定性免疫檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制方法及關(guān)注點(diǎn)

丁海明，黎燦文（番禺區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州511400）

定性免疫檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制方法及關(guān)注點(diǎn)

丁海明，黎燦文（番禺區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州511400）

【提要】定性免疫試驗(yàn)在臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)中占有較大比例，應(yīng)用廣泛，大量學(xué)者對免疫學(xué)檢驗(yàn)分析質(zhì)量控制及影響免疫學(xué)檢驗(yàn)分析質(zhì)量的相關(guān)因素等內(nèi)容進(jìn)行了探討。但定性免疫試驗(yàn)質(zhì)量控制方法、規(guī)則不斷被學(xué)者探索與改變，如“即刻法”、L-J質(zhì)控圖法及一些衍生質(zhì)控方法等。由于定性與定量免疫檢測的意義在臨床應(yīng)用上有很大不同，完全采用或套用定量檢測方法來評判定性免疫試驗(yàn)，有很多不適宜的地方。近幾年定性免疫的室內(nèi)質(zhì)量控制方法逐漸從定量質(zhì)控方法中分離出來，體現(xiàn)出其特有的性質(zhì)和判斷標(biāo)準(zhǔn)，該文就定性免疫檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制方法及關(guān)注點(diǎn)進(jìn)行分析。

免疫學(xué)試驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)室；質(zhì)量控制

室內(nèi)質(zhì)量控制可反映實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的重復(fù)性、穩(wěn)定性。定性免疫學(xué)試驗(yàn)方法不同于定量檢測方法，前者判斷檢測物質(zhì)的有無，后者判斷檢測物質(zhì)的多少，故在做室內(nèi)質(zhì)量控制時，定性免疫學(xué)試驗(yàn)在判別失控、在

控與定量檢測完全不同。根據(jù)ISO 15189 CNAS-L39醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床免疫學(xué)定性檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明文件（2015年6月1日第二次修訂執(zhí)行）規(guī)定，定性免疫試驗(yàn)的質(zhì)控判定規(guī)則：陰、陽性質(zhì)控物的檢測結(jié)果必須分別為陰性和陽性。根據(jù)文件要求和自己體會，談?wù)劧ㄐ悦庖呤覂?nèi)質(zhì)控方法。目前常用的定性免疫學(xué)方法有：定性ELISA法、熒光法、免疫印跡、金標(biāo)法、凝集法等。臨床檢測結(jié)果均以“陰性”或“陽性”形式報告，無須報告數(shù)值，所以在選擇質(zhì)控方法時，只需選擇純定性法，質(zhì)控規(guī)則為純定性規(guī)則：陰、陽性質(zhì)控物的檢測結(jié)果必須分別為陰性和陽性。在應(yīng)用純定性質(zhì)控規(guī)則時，作者認(rèn)為應(yīng)關(guān)注以下幾個關(guān)鍵點(diǎn)。

1　試劑選擇

1.1試劑評估目前市面上能購買的各種合格試劑（按照國家規(guī)定有“三證”）數(shù)百家公司生產(chǎn)，同一檢測項(xiàng)目也有數(shù)十家公司，選擇一種符合自己實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量目標(biāo)的試劑，需要評估試劑盒檢測低限、血清總補(bǔ)體（CH50）、重復(fù)性、測量再現(xiàn)性、陰陽性符合率等指標(biāo)，所有指標(biāo)均滿足質(zhì)量要求的試劑即可采用。

1.2試劑比對一個項(xiàng)目選擇好某產(chǎn)品檢測后，一般情況不要輕易更換，除非有質(zhì)量問題、供應(yīng)問題等。一旦選擇更換，必須將原使用試劑與待更換試劑進(jìn)行比對，比對方案參照ISO 15189 CNAS-L39文件規(guī)定，標(biāo)本選擇必須涵蓋陰性、弱陽性、陽性標(biāo)本。

2　質(zhì)控品選擇

2.1質(zhì)控品濃度選擇在應(yīng)用純定性質(zhì)控規(guī)則時，質(zhì)控品濃度的選擇至關(guān)重要，質(zhì)控品濃度過大或過小，都達(dá)不到質(zhì)控的目的。為保證室內(nèi)質(zhì)控的有效性，需要選擇適合自身實(shí)驗(yàn)室的室內(nèi)質(zhì)控血清濃度。以乙型肝炎表面抗原（HBsAg）為例，目前市面上大多數(shù)試劑盒檢測低限可達(dá)0.17 U/mL，如果室內(nèi)質(zhì)控陽性質(zhì)控品選擇1.0 U/mL，將失去對弱陽性或“灰區(qū)”結(jié)果的判斷，易造成漏檢。參照ISO 15189 CNAS-L39文件：弱陽性質(zhì)控物濃度宜在2～4倍臨界值，陰性質(zhì)控物濃度宜為0.5倍臨界值左右。以HBsAg為例，陽性質(zhì)控品濃度選擇在0.2～0.5 U/mL，陰性質(zhì)控品濃度選擇在0.05～0.10 U/mL為宜。根據(jù)作者實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，選擇HBsAg的陽性質(zhì)控品濃度為0.2 U/mL，測得樣本/臨界值（S/CO）在1.5～2.4；選擇陰性質(zhì)控品濃度為0.08 U/mL，測得S/CO在0.3～0.8。當(dāng)然，不同實(shí)驗(yàn)室，室內(nèi)質(zhì)控品濃度的選擇有所不同，但必須評估對本實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的影響［1］。選擇出適合自己實(shí)驗(yàn)室濃度的室內(nèi)質(zhì)控品。

