血必凈注射液調(diào)控重癥中暑單核細胞人白細胞DR抗原表達異常和血管內(nèi)皮細胞損傷的效果

陳玉蘭　陳　懌廣東省東莞市第五人民醫(yī)：重癥醫(yī)學科，廣東東莞523898

血必凈注射液調(diào)控重癥中暑單核細胞人白細胞DR抗原表達異常和血管內(nèi)皮細胞損傷的效果

陳玉蘭陳懌
廣東省東莞市第五人民醫(yī)：重癥醫(yī)學科，廣東東莞523898

目的探討血必凈注射液調(diào)控重癥中暑單核細胞人白細胞DR抗原（HLA-DR）表達異常和血管內(nèi)皮細胞損傷的效果。方法選取2013年7月～2015年7月在廣東省東莞市第五人民醫(yī)：重癥醫(yī)學科經(jīng)確診并?。褐委煹闹匕Y中暑患者22例為研究對象，采用隨機數(shù)字表法分為實驗組和對照組，每組各11例。對照組患者給予“四早一支持”的西醫(yī)常規(guī)綜合治療，實驗組患者在對照組的治療基礎上，加用血必凈注射液100 mL靜脈滴注，2次/d，連續(xù)7 d。治療前和治療后第5天，采用流式細胞儀檢測循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達情況；采用ELISA檢測血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）和血管假性血友病因子（VWF）水平；采用等密度梯度離心法測定循環(huán)內(nèi)皮細胞（CEC）。結果治療前，兩組患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達較正常人群明顯降低（P＜0.05）；治療后第5天，兩組患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達較治療前顯著升高（P＜0.05），且實驗組較對照組升高明顯（P＜0.05）。治療前，兩組患者TM和VWF水平及CEC計數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后第5天，兩組患者TM和VWF水平及CEC計數(shù)均較治療前顯著降低（P＜0.05），且實驗組較對照組降低明顯（P＜0.05）。結論血必凈注射液能有效改善重癥中暑患者單核細胞HLA-DR表達異常和血管內(nèi)皮細胞損傷。

重癥中暑曰血必凈注射液曰單核細胞人白細胞DR抗原曰血管內(nèi)皮細胞損傷

[Abstract]Objective To investigate effect of Xuebijing Injection in regu1ating the abnorma1 expression of human 1eukocyte antigen DR(HLA-DR)on monocyte and the injury of vascu1ar endothe1ia1 ce11 in patients with severe heatstroke.Methods 22 patients with severe heatstroke diagnosed and hospita1ized in the Fifth Peop1e′s Hospita1 of Dongguan City in Guangdong Province from Ju1y 2013 to Ju1y 2015 were se1ected as study objects and divided into experimenta1 group and contro1 group by using the random number tab1e method,with 11 patients in each group.The patients in contro1 group were treated with conventiona1 western medicine comprehensive treatment(four ear1y one support);patients in experimenta1 group were received Xuebijing Injection on the basis of contro1 group,100 mL intravenous drip,2 times/d,7 d in a row.The expression of HLA-DR receptor in circu1ating b1ood was detected by f1ow cytometry,the 1eve1s of von wi11ebrand factor(VWF)and thrombomodu1in(TM)were detected by ELISA,and circu1ating endothe1ia1 ce11(CEC)was measured by equa1 density gradient centrifugation before and 5 days after treatment.Results Before treatment,the expressions of HLA-DR in two groups were significant1y 1ower than those norma1 popu1ation(P＜0.05).5 days after treatment, the expressions of HLA-DR in two groups were significant1y higher than those before treatment(P＜0.05),and experimenta1 group was significant1y higher than that of contro1 group(P＜0.05).Before treatment,the 1eve1s of TM and VWF,the counts of CEC in two groups had no statistica1 differences(P＞0.05).5 days after treatment,the 1eve1s of TM and VWF,the counts of CEC in two groups were significant1y 1ower than those before treatment(P＜0.05),and experimenta1 group was significant1y 1ower than that of contro1 group(P＜0.05).Conclusion Xuebijing Injection can regu1ate the abnorma1 expression of HLA-DR on monocyte and the injury of vascu1ar endothe1ia1 ce11 in patients with severe heatstroke.

