不同稀釋液對檢測血清乳酸脫氫酶的影響

方偉禎，何　健，蔡振華，陳　梅，葉遠羊（.中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院檢驗科，廣東廣州500；.廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，廣東廣州50405；.廣州醫(yī)科大學金域檢驗學院，廣東廣州508）

不同稀釋液對檢測血清乳酸脫氫酶的影響

方偉禎1，何健1，蔡振華2，陳梅1，葉遠羊3（1.中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院檢驗科，廣東廣州510120；2.廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，廣東廣州510405；3.廣州醫(yī)科大學金域檢驗學院，廣東廣州510182）

目的通過比較標本稀釋前后血清乳酸脫氫酶（LDH）的變化，探討不同稀釋液對檢測血清LDH的影響。方法用AU5800全自動生化分析儀檢測標本稀釋前后的LDH水平，比較用去離子水、生理鹽水和滅活血清3種稀釋液稀釋同一份高LDH標本后與原始濃度的檢測結果，通過繪制回歸曲線，比較回歸系數接近1的程度。結果2倍稀釋時：去離子水回歸系數（b水）=1.038 4，生理鹽水回歸系數（b鹽）=1.043 4，滅活血清回歸系數（b滅）=1.023 4；5倍稀釋時：b水=1.152 9，b鹽=1.144 4，b滅=1.142 0；10倍稀釋時：b水=1.107 8，b鹽=1.112 4，b滅=0.995 8。結論通過2、5、10倍3個稀釋梯度的比較，b滅相對b鹽、b水最為接近1，說明滅活血清是三者中最好的稀釋液。

乳酸脫氫酶；血清；去離子水；生理鹽水；稀釋液

乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）廣泛存在于人體所有組織內，以腎含量最高，心肌、骨骼肌次之。但只能在細胞質內找到，正常人組織中LDH水平比血清中高500倍。即使少量組織損傷也可以導致血清中LDH活性顯著升高，標本不同程度溶血時，血清LDH均升高［1］。血清LDH水平很大程度上可以反映富含LDH細胞的增殖、代謝等生物學性狀［2］。LDH水平增高多見于心肌損傷、肝炎、肺梗死、某些惡性腫瘤［3］及白血?。?-5］等，某些腫瘤轉移會引起的腹水中LDH活力升高。LDH是目前臨床分析疾病的一個重要的生化指標，目前常用于心肌梗死、肝臟疾病和某些惡性腫瘤的臨床輔助診斷。

臨床上大部分的生化分析儀都有自動稀釋功能，目前所用到的稀釋液多為去離子水，稀釋液也可能是生理鹽水、小牛血清等與血清相近的液體。程涌江等［6］發(fā)現(xiàn)用生理鹽水5倍稀釋血清會使血清膽紅素測定結果升高。劉成忠等［7］發(fā)現(xiàn)，蒸餾水和生理鹽水作為高值血清肌酸激酶（CK）的稀釋液，所測得值無規(guī)律可循，不能作為高值血清CK的稀釋液使用。嚴開斌［8］發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白A1（ApoA1）和糖化血紅蛋白（HbA1c）標本用生理鹽水稀釋后，無論高值還是正常標本，結果均增高。盛軍［9］也發(fā)現(xiàn)，用生理鹽水稀釋高值血清CK時，結果差異顯著。而目前鮮見關于用去離子水或生理鹽水稀釋血清的LDH的檢測結果差異是否顯著的研究報道，而作者在臨床工作中，已發(fā)現(xiàn)用不同的稀釋液稀釋血清標本，會對檢測血清LDH結果有不同的影響。通過實驗，挑選出對檢測結果影響最小的稀釋液，對提高臨床檢驗工作的準確性和有效性，減少誤差有重要意義。本研究探討了去離子水、生理鹽水、滅活血清3種稀釋液對稀釋血清中LDH結果的影響。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1待測血清新鮮抽取病區(qū)患者靜脈血，經離心機3 000 r/min離心后，取肉眼無黃疸、無溶血、無脂濁的血清，量大于1mL，血清LDH水平400～1000U/L，-20℃保存。

1.1.2低值血清抽取中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院患者靜脈血，經離心機3 000 r/min離心后，取肉眼無黃疸、無溶血、無脂濁的血清，血清LDH水平小于200 U/L，混合后4℃保存［10］。

1.1.3儀器貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀、微量移液器（200 μL）、微量移液器（40 μL）、水浴箱。