2.2自制質(zhì)控品

2.2.1配制目前市面上能購買的定性免疫項(xiàng)目的質(zhì)控品主要是北京康砌斯坦生物有限公司生產(chǎn)，根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量要求不同，可能不能購買到合適自己實(shí)驗(yàn)室檢測試劑所需濃度的質(zhì)控品，可以采取自配方式配制。作者實(shí)驗(yàn)室大部分項(xiàng)目質(zhì)控品都是自配，如所有定性免疫項(xiàng)目的陰性質(zhì)控品、EB病毒抗體、自身免疫檢測項(xiàng)目的陽性和陰性質(zhì)控品等。以定性檢測HBsAg、ANA（熒光法）為例。

2.2.1.1HBsAg弱陽性質(zhì)控品配制選取一個HBsAg陽性患者新鮮血清，若干HBsAg與乙型肝炎表面抗體（HB-sAb）均為陰性患者的新鮮血清，按初步計(jì)算后，按比例混合、檢測、調(diào)整比例等過程，最終測得HBsAg的S/CO 在1.0～4.0即可。然后經(jīng)巴氏消毒，分裝（以試劑盒要求能檢測3次所需的量為宜），-70℃保存。一般一次性配夠1年所需的量。

2.2.1.2HBsAg陰性質(zhì)控品配制選取一個HBsAg陽性患者新鮮血清，若干HBsAg與HBsAb均為陰性患者的血清，按初步計(jì)算后，按比例混合、檢測、調(diào)整比例等過程，最終測得HBsAg的S/CO在0.3～0.8即可。然后經(jīng)巴氏消毒，分裝（以試劑盒要求能檢測3次所需的量為宜），-70℃保存。一般一次性配夠1年所需的量。

2.2.1.3熒光法檢測抗核抗體（ANA）弱陽性質(zhì)控品配制可以將弱熒光強(qiáng)度患者的新鮮血清收集一起，或?qū)?qiáng)陽性血清用陰性血清稀釋到弱熒光強(qiáng)度水平，再如上述消毒、分裝、保存即可。

2.2.2自制質(zhì)控品評估根據(jù)ISO 15189 CNAS-L39文件要求：陰陽性質(zhì)控物為對照，用于監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的有效性，實(shí)驗(yàn)室在選擇時應(yīng)考慮類型（宜選擇人血清基質(zhì)，避免工程菌或動物源性等的基質(zhì)）、濃度（弱陽性質(zhì)控物濃度宜在2～4倍臨界值，陰性質(zhì)控物濃度宜為0.5倍臨界值左右）、穩(wěn)定性（宜選擇生產(chǎn)者聲明在一定保存條件下如2～8℃或-20℃以下有效期為6個月以上）、均一性。評估方法可采用：在不同時間，如10、60、120 d，半年，1年，隨機(jī)抽取樣本20份，進(jìn)行檢測，以確定自制質(zhì)控品的穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)室從2014年8月配制的質(zhì)控品（人血清基質(zhì)），按照上述方法消毒和保存，監(jiān)測到2015年7月，共采集到253個S/CO，HBsAg陽性質(zhì)控品測得S/CO在1.5～2.9，平均2.11±0.24；陰性質(zhì)控品測得S/CO在0.3～0.8，平均0.56±0.11，質(zhì)控品的S/CO值穩(wěn)定，未出現(xiàn)因質(zhì)控品的因素失控。ANA弱熒光強(qiáng)度血清在保存1年以后，仍然檢測出弱陽性，滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求和質(zhì)量目標(biāo)。

有學(xué)者研究認(rèn)為自配質(zhì)控品放置-20℃可保存6個月，如果在該條件下保存1年，還需進(jìn)一步評估［2］。當(dāng)然，對免疫學(xué)應(yīng)用的質(zhì)控品評估方法有多性能指標(biāo)［3］，根據(jù)不同目的選擇性做出性能評估［4］。

3　質(zhì)控總結(jié)

定性免疫檢測在應(yīng)用純定性質(zhì)控規(guī)則時，由于判斷標(biāo)準(zhǔn)即陰、陽性質(zhì)控物的檢測結(jié)果必須分別為陰性和陽性，在質(zhì)控中總結(jié)分析的要素與采用的L-J質(zhì)控圖不同，純定性質(zhì)控規(guī)則的質(zhì)控總結(jié)只需包括統(tǒng)計(jì)每月的在控率、失控率，原因分析等要素即可。定性免疫檢測室內(nèi)質(zhì)控總結(jié)報告見表1。