[Key words]Severe heatstroke;Xuebijing Injection; Monocyte HLA-DR;Vascu1ar endothe1ia1 ce11 injury

重癥中暑是我國南方地區(qū)常見的多發(fā)性、地方性疾病，其類型包括：熱痙攣、熱衰竭和熱射病，可引發(fā)全身炎癥反應綜合征（systemic inf1ammatory response syndrome，SIRS）和多器官功能障礙綜合征（mu1tip1e organ dysfunction syndrome，MODS）[1-2]。據(jù)不完全統(tǒng)計，我國每年平均中暑死亡率達5%～10%，而重癥中暑患者的死亡率甚至高達50%～80%[3-4]。由于中暑是一種高溫、高濕環(huán)境所致的熱相關疾病，隨著全球變暖，可預測中暑發(fā)病率將會逐年增加[5]。對重癥中暑發(fā)病機制認識的局限性是造成目前重癥中暑救治難度大、死亡率高的主要原因之一。有研究指出，重癥中暑的病理損傷包括：腸源性毒素血癥的產(chǎn)生、炎癥細胞遷移和浸潤、廣泛血管內(nèi)皮細胞損傷以及廣泛出血和血栓形成等，其中單核細胞的激活和血管內(nèi)皮細胞的損傷又是一系列病理生理改變的核心[6-7]。鑒于此，單核細胞人白細胞DR抗原（human 1eukocyte antigen DR，HLA-DR）表達異常與血管內(nèi)皮細胞損傷可能是推動重癥中暑向SIRS和MODS發(fā)展的始動因素。血必凈注射液具有調(diào)節(jié)免疫功能、抑制炎癥介質(zhì)釋放、抗內(nèi)毒素以及保護血管內(nèi)皮細胞等作用[8]。本研究在西醫(yī)常規(guī)綜合治療的基礎上，加用血必凈注射液，觀察其對重癥中暑患者HLA-DR表達水平以及血栓調(diào)節(jié)蛋白（thrombomodu1in，TM）、血管假性血友病因子（von wi11ebrand factor，VWF）和循環(huán)內(nèi)皮細胞（circu1ation endothe1ia ce11，CEC）的影響，從調(diào)控重癥中暑所致單核細胞HLA-DR表達異常與血管內(nèi)皮細胞損傷方面，觀察血必凈注射液治療重癥中暑的臨床效果。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年7月～2015年7月在廣東省東莞市第五人民醫(yī)：重癥醫(yī)學科經(jīng)確診并?。褐委煹闹匕Y中暑患者22例為研究對象，其中男18例，女4例，平均年齡（65.9±13.2）歲。采用隨機數(shù)字表法將所有患者分為實驗組和對照組，每組各11例。兩組患者的性別、年齡、體重指數(shù)、基礎疾病、體溫、昏迷程度和休克與否等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

1.2治療方法

對照組患者給予“四早一支持”（及早降溫、及早擴溶、及早抗凝、及早改善、及早支持）的西醫(yī)常規(guī)綜合治療。實驗組患者在對照組的治療基礎上，加用血必凈注射液（規(guī)格10 mL，天津紅日藥業(yè)股份有限公司，批號：Z20130033）100 mL，靜脈滴注，2次/d，連續(xù)7 d。

表1　兩組患者一般資料比較

1.3觀察指標

兩組患者均在治療前和治療后第5天，采集肘靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝，-20℃保存?zhèn)溆?。采用免疫熒光法檢測患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR受體表達[正常人群HLA-DR抗原表達參考值為（35.78±6.01）mcf]；采用ELISA試劑盒（R&D公司，美國）檢測TM和VWF水平；采用等密度梯度離心法測定CEC。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x依s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1兩組患者治療前后循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達比較

