(guó)藥典[S].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：18-19.

[3]李肖玲，崔嵐，祝德秋.沒食子酸生物學(xué)作用的研究進(jìn)展[J].200001.

[4]李秀麗，葉峰，俞騰飛.余甘子的藥理研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17（2）：266-267.

[5]SHI Yong-ping，YANG Zhi-peng，HUA Li-ming.The study of nutritive components of flash of Fhyllanthus emblica fruit in Guizhou.Journal of Guizhou Normal University，1994，12（2）：1-6.

[6]馬志紅，陸忠兵，石碧.單寧酸的化學(xué)性質(zhì)及應(yīng)用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15（1）：87-91.

[7]Huan Yang，Qinying Gu，Tingting Gao，Xubo Wang，Phenwei Chue，Qinan Wu，and Xiaobin Jia.Flavonols and derivatives of gallic acid from young leaves of Toona sinensis（A.Juss.）Roemer and evaluation of their anti-oxidant capacity by chemical methods[J].Pharmacogn Mag 2014，10（38），185-190.

[8]徐義俠.余甘子化學(xué)成分及總酚提取工藝研究[D].北京中醫(yī)藥大學(xué)，2009（11）.

[9]蘇寧，王超，王昌濤，等.余甘子水解性單寧的提取及其功效研究[J].食品科技，2012，37（10）：191-195.

[10]范源，趙江盛，徐志平，等.余甘子中沒食子酸等活性成分在自然儲(chǔ)藏時(shí)的變化及分析[J].2014，35（2）：57-58.

[11]師冰，徐格雪，牛云壯，等.余甘子的現(xiàn)代研究和開發(fā)利用[J].云南省藥物研究所，2006，27（3）：76-77.

[12]吳冬意，HPLC法測(cè)定余甘子中沒食子酸的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2011，24，（6）：880-881.

[13]張鴻雁，沙磊，石任兵，等.RP-HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地余甘子藥材和鞣質(zhì)有效部位中3種成分的含量[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，2012，27（11）：2834-2838.