豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗不同組合免疫試驗(yàn)效果觀察

張紅兵　芮平平　張登平　楊曉偉　繆 超　馬士孝　孫小柱

（1.南京市高淳區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京　211300；2.南京市高淳區(qū)東壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京　211300；3.南京市高淳區(qū)古柏鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京　211300）

豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗不同組合免疫試驗(yàn)效果觀察

張紅兵1芮平平1張登平1楊曉偉2繆 超3馬士孝2孫小柱1

（1.南京市高淳區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京211300；2.南京市高淳區(qū)東壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京211300；3.南京市高淳區(qū)古柏鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京211300）

近幾年來，我區(qū)以建設(shè)高效生態(tài)畜牧業(yè)為目標(biāo)，著力推進(jìn)生豬養(yǎng)殖規(guī)?；?、生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化、管理規(guī)范化、經(jīng)莒產(chǎn)業(yè)化，大力實(shí)施生豬標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖，生豬產(chǎn)業(yè)已成為我區(qū)農(nóng)業(yè)增效、農(nóng)民增收的致富產(chǎn)業(yè)。隨著養(yǎng)豬業(yè)的快速增長，豬的傳染病也出現(xiàn)了更多、更新的種類，嚴(yán)重影響了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，尤其是豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病三病嚴(yán)重威脅著生豬的生產(chǎn)安全，雖經(jīng)過幾年來的防控，但至今仍沒有得到徹底凈化。為探索科學(xué)免疫接種方法，確定合理有效的免疫程序，2012年我站申報(bào)實(shí)施了“規(guī)模豬場疫病防控標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)應(yīng)用與推廣”三新工程項(xiàng)目，利用項(xiàng)目建設(shè)時(shí)間，筆者在本區(qū)轄內(nèi)選擇了1個(gè)萬頭規(guī)模豬場的120頭仔豬開展了豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病三種疫苗不同組合方式的免疫對比試驗(yàn)，并評價(jià)不同組合方式免疫后的抗體水平和免疫副反應(yīng)情況，以便遴選出免疫效果好、副反應(yīng)小的三種疫苗最佳的免疫組合方式，制定和優(yōu)化免疫程序，并在全區(qū)規(guī)模化養(yǎng)豬場推廣應(yīng)用。

豬口蹄疫；豬瘟；高致病性豬藍(lán)耳病；疫苗；試驗(yàn)；免疫效果

1 材料

1.1供試疫苗

（1）豬口蹄疫O型滅活疫苗——生產(chǎn)批號：1508001；生產(chǎn)日期：2015.08；有效期至2016.08；生產(chǎn)廠家：中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物藥廠。

（2）豬瘟活疫苗——生產(chǎn)批號：15080601；生產(chǎn)日期：2015.08.26；有效期至2017.02.25；生產(chǎn)廠家：中牧實(shí)業(yè)股份有限公司江西生物藥廠。

（3）高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗——生產(chǎn)批號：20141112；生產(chǎn)日期：2014.11.26；有效期至2016.05.25；生產(chǎn)廠家：吉林和元生物工程有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑

（1）豬口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒（①生產(chǎn)批號：20160115101-2，有效期至2016.07.14，生產(chǎn)單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所；②生產(chǎn)批號：20160330101-1，有效期至2016.09.23，生產(chǎn)單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所）。

（2）豬瘟診斷試劑［BIONOTE CSFV Ab ELISA ］，生產(chǎn)批號：44BPO010；有效期至2017.05.17；生產(chǎn)廠家：韓國安捷。

（3）高致病性豬藍(lán)耳病診斷試劑［BIONOTE PRRS Ab ELISA 4.0］，生產(chǎn)批號：4404PO019；有效期至2017.05.16；生產(chǎn)廠家：韓國安捷。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器及器械

試驗(yàn)檢測工作由高淳區(qū)畜牧獸醫(yī)站實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)，檢測所需的儀器及器械均符合實(shí)驗(yàn)要求和標(biāo)準(zhǔn)。

1.4試驗(yàn)動物

在高淳區(qū)山區(qū)片某萬頭規(guī)模豬場，選出飼養(yǎng)條件一致、健康狀況良好的育肥仔豬120頭（其中：40 日齡左右100頭、20 日齡左右20頭），在此之前均未接種任何疫苗。

2 試驗(yàn)方法

2.1方案設(shè)計(jì)