治療前，兩組患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達均較正常人群[（35.78±6.01）mcf]降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。治療前，兩組患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后第5天，兩組患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達均較治療前升高，且實驗組患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.2兩組患者治療前后TM和VWF水平比較

治療前，兩組患者TM和VWF水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后第5天，兩組患者TM和VWF水平均較治療前降低，且實驗組患者TM和VWF水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2　兩組患者治療前后循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達比較（mcf，依s）

表2　兩組患者治療前后循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達比較（mcf，依s）

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后第5天比較，#P＜0.05；HLA-DR：人白細胞DR抗原

組別例數(shù)治療前治療后第5天實驗組對照組11 11 16.53±2.32 17.01±2.41 35.05±5.93*#24.78±5.37*

表3　兩組患者治療前后TM和VWF水平比較（ng/mL，依s）

表3　兩組患者治療前后TM和VWF水平比較（ng/mL，依s）

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后第5天比較，#P＜0.05；TM：血栓調(diào)節(jié)蛋白；VWF：血管假性血友病因子

組別例數(shù)TM治療前治療后第5天VWF治療前治療后第5天實驗組對照組11 11 23.13±5.61 22.98±5.32 6.31±2.15*#15.67±3.86*119.43±32.15 118.56±30.93 70.61±19.43*#93.08±21.74*

2.3兩組患者治療前后CEC計數(shù)比較

治療前，兩組患者CEC計數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后第5天，兩組患者CEC計數(shù)均較治療前降低，且實驗組患者CEC計數(shù)低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4　兩組患者治療前后CEC計數(shù)比較（×103/mL，依s）

表4　兩組患者治療前后CEC計數(shù)比較（×103/mL，依s）

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后第5天比較，#P＜0.05；CEC：循環(huán)內(nèi)皮細胞

組別例數(shù)治療前治療后第5天實驗組對照組11 11 6.34±2.01 6.29±1.89 2.32±0.76*#3.51±1.13*

3　討論

重癥中暑是一種繼發(fā)于熱損傷之后的SIRS，進而發(fā)展為膿毒癥并引發(fā)MODS。近期研究指出，重癥中暑核心病理生理改變主要包括：①廣泛血管內(nèi)皮細胞損傷；②單核細胞等白細胞的遷移和跨血管壁運動，啟動全身炎性反應；③廣泛出血和血栓形成，因此單核細胞功能異常與血管內(nèi)皮細胞損傷可能是影響重癥中暑向MODS進展并最終導致死亡的主要因素[9-11]。由于目前對重癥中暑發(fā)病機制尚未完全了解，因此臨床上缺乏特效的治療藥物，造成重癥中暑救治難度高、死亡率高。血必凈注射液主要成分有赤芍、川芎、丹參、紅花和當歸等，具有抗菌、抗內(nèi)毒素、調(diào)節(jié)免疫功能、抑制機體炎癥介質(zhì)釋放和保護血管內(nèi)皮細胞等作用[12-13]，近年來已被廣泛應用于膿毒癥或類膿毒癥的治療，基于重癥中暑與膿毒癥在病理生理機制上具有一定的同質(zhì)性和延續(xù)性，本研究通過分析血必凈注射液對重癥中暑患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達和血管內(nèi)皮損傷標志物的影響，觀察血必凈注射液對重癥中暑的臨床療效。

