鉤藤超臨界CO2流體萃取物化學(xué)成分的GC-MS分析*

廖彭瑩

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西　南寧　530001)

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鉤藤超臨界CO2流體萃取物化學(xué)成分的GC-MS分析*

廖彭瑩

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001)

采用超臨界CO2流體萃取法提取鉤藤的化學(xué)成分，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)對其分析鑒定，共確定了65個化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)，已鑒定成分相對含量之和占萃取物總量的57.34%，含量較高的成分有棕櫚酸(6.34%)和甲氧基肉桂酸乙酯(5.96%)等；該超臨界流體萃取物含有多種化學(xué)成分，對其進(jìn)行的分析研究為進(jìn)一步闡明鉤藤的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)提供了相關(guān)依據(jù)。

鉤藤；超臨界CO2流體；GC-MS分析

Abstracts: The chemical constituents of the supercritical CO2fluid extracts fromUncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil. were analyzed by GC-MS method. 65 components were identified from the extracts, accounting for 57.34% of the total content.n-Hexadecanoic acid (6.34%) and 3-(4-methoxyphenyl)-2-propenoic acid ethyl ester (5.96%) were the main constituents. The studies on the supercritical CO2fluid extracts can lay the basis for the further elucidation of the chemical components of this plant.

茜草科鉤藤屬植物鉤藤Uncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil.產(chǎn)于廣東、廣西、云南、貴州等地，其帶鉤藤莖為著名中藥鉤藤，可息風(fēng)止痙、清風(fēng)平肝，主要用于治療小兒驚風(fēng)、夜啼、熱盛動風(fēng)、子癇等癥[1]。該藥材含有多種類型的化學(xué)成分，包括生物堿類[1]、萜類[2]、黃酮類[3]、脂肪酸類[4]等，生物堿類成分是主要有效成分，人們已經(jīng)證實(shí)其具有多種生物活性，包括降壓作用[5]、抗腦缺血作用[6]、抗血栓形成作用[7]等，而關(guān)于非生物堿類成分的報(bào)道不多。超臨界CO2流體萃取法是利用超臨界CO2為萃取劑，具有提取速度快、提取效率高、無有機(jī)污染、保護(hù)熱敏性物質(zhì)等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于中藥化學(xué)成分的提取[8]。段少卿等考察了超臨界CO2流體萃取法提取鉤藤脂肪酸類成分的工藝條件，并對萃取物進(jìn)行甲酯化反應(yīng)，從中鑒定了66種化合物，主要有酯類、脂肪酸類、烯醇類、烯烴類和酚類[4]。為了更全面直接地認(rèn)識中藥鉤藤的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，特別是其中的非生物堿類成分，本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)對鉤藤超臨界CO2流體萃取物的化學(xué)組成直接進(jìn)行了分析鑒定。

1　材　料

藥材：鉤藤于2013年6月采于廣西靖西，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為中藥鉤藤Uncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil.，標(biāo)本存放于廣西中醫(yī)藥大學(xué)，藥材自然晾干后粉碎備用。

儀器：超臨界CO2流體萃取裝置(HL-(5+1)/50MPa-IIAQ)，杭州華黎泵業(yè)有限公司；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(HP6890/5973N)，美國安捷倫科技有限公司。

試劑：無水硫酸鈉；乙醚(國產(chǎn)分析純)。

2　方法與結(jié)果

2.1超臨界CO2流體萃取物的制備

鉤藤約100 g經(jīng)粉碎后采用超臨界CO2流體萃取法提取1.5 h，提取條件：流量6.5 kg/h，萃取釜壓力28 MPa，萃取溫度：63 ℃，分離釜一壓力2 MPa，溫度88 ℃，分離釜二壓力4 MPa，溫度40 ℃，最終得到棕色粘稠狀固體約4.8 g，用乙醚萃取3次，乙醚液用無水硫酸鈉干燥，離心后取上清液用于進(jìn)樣分析。

2.2氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析條件

氣相色譜條件：HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣為高純氦氣；進(jìn)樣量1 μL；分流比1:20；程序升溫條件：柱溫70 ℃，以10 ℃/min升溫至200 ℃，維持3 min，以8 ℃/min升溫至220 ℃，再以10 ℃/min升溫至250 ℃，維持2 min，最后升溫至280 ℃，維持3 min。質(zhì)譜條件：電離方式EI，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，接口溫度250 ℃，質(zhì)量范圍50～550 amu。

2.3結(jié)果

樣品按上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣，得到鉤藤超臨界CO2流體萃取物的總離子流圖，對各峰進(jìn)行質(zhì)譜掃描，計(jì)算機(jī)檢索NIST05a、Wiley275標(biāo)準(zhǔn)譜庫，從中篩選出匹配度大于90%的成分，然后結(jié)合人工解析、文獻(xiàn)比對等方法，分別對各峰進(jìn)行鑒定，共確認(rèn)了65個化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)，采用峰面積歸一化法測定了各成分的相對含量，結(jié)果見表1。