1.1.4試劑LDH測定試劑盒（乳酸底物法）購自貝克曼庫爾特實驗系統(tǒng)（蘇州）有限公司，批號：AWZ1700。稀釋液：去離子水、生理鹽水、滅活血清。將收集的低值血清混合后，在56℃水浴箱水浴30 min，制成滅活血清，再用作實驗的稀釋液。

1.2方法

1.2.1收集標本收集待測血清約50份；收集低值血清若干份。

1.2.2檢測原始血清和滅活血清LDH水平采用貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀分別檢測每份待測血清的原始LDH水平2次，結果取均值；同理檢測稀釋時的滅活血清LDH水平。

1.2.3稀釋方法稀釋血清及稀釋后血清的檢測與原始血清檢測同時在相同環(huán)境下進行實驗；將每一份待測血清分成2份，分別用上述3種稀釋液按下列3個稀釋倍數稀釋，即2倍：100 μL血清+100 μL稀釋液；5倍：50 μL血清+200 μL稀釋液；10倍：20 μL血清+180 μL稀釋液。

1.2.4檢測稀釋后血清LDH水平采用貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀分別檢測稀釋后血清LDH水平2次，結果取均值，相同血清來源的血清稀釋后相互比較，差值超過全部標本差值均值的4倍為離群值，應剔除，剔除離群值后，其余標本按照相應的公式換算為稀釋濃度。

1.3統(tǒng)計學處理應用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，采用配對資料t檢驗比較稀釋組與原始血清LDH水平的差異，以及3種稀釋液間相互配對分析比較差異。比較三組稀釋組與原始血清LDH水平的接近程度，本實驗以散點圖的方法進行比較：以原始血清LDH水平為橫坐標，稀釋組血清LDH水平為縱坐標，繪制散點圖，因橫坐標固定，故當橫坐標等于縱坐標（散點無限接近斜率為1的曲線）時，可認為稀釋組血清LDH水平無限接近原始血清LDH水平。當散點圖回歸方程y=bx+a中的b=1時，則可認為稀釋組血清LDH水平無限接近原始血清LDH水平。

2　結　果

2.1各組不同稀釋倍數稀釋組血清與原始血清LDH水平配對結果比較

2.1.12倍稀釋時各稀釋組血清與原始血清LDH水平配對結果比較2倍稀釋時，各組稀釋組血清與原始血清LDH水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；生理鹽水稀釋后血清LDH水平偏離原始血清相對最大（相對偏倚4%），去離子水、滅活血清稀釋后LDH水平偏離較小（相對偏倚2%），見表1。

表1　2倍稀釋時各稀釋組血清與原始血清LDH水平配對結果比較（n=45）

2.1.25倍稀釋時各稀釋組血清與原始血清配對結果比較5倍稀釋時，各稀釋組血清與原始血清LDH水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；去離子水、生理鹽水稀釋后血清LDH水平偏離原始血清相對最大（相對偏倚10%），滅活血清稀釋后LDH水平偏離較?。ㄏ鄬ζ?%）。見表2。

表2　5倍稀釋時各稀釋組血清與原始血清LDH水平配對結果比較（n=45）

2.1.310倍稀釋時各稀釋組血清與原始血清LDH水平配對結果比較10倍稀釋時，各稀釋組血清與原始血清水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；生理鹽水稀釋后血清LDH水平偏離原始血清相對最大（相對偏倚-10%），滅活血清稀釋后血清LDH水平偏離較?。ㄏ鄬ζ?6%）。見表3。

表3　10倍稀釋時各稀釋組血清與原始血清LDH水平配對結果比較（n=45）

2.2不同稀釋組間統(tǒng)計結果比較無論何種倍數稀釋，去離子水與生理鹽水稀釋后比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P≥0.05）；滅活血清無論與去離子水或生理鹽水比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或0.01）。見表4。

表4　不同稀釋組間統(tǒng)計結果比較（n=45）

2.3線性關系2倍稀釋時，去離子水稀釋組回歸方程為：y水=1.038 4x-9.39，R2=0.962 8；生理鹽水稀釋組回歸方程為：y鹽=1.043 4x-5.38，R2=0.957 4；滅活血清稀釋組回歸方程為：y滅=1.023 4x-0.71，R2=0.966 2。滅活血清作為稀釋液時所得回歸方程的回歸系數（b滅）最為接近1。5倍稀釋時，y水=1.152 9x-33.69，R2=0.918 5；y鹽=1.144 4x-28.18，R2=0.931 5；y滅=1.142 0x-44.68，R2=0.943 4。b滅最為接近1。10倍稀釋時，y水=1.107 8x-153.03，R2=0.659 2；y鹽= 1.112 4x-145.14，R2=0.660 4；y滅=0.995 8x-40.79，R2= 0.671 4。b滅最為接近1。見圖1。