單核細胞HLA-DR是機體內(nèi)表達水平最高的組織相溶性抗原，具有誘導和增強免疫應答，且拮抗CD8+細胞免疫抑制的作用[14]。若HLA-DR表達減少，機體就不能將抗原信息遞呈給免疫效應細胞產(chǎn)生有效的免疫應答，無法有效清除病原體，導致機會性感染發(fā)生率明顯增高，感染情況難以控制。有研究表明[15-16]，重癥中暑可導致腸屏障功能受損，造成腸源性內(nèi)毒素（LPS）易位進入體循環(huán)血液系統(tǒng)，誘發(fā)嚴重膿毒癥。繼發(fā)于熱損傷后的SIRS也可造成其他部位組織過度釋放大量白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和血小板活化因子（PAF）等炎癥介質(zhì)和細胞因子，產(chǎn)生炎癥瀑布效應，造成單核細胞功能異常，其中單核細胞HLA-DR表達下降是其表現(xiàn)方式之一，可誘發(fā)免疫抑制，進一步促進膿毒癥進展。本研究結果顯示，重癥中暑患者單核細胞HLA-DR表達明顯降低，這與相關研究結果一致[17-18]，說明在重癥中暑發(fā)病初期患者機體的免疫功能已經(jīng)受到明顯抑制，經(jīng)血必凈注射液治療5 d，相比對照組而言，患者循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達明顯提高，可客觀反映免疫功能抑制得到一定程度的改善。

由于正常血管內(nèi)皮細胞對循環(huán)中微生物和微小創(chuàng)傷具有一定的屏障作用，近幾年來逐漸作為一個特殊的器官系統(tǒng)納入某些病理狀態(tài)的研究中。有研究指出，持續(xù)高熱或SIRS均可造成嚴重的血管內(nèi)皮細胞損傷[19]。有學者研究發(fā)現(xiàn)，重癥中暑動物多臟器血管內(nèi)皮細胞功能均可受到損傷，而損傷的血管內(nèi)皮又可釋放各種細胞因子和炎癥因子，引起全身炎性反應、凝血功能障礙和彌漫性微血栓形成，為重癥中暑臟器損傷奠定病理基礎[20]。CEC是能夠直接反映血管內(nèi)皮細胞損傷情況的指標，研究顯示，重癥中暑、內(nèi)毒素血癥以及膿毒血癥等多種病理狀態(tài)可導致血管內(nèi)皮細胞損傷的因素均可引起CEC計數(shù)的顯著增加[8]。另外，TM和VWF源于血管內(nèi)皮細胞，所以TM和VWF水平亦可反映血管內(nèi)皮細胞損傷情況。本研究選取CEC計數(shù)、TM和VWF水平作為反映血管內(nèi)皮損傷情況的指標進行研究，結果顯示，相比對照組，血必凈注射液可明顯降低CEC計數(shù)、TM和VWF水平，提示血必凈注射液對重癥中暑所致血管內(nèi)皮損傷具有一定的保護作用。

由于重癥中暑發(fā)病率較低，因此本研究中納入病例較少，可能對研究結論的可靠性造成一定影響。重癥中暑可誘發(fā)循環(huán)血中單核細胞HLA-DR表達異常和血管內(nèi)皮細胞損傷，而血必凈注射液具有提高重癥中暑患者單核細胞HLA-DR表達和減輕血管內(nèi)皮細胞損傷的作用，其中部分相關的分子機制需要進一步基礎實驗進行探索研究，但基于本實驗所示，可認為血必凈注射液對重癥中暑具有良好的治療效果和前景。

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Effect of Xuebijing Injection in regulating the abnormal expression of HLA-DR on monocyte and the injury of vascular endothelial cell in patients with severe heatstroke

CHEN YulanCHEN Yi
Department of ICU,the Fifth Peop1e′s Hospita1 of Dongguan City,Guangdong Province,Dongguan523898,China

R135.3

A

1673-7210（2016）04（a）-0011-04

廣東省醫(yī)學科研基金立項管理項目（A2015093）；廣東省東莞市醫(yī)療衛(wèi)生科技計劃一般項目（2015105101088）。

陳懌（1981-），男，漢族，博士；研究方向：重癥中暑。

（2015-12-13本文編輯：李亞聰）