無(wú)償獻(xiàn)血者ELISA灰區(qū)標(biāo)本的追蹤檢測(cè)結(jié)果分析

張國(guó)平焦作市中心血站，河南焦作　454000

無(wú)償獻(xiàn)血者ELISA灰區(qū)標(biāo)本的追蹤檢測(cè)結(jié)果分析

張國(guó)平
焦作市中心血站，河南焦作454000

目的對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者ELISA灰區(qū)標(biāo)本進(jìn)行追蹤檢測(cè)，探討灰區(qū)的設(shè)置原則。方法使用ELISA對(duì)39 318名無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP四項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)；對(duì)既往獻(xiàn)過(guò)血的175名灰區(qū)結(jié)果獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤檢測(cè)。結(jié)果39 318名無(wú)償獻(xiàn)血者中，酶免4項(xiàng)合計(jì)反應(yīng)性標(biāo)本105例，占獻(xiàn)血者總數(shù)的0.27%；灰區(qū)標(biāo)本233例，占獻(xiàn)血者總數(shù)的0.59%。175名灰區(qū)獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)結(jié)果仍為灰區(qū)的68例，占38.9%；結(jié)果為非反應(yīng)性的107例，占61.1%；未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)為反應(yīng)性的標(biāo)本。結(jié)論4項(xiàng)傳染性指標(biāo)以初檢復(fù)檢兩次ELISA進(jìn)行檢測(cè)的模式下，為了提高血液安全水平，應(yīng)設(shè)置灰區(qū)；核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）應(yīng)用于獻(xiàn)血者傳染性指標(biāo)檢測(cè)后，可以對(duì)ELISA灰區(qū)標(biāo)本進(jìn)行NAT追蹤檢測(cè)，取得一定的研究數(shù)據(jù)后，進(jìn)一步探討ELISA實(shí)驗(yàn)的灰區(qū)設(shè)置問(wèn)題。

無(wú)償獻(xiàn)血者；ELISA；灰區(qū)；追蹤檢測(cè)

［Abstract］Objective To track and test the ELISA grey-area specimens in blood donors without payment and study the setup principles of grey-area.Methods 39318 blood donors without payment were detected by four infectious indicators including HBsAg，anti-HCV，anti-HIV and anti-TP by ELISA，and 175 blood donors with grey-area results were tracked and detected.Results In 39318 blood donors without payment，there were 105 reactive specimens（four items in total by enzyme immunoassay），accounting for 0.27%and 233 grey-area specimens，accounting for 0.59%；tracking test results showed that in the 751 grey-area blood donors，there were still 68 grey-area donors，accounting for 38.9%and 107 non-reactive donors，accounting for 61.1%，and none was converted to reactive specimen.Conclusion In the pattern of four infectious indicators with initial examine and duplicate examine，the gray-area should be set in order to improve the blood safety level；NAT should be applied after the test of infectious indicators of blood donors，the ELISA grey-area specimen can be tracked and tested by NAT，and the grey-area setup problems of ELISA experiment should be further discussed after obtaining a certain research data.

［Key words］Blood donors without payment；ELISA；Grey-area；Tracing test

按照《獻(xiàn)血者健康檢查要求》［1］，血站應(yīng)對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者，進(jìn)行乙肝表面抗原 （HBsAg）、丙型肝炎抗體 （抗HCV）、艾滋病病毒抗體（抗HIV）和梅毒抗體（抗TP）初檢復(fù)檢二次檢測(cè)。為進(jìn)一步提高臨床用血安全水平，保證用血者身體健康，很多血站檢驗(yàn)科在使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），對(duì)上述4項(xiàng)傳染性指標(biāo)進(jìn)行結(jié)果判讀時(shí)，除了“反應(yīng)性”和“非反應(yīng)性”外，還會(huì)設(shè)置“灰區(qū)”［2-4］。為了對(duì)灰區(qū)的設(shè)置原則進(jìn)行探討，該站對(duì)檢測(cè)結(jié)果為灰區(qū)的獻(xiàn)血者，進(jìn)行了追蹤檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