圖1　回歸方程斜率比較圖

3　討　論

目前檢測血清LDH一般用連續(xù)監(jiān)測法，使用全自動生化分析儀完成，原理是LDH催化乳酸氧化為丙酮酸，同時還原NAD+為NADH。樣本中LDH的活性可以通過監(jiān)測340 nm波長處NADH吸光度上升的速率而獲得。LDH升高可見于急性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬化、肝癌等肝臟疾病；也可作為急性心肌梗死后期的輔助診斷指標。且在某些血液疾病如白血病、貧血、惡性淋巴瘤等，骨骼肌損傷、進行性肌萎縮、肺梗死等LDH也會升高。在臨床工作過程中，較容易遇到超出儀器檢測線性范圍血清LDH結果異常高的標本，此時必須通過稀釋標本來重新檢測，因此在選擇稀釋液方面顯得尤為重要［10］。

去離子水與滅活血清、生理鹽水與滅活血清均存在著基質的不同，所謂的基質，是指除分析物之外的所有成分，由基質所介導的分析誤差則為基質效應，基質誤差幾乎存在于所有的分析中，當檢測分析物時，均會受到“周圍物質”的影響，對臨床科室而言，主要任務是檢測患者的血清標本，因此，只有當稀釋液接近血清時，基質效應才能減小。此時，測定系統(tǒng)對新鮮血清標本而言不考慮基質效應，認定該測定系統(tǒng)對新鮮血清標本的基質效應接近于零［11］。從本研究結果顯示的去離子水、生理鹽水稀釋引起的誤差無統(tǒng)計學意義，也能反證明影響稀釋后LDH水平的原因是基質的改變。

通過本研究可以看出，去離子水、生理鹽水、滅活血清3種稀釋液稀釋血清均會對檢測血清中LDH水平引起具有統(tǒng)計學意義的誤差。去離子水、生理鹽水稀釋血清對檢測血清中LDH水平引起的誤差不具統(tǒng)計學意義；滅活血清稀釋血清相對于去離子水和生理鹽水所引起的誤差相對較小。

比較3種稀釋液對檢測血清LDH的影響，滅活血清相對于去離子水和生理鹽水對血清LDH的影響小，可以認為滅活血清是3種稀釋液中效果最好的。當然，不同的檢測項目，影響最小的稀釋液可能不同，還有待進一步的研究。

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Influence of different dilution solutions on serum LDH detection

Fang Weizhen1，He Jian1，Cai Zhenhua2，Chen Mei1，Ye Yuanyang3（1.Department of Clinical Laboratory，Sun Yat-Sen Memorial Hospital of Sun Yet-Sen University，Guangzhou，Guangdong 510120，China；2.Department of Clinical Laboratory，F(xiàn)irst Affiliated Hospital，Guangzhou Medical University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou，Guangdong 510405，China；3.Jinyu Laboratory Medicine College，Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong 510182，China）

ObjectiveTo investigate the influence of different dilution solutions on serum LDH detection by comparing the changes of serum LDH after specimen dilution.MethodsThe AU5800 automatic biochemical analyzer was used to detect the LDH concentrations before and after specimen dilution.The detection results of the same high LDH specimen were compared between the original concentration and concentrations after dilution by 3 kinds of dilution solutions of deionized water，normal saline and inactivated serum.The degree of regression coefficient（RC）close to 1 was compared by drawing the regression curve. ResultsWhen 2 times of dilutions，RC of deionized water（RCbw）=1.038 4，RC of normal saline（RCbs）=1.043 4，RC of inactivated serum（RCbi）=1.0234；when5timesofdilutions，RCbw=1.1529，RCbs=1.1444，RCbi=1.1420；when10timesofdilutions，RCbw=1.1078，RCbs=1.112 4，RCbi=0.995 8.ConclusionIn the comparison of 2，5，10 of 3-dilution gradients，RCbiis most close to 1compared with RCbs and RCbw，indicating that inactivated serum is the best dilution solution among these 3 kinds of dilution solution.

L-lactate dehydrogenase；Serm；Deionized water；Normal saline；Diluent

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.14.010

A

1009-5519（2016）14-2143-03

方偉禎（1977-），本科，主管技師，主要從事血液方面研究。

（2016-03-07）