雖然該質(zhì)控總結(jié)不再分析如變異系數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差等指標(biāo)，但失控原因分析、糾正、糾正措施和持續(xù)改進(jìn)措施與其他免疫檢測方法分析一致。

表1　定性免疫檢測室內(nèi)質(zhì)控總結(jié)報告

4　回顧性分析

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，檢驗(yàn)項(xiàng)目、方法越來越多，無論采用哪種質(zhì)控方法，回顧性分析非常重要，是持續(xù)改進(jìn)的重要信息來源和依據(jù)，通過對室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評結(jié)果分析，才能提高科室整體質(zhì)量水平和操作人員的素質(zhì)。以檢測HBsAg為例，回顧本實(shí)驗(yàn)室2014年8月至2015年7月室內(nèi)質(zhì)控情況，共253批次，失控2次，同一操作者所為，均為未嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作引起。經(jīng)過單獨(dú)重新培訓(xùn)、考核后方可上崗。在這期間的3次衛(wèi)生部室間質(zhì)評結(jié)果均為滿分。從室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評結(jié)果來看，自制室內(nèi)質(zhì)控品，以及采用的純定性質(zhì)控規(guī)則完全能滿足定性免疫檢驗(yàn)質(zhì)量要求。胡英華［5］總結(jié)其科室5年的室間質(zhì)量評價結(jié)果認(rèn)為，室間質(zhì)量評價結(jié)果的好壞與室內(nèi)質(zhì)量控制直接相關(guān)。不定期組織科室人員討論分析試驗(yàn)過程中遇到的技術(shù)及質(zhì)量問題，集思廣益，將討論結(jié)果以文件的形式規(guī)定下來，落實(shí)到工作當(dāng)中得以執(zhí)行［6］。對室內(nèi)質(zhì)控的分析是多方面的［7］，盡量完善、規(guī)范，逐步提高。

當(dāng)然，對不同實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，可能未做到所有項(xiàng)目參加了室間質(zhì)評，可以采用室間比對方式判斷質(zhì)量控制情況。如定性熒光免疫試驗(yàn)，在自制室內(nèi)質(zhì)控品的基礎(chǔ)上，與更高水平的實(shí)驗(yàn)室比對，縮小實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的差異性，提高檢測結(jié)果重復(fù)性與準(zhǔn)確性［8-9］，具有廣泛的社會效益。徐吟亞［10］采用熒光強(qiáng)度分析法，認(rèn)為通過調(diào)節(jié)質(zhì)控品熒光強(qiáng)度的曝光時間，保證不同實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用熒光法測定血清抗核抗體結(jié)果的一致。

總之，做好室內(nèi)質(zhì)控，在有規(guī)劃地制訂好操作規(guī)程、選好質(zhì)控品以外，還與檢驗(yàn)人員素質(zhì)、試劑質(zhì)量、儀器狀態(tài)、質(zhì)量控制管理等因素有關(guān)。只有做好試驗(yàn)過程中每一個環(huán)節(jié)，質(zhì)量目標(biāo)才能實(shí)現(xiàn)。

［1］程衛(wèi)芳，周學(xué)勇，張浩，等.血站酶免四項(xiàng)試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控品的選擇［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（8）：1006-1007.

［2］陳佩，王奇軍，羅建平.乙肝病毒免疫標(biāo)志室內(nèi)質(zhì)控品的制備及臨床應(yīng)用［J］.浙江臨床醫(yī)學(xué)，2014，16（3）：469-470.

［3］馬愛玲，趙寧民，趙紅衛(wèi)，等.自制甲氨蝶呤質(zhì)控血清在均相酶免疫法測定血藥濃度中的應(yīng)用［J］.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，29（1）：161-163.

［4］張鳳蘭．艾滋病抗體初篩室內(nèi)質(zhì)控分析［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（3）：364-365.

［5］胡英華.檢驗(yàn)科室問乙型肝炎病毒標(biāo)志物質(zhì)量評價分析［J］.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，33（5）：602-604.

［6］王卓識.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與檢驗(yàn)質(zhì)量保證［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（1）：108-110.

［7］朱中梁，汪宏良，馬娟.免疫檢驗(yàn)的質(zhì)量控制分析與研究［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（10）：1332-1333.

［8］李金明．抗核抗體的檢測程序與結(jié)果報告及解釋［J］．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（12）：1325-1328．

［9］周仁芳，胡朝軍，張蜀瀾.102 651例臨床標(biāo)本抗核抗體檢測結(jié)果及分析［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（12）：1339-1343．

［10］徐吟亞.核抗體熒光免疫檢測質(zhì)量控制方法的建立和應(yīng)用研究［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（2）：245-246.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.14.062

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1009-5519（2016）14-2265-03

（2016-03-09）