2015年1—12月，該市無(wú)償獻(xiàn)血者39 318名，年齡18～55歲。使用ELISA對(duì)所有無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP四項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)；對(duì)既往獻(xiàn)過(guò)血的175名灰區(qū)獻(xiàn)血者 （其獻(xiàn)血時(shí)間為2014 年1月—2015年6月），使用ELISA對(duì)HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP4項(xiàng)傳染性指標(biāo)進(jìn)行追蹤檢測(cè)。

表1　39 318名無(wú)償獻(xiàn)血者四項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果［n（%）］

1.2試劑

HBsAg ELISA試劑盒，抗HCV ELISA試劑盒，抗HIV ELISA試劑盒，抗TP ELISA試劑盒HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP質(zhì)控品。所有試劑均由合格供方提供，進(jìn)貨檢驗(yàn)合格，有效期內(nèi)使用。

1.3主要儀器

STAR全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)；FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)；UranusAE全自動(dòng)酶免分析儀；SUNRISE掃描酶標(biāo)儀；Columbus洗板機(jī)。

1.4方法

1.4.1ELISA檢測(cè)流程 每位無(wú)償獻(xiàn)血者均留取初檢、復(fù)檢2份標(biāo)本，應(yīng)用ELISA法，按照HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP試劑的說(shuō)明書(shū)要求，進(jìn)行初檢、復(fù)檢2次檢測(cè)。

1.4.2結(jié)果判讀規(guī)則反應(yīng)性，S/C.O≥1；灰區(qū)，1＞S/C. O≥0.7；非反應(yīng)性，S/C.O＜0.7。

1.4.3灰區(qū)標(biāo)本追蹤檢測(cè)流程 檢測(cè)結(jié)果為灰區(qū)的獻(xiàn)血者，6個(gè)月后，只采集1份標(biāo)本，對(duì)灰區(qū)項(xiàng)目追蹤檢測(cè)，使用原檢測(cè)廠家的試劑雙孔復(fù)試。2孔檢測(cè)結(jié)果均S/C. O值＜0.7為非反應(yīng)性，解除該獻(xiàn)血者屏蔽狀態(tài)，可以繼續(xù)獻(xiàn)血；2孔檢測(cè)結(jié)果有1孔或2孔S/C.O值≥0.7，報(bào)告為“灰區(qū)”，該獻(xiàn)血者長(zhǎng)期屏蔽，暫不能獻(xiàn)血；2孔檢測(cè)結(jié)果均S/C.O值≥1.0為反應(yīng)性，該獻(xiàn)血者永久屏蔽，不宜繼續(xù)獻(xiàn)血。

1.5質(zhì)量控制

檢驗(yàn)科使用ELISA法檢測(cè)時(shí)，每板均按照試劑使用說(shuō)明書(shū)要求，設(shè)置相應(yīng)的空白、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控，做好室內(nèi)質(zhì)控工作；同時(shí)每年參加國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨檢中心、河南省臨檢中心組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。

2　結(jié)果

2.1無(wú)償獻(xiàn)血者4項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

使用ELISA法對(duì)39 318名無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行4項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)，HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP非反應(yīng)性結(jié)果共38980名，占99.14%；反應(yīng)性結(jié)果共105名，占0.27%；灰區(qū)結(jié)果共233名，占0.59%。39 318名無(wú)償獻(xiàn)血者4項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

灰區(qū)標(biāo)本數(shù)是反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)的2.22倍，表明灰區(qū)占總不合格的比例較高。

2.2灰區(qū)結(jié)果獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)結(jié)果

使用ELISA法對(duì)175名灰區(qū)結(jié)果獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤檢測(cè)，HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP非反應(yīng)性結(jié)果共107名，占61.1%；反應(yīng)性結(jié)果共0名，占0%；灰區(qū)結(jié)果共68名，占38.9%。175名灰區(qū)結(jié)果獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)情況見(jiàn)表2。