隨機(jī)將100頭日齡均為 40 日齡左右的仔豬分成5組，即甲組、乙組、丙組、丁組、戊組，每組20頭；再將20頭日齡均為 20 日齡左右的仔豬作為己組，開展豬瘟細(xì)胞源活疫苗、高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗、口蹄疫0型滅活苗免疫組合試驗(yàn)。其中：甲組同時(shí)分點(diǎn)免疫 CSF 和 HP-PRRS，1周后再進(jìn)行 FMD 免疫；乙組同時(shí)分點(diǎn)免疫FMD 和 HP-PRRS，1周后再進(jìn)行 CSF免疫；丙組單用三種疫苗，間隔1周；丁組同時(shí)分點(diǎn)免疫 FMD 和 CSF，1周后再進(jìn)行 HPPRRS 免疫；戊組同時(shí)分點(diǎn)免疫FMD、CSF、HP-PRRS三種疫苗［1］；己組首免HP-PRRS（20日齡左右），1周后同時(shí)分點(diǎn)免疫FMD 和CSF，4周后再同時(shí)分點(diǎn)免疫FMD 和CSF。

2.2試驗(yàn)豬疫苗注射方法

嚴(yán)格免疫操作規(guī)程，各組單種疫苗免疫采取豬左或右頸部肌肉注射；二種疫苗同時(shí)免疫采取豬左、右頸部肌肉分點(diǎn)注射；三種疫苗同時(shí)免疫采取豬左、右頸部肌肉分點(diǎn)注射（左一、右二或左二、右一），免疫劑量：口蹄疫0型滅活苗2ml，豬瘟細(xì)胞源活疫苗2頭份，高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗2頭份，并加施免疫標(biāo)識。

2.3臨床不良反應(yīng)觀察

免疫當(dāng)天至第7d，給予仔豬連續(xù)體溫測量，并觀察豬只精神狀況是否良好、飲食是否正常、體溫有無升高、是否有其它嚴(yán)重不良反應(yīng)（如呼吸急促、嘔吐、皮膚發(fā)紅等現(xiàn)象）。對應(yīng)急反應(yīng)強(qiáng)烈的仔豬及時(shí)注射腎上腺素脫敏，并記錄注苗時(shí)間及注苗后反應(yīng)。

2.4免疫抗體檢測

2.4.1血樣采集

每組最后一次免疫完成后分別在第29d、44d和66d取血樣，常規(guī)分離血清，并做好編號記錄，放置在冰柜內(nèi)保存，溫度設(shè)置在零下20℃，以待檢測。

2.4.2檢測方法

分離血清進(jìn)行豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病抗體檢測，口蹄疫抗體檢測采用液相阻斷ELISA法；豬瘟抗體檢測采用抗體阻斷ELISA法；高致病性豬藍(lán)耳病抗體檢測采用抗體間接ELISA法。試驗(yàn)過程嚴(yán)格按農(nóng)業(yè)部相關(guān)疫病防治技術(shù)規(guī)范及ELISA檢測試劑盒說明書操作，并對各組每次抗體檢測結(jié)果進(jìn)行比較，測算抗體合格率。

3 結(jié)果與分析

3.1免疫不良反應(yīng)觀察結(jié)果

本試驗(yàn)中六組樣本豬均未出現(xiàn)明顯的免疫副反應(yīng)［2］。

表1　豬口蹄疫O型液相阻斷ELlSA檢測平均抗體效價(jià)及免疫抗體合格率

3.2免疫效力與試驗(yàn)結(jié)果

3.2.1判定標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)農(nóng)業(yè)部動物疫病強(qiáng)制免疫及監(jiān)測實(shí)施方案的要求與規(guī)定，運(yùn)用液相阻斷ELISA檢測豬口蹄疫免疫抗體效價(jià)≥26判定為合格；運(yùn)用抗體阻斷ELISA檢測豬瘟，抗體陽性判定為免疫合格；運(yùn)用抗體間接ELISA檢測高致病性豬藍(lán)耳病，抗體陽性判定為免疫合格。所有已免豬只平均免疫抗體合格率≥70%判定為合格。

3.2.2口蹄疫免疫抗體檢測結(jié)果

采用液相阻斷ELISA檢測甲、乙、丙、丁、戊、己組豬口蹄疫免疫抗體效價(jià)及免疫抗體合格率結(jié)果見表1。

3.2.3豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體檢測結(jié)果

采用抗體ELISA法檢測甲、乙、丙、丁、戊、己組豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病抗體離散度及免疫抗體合格率結(jié)果見表2。

表2　豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病抗體ELlSA法檢測抗體離散度及免疫抗體合格率