表1　鉤藤超臨界CO2流體萃取物的GC-MS分析

續(xù)表1

3311.241,2,4a,5,6,8a-Hexahydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-naphthaleneC15H240.113411.32杜松烯;(1S-cis)-1,2,3,5,6,8a-hexahydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-naphthalene,C15H240.323511.61月桂酸;DodecanoicacidC12H24O20.113611.653,4-Dihydro-8-hydroxy-3-methyl-1H-2-benzopyran-1-oneC10H10O30.123712.05十六烷;HexadecaneC16H340.443812.14喇叭茶醇;LedolC15H26O0.523912.24綠花白千層醇;[1aR-(1aα,4β.,4aβ,7α,7aβ,7bα)]-decahydro-1,1,4,7-tetramethyl-1H-cycloprop[e]azulen-4-olC15H26O0.324012.36細(xì)辛腦;(Z)-1,2,4-trimethoxy-5-(1-propenyl)-benzeneC12H16O30.244112.86早熟素II;6,7-Dimethoxy-2,2-dimethyl-2H-1-benzopyranC13H16O31.134212.91β-桉葉醇;β-eudesmolC15H26O0.254313.05細(xì)辛腦;(Z)-1,2,4-trimethoxy-5-(1-propenyl)-benzeneC12H16O30.364413.161,6-Dimethyl-4-(1-methylethyl)-naphthaleneC15H180.294513.19十七烷;HeptadecaneC17H360.434613.44吉馬酮;(E,E)-(1-methylethylidene)-3,7-Dimethyl-10-3,7-cyclodecadien-1-oneC15H22O0.324713.542,4,5-三甲氧基苯甲醛;2,4,5-Trimethoxy-benzaldehydeC10H12O40.394813.97肉豆蔻酸;TetradecanoicacidC14H28O20.294914.09甲氧基肉桂酸乙酯;3-(4-Methoxyphenyl)-2-propenoicacidethylesterC12H14O35.965014.47十八烷;OctadecaneC18H380.235115.20植酮;6,10,14-Trimethyl-2-pentadecanoneC18H36O0.145216.09十九烷;NonadecaneC19H400.595317.41棕櫚酸;n-HexadecanoicacidC16H32O26.345417.75棕櫚酸乙酯;HexadecanoicacidethylesterC18H36O21.985519.04松香三烯;(4aS-trans)-1,1,4a-trimethyl-7-(1-methylethyl)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydro-phenanthreneC20H301.135619.35二十一烷;HeneicosaneC21H441.115719.59葉綠醇;PhytolC20H40O3.415820.26亞油酸乙酯;LinoleicacidethylesterC20H36O22.595920.33油酸乙酯;EthyloleateC20H38O22.936020.63硬脂酸乙酯;OctadecanoicacidethylesterC20H40O20.836120.67二十二烷;DocosaneC22H460.586221.12二十五烷;PentacosaneC25H520.786322.041-氯二十一碳烷;1-ChloroeicosaneC20H41Cl0.886422.45鐵銹醇;FerruginolC20H30O2.236522.74反式角鯊烯;(all-E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaeneC30H500.97

從表1可知，已鑒定65種化學(xué)成分相對含量之和占萃取物總量的57.34%，類型包括脂肪族類(26.00%)、萜類(18.24%)和芳香族類(13.10%)，含量較高的成分有棕櫚酸(6.34%)、甲氧基肉桂酸乙酯(5.96%)、葉綠醇(3.41%)、油酸乙酯(2.93%)、亞油酸乙酯(2.59%)、鐵銹醇(2.23%)和棕櫚酸乙酯(1.98%)。

3　討　論

與文獻(xiàn)[4]的研究相比，本研究從鉤藤超臨界CO2流體萃取物中也未檢出生物堿類成分，同樣檢出十四烷、十五烷、十六烷、十八烷、十九烷、二十五烷、2,6-二叔丁基對甲酚、植酮、棕櫚酸和反式角鯊烯，其余成分則均為首次從該植物檢出。本萃取物所含部分化學(xué)成分生理活性較強(qiáng)，α-蒎烯有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗真菌等作用[9]；樟腦有局部刺激和防腐作用，可用于神經(jīng)痛、炎癥和跌打損傷的搽劑[10]；4-萜烯醇和α-松油醇具有平喘、抑菌作用[11]；百里香酚具有防腐性、可用于口腔衛(wèi)生品中[12]；欖香烯能抑制癌細(xì)胞增殖，是抗癌的有效活性物質(zhì)[13]；石竹烯具有一定的平喘作用，可治療慢性支氣管炎[14]；細(xì)辛腦具有解痙、抗驚厥作用[15]；2,6-二叔丁基對甲酚作為抗氧化劑被廣泛應(yīng)用于食品和藥品行業(yè)中[16]；β-桉葉醇能夠明顯促進(jìn)正常小鼠的胃腸運(yùn)動，對胃腸運(yùn)動機(jī)能有雙向調(diào)節(jié)作用[17]。

超臨界CO2流體萃取法提取溫度低，可有效保護(hù)化學(xué)成分不受高溫破壞，提取物的極性覆蓋范圍比水蒸氣蒸餾法更寬，不僅包含大量揮發(fā)性成分，還包括一些低極性難揮發(fā)成分[18]。本研究所得鉤藤超臨界CO2流體萃取物含有多種活性成分，說明該法適合鉤藤非生物堿類有效成分的提取，這為全面闡明中藥鉤藤的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)提供了一定的理論依據(jù)。

致謝：感謝國家中醫(yī)藥管理局科研三級實(shí)驗(yàn)室中(壯)藥化學(xué)與質(zhì)量分析實(shí)驗(yàn)室、廣西高校中藥提取純化與質(zhì)量分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供實(shí)驗(yàn)儀器及場所。

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GC-MS Analysis of the Supercritical CO2Fluid Extracts fromUncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil.*

LIAO Peng-ying

(Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Nanning 530001, China)

Uncariarhynchophylla(Miq.) Miq. ex Havil.; supercritical CO2fluid extraction; GC-MS

廣西中醫(yī)藥大學(xué)校級普通課題(P2012023)；廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)博士點(diǎn)建設(shè)工程開放課題(J13047-201410-12)；廣西中醫(yī)藥大學(xué)2014年博士研究生教育發(fā)展項(xiàng)目(050140002)。

廖彭瑩(1984-)，女，講師，主要從事中藥化學(xué)、天然藥物化學(xué)研究工作。

R284.1

A

1001-9677(2016)01-0121-04