3.2.4各組比較與分析

從表1可以看出，在豬口蹄疫方面，甲組、乙組、丙組、戊組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測平均抗體效價(jià)logG ＜23（戊組于第29d抗體效價(jià)略高），免疫抗體合格率均為0；丁組最后一次免疫后于第29d、44d采樣檢測平均抗體效價(jià)變動范圍為25＜logG＜26，免疫抗體合格率分別為55%和15%，于第66d檢測抗體效價(jià)＜23，免疫抗體合格率為0；己組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測平均抗體效價(jià)logG>26，免疫抗體合格率為100%，且抗體離散度?。?biāo)準(zhǔn)差S＜0.1），整齊度高。

從表2可以看出，在豬瘟方面：甲組、乙組、丙組、丁組、己組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%；戊組最后一次免疫后于第29d、44d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%，于第66d檢測群體免疫抗體合格率為85%。且各組抗體離散度相差不大，整齊度較高。

從表2可以看出，在高致病性豬藍(lán)耳病方面：甲組、乙組、丙組、丁組、己組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%；戊組最后一次免疫后于第29d、44d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%，于第66d檢測群體免疫抗體合格率為90%。且各組抗體離散度相差不大，整齊度較高。

4 結(jié)論

（1）從試驗(yàn)檢測情況看，己組口蹄疫免疫效果最佳，丁組口蹄疫抗體效價(jià)和免疫抗體合格率均高于甲組、乙組、丙組、戊組，緣于它的免疫組合方式與己組相似。

（2）豬口蹄疫O型滅活疫苗免疫一次不能得到較高的抗體滴度，且平均抗體效價(jià)和保護(hù)率低。因此，口蹄疫必須進(jìn)行二次以上免疫，才能產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫力。

（3）豬口蹄疫O型滅活疫苗、豬瘟弱毒疫苗、高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗三種疫苗中任何二種或三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫注射，臨床上無嚴(yán)重的不良反應(yīng)。

（4）在無二免情況下，各組豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病平均群體抗體合格率在一定時(shí)期均能達(dá)到國家規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)，但各組間相較免疫力及免疫持續(xù)期均存在差異。

（5）本研究通過對FMD、 CSF和HP-PRRS 三種疫苗進(jìn)行不同組合同時(shí)分點(diǎn)免疫，發(fā)現(xiàn)己組采用的免疫組合方式（即：仔豬20日齡左右首免HP-PRRS，1周后同時(shí)分點(diǎn)免疫FMD 和CSF，4周后再同時(shí)分點(diǎn)免疫FMD 和CSF），免疫效果及副作用均優(yōu)于其他組合方式，具有效價(jià)高、安全性好等特性，效果令人滿意，值得在規(guī)模養(yǎng)豬場應(yīng)用與推廣。為此，根據(jù)本區(qū)轄內(nèi)規(guī)模豬場豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病等重大疫病血清流行病學(xué)調(diào)查及免疫組合試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合我區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖環(huán)境，制定出如下免疫組合程序（供參考）：

①商品仔豬：仔豬18～21日齡首次免疫豬藍(lán)耳病弱毒苗，劑量為2頭份；28～30日齡同時(shí)分點(diǎn)免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，劑量分別為2頭份和2ml；60～65日齡同時(shí)分點(diǎn)免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，劑量分別為2頭份和2ml。

②種母豬：70日齡前豬瘟、口蹄疫、藍(lán)耳病三種疫苗接種程序同商品仔豬，以后每隔4個(gè)月同時(shí)分點(diǎn)免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，并每次于配種前使用藍(lán)耳病弱毒苗加強(qiáng)免疫，免疫劑量按說明書使用。

③種公豬：后備公豬使用藍(lán)耳病滅活苗初免，初免1個(gè)月后加強(qiáng)免疫一次藍(lán)耳病滅活苗；70日齡前豬瘟、口蹄疫二種疫苗接種程序同商品仔豬。以后每隔4個(gè)月同時(shí)分點(diǎn)免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，免疫7天后使用藍(lán)耳病滅活苗加強(qiáng)免疫，免疫劑量按說明書使用。

［1］梁朝君.豬口蹄疫 豬瘟 高致病性豬藍(lán)耳病三種疫苗不同組合同時(shí)分點(diǎn)免疫效果探析［J］.當(dāng)代畜牧，2014，（4Z）：81-83.

［2］任宇斕，于厚軍，蔣文生，等.豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病三種疫苗不同組合同時(shí)分點(diǎn)免疫效果觀察與分析［J］.中國動物檢疫，2011，28（5）：67-71.

農(nóng)業(yè)三新工程項(xiàng)目資助