表2　175名灰區(qū)結(jié)果獻(xiàn)血者追蹤檢測(cè)情況［n（%）］

追蹤檢測(cè)結(jié)果仍為灰區(qū)的標(biāo)本數(shù)是非反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)的0.64倍，未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)為反應(yīng)性的標(biāo)本。

2.3質(zhì)控結(jié)果

室內(nèi)質(zhì)控使用Levey-Jennings質(zhì)控圖，采用13 s、22 s和10x質(zhì)控規(guī)則，對(duì)每板的質(zhì)控值進(jìn)行分析，符合選定的質(zhì)控規(guī)則，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果在控，可以發(fā)布檢測(cè)結(jié)果；如果質(zhì)控值違背質(zhì)控規(guī)則，則應(yīng)分析原因，必要時(shí)重新檢測(cè)［5-6］。參加國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨檢中心和省衛(wèi)生計(jì)生委臨檢中心室間質(zhì)評(píng)結(jié)果均100%符合。

3　討論

ELISA實(shí)驗(yàn)靈敏度高、特異性好、試劑穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便快速、無(wú)放射性污染，可利用全自動(dòng)酶免分析儀進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)，檢測(cè)通量大，特別適用于大批量無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的傳染性指標(biāo)檢測(cè)，在采供血機(jī)構(gòu)得到了廣泛應(yīng)用［7-8］。但是，多種因素包括獻(xiàn)血者體內(nèi)原因、標(biāo)本質(zhì)量、檢測(cè)試劑、儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)環(huán)境、人員因素等，可影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果［9］。在ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果判讀過(guò)程中，除了反應(yīng)性和非反應(yīng)性兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果外，還有部分標(biāo)本OD值非常接近陽(yáng)性判定值（cut-off），即“灰區(qū)”結(jié)果［10］。

使用ELISA對(duì)隨機(jī)選取的大批量已知某項(xiàng)目反應(yīng)性和非反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，以標(biāo)本數(shù)量為縱坐標(biāo)，可得到一個(gè)分布圖。其中，非反應(yīng)性標(biāo)本中OD值較高的部分，與反應(yīng)性標(biāo)本中OD值較低的部分，將會(huì)出現(xiàn)重疊現(xiàn)象，即是灰區(qū)結(jié)果產(chǎn)生的原因［11］。因此，合理科學(xué)地設(shè)置灰區(qū)，能使ELISA實(shí)驗(yàn)最大限度地檢出陽(yáng)性標(biāo)本，防止弱陽(yáng)性標(biāo)本的漏檢，可有效地保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)有重要的現(xiàn)實(shí)意義［12］。

該研究表1數(shù)據(jù)顯示，39 318名無(wú)償獻(xiàn)血者中，酶免4項(xiàng)合計(jì)反應(yīng)性標(biāo)本105例，占獻(xiàn)血者總數(shù)的0.27%；而灰區(qū)標(biāo)本233例，占獻(xiàn)血者總數(shù)的0.59%；灰區(qū)標(biāo)本數(shù)是反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)的2.22倍，表明灰區(qū)占總不合格的比例較高。表2顯示，既往獻(xiàn)過(guò)血的175名灰區(qū)獻(xiàn)血者，追蹤檢測(cè)結(jié)果仍為灰區(qū)的68例，占38.9%；結(jié)果為非反應(yīng)性的107例，占61.1%；未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)為反應(yīng)性的標(biāo)本，與謝云崢、張艷梅的報(bào)道基本一致［13-14］，與張秀慧等的報(bào)道有所不同［15］，這可能與所選取的研究對(duì)象不同、所使用的試劑不同等因素有關(guān)。

灰區(qū)結(jié)果具有不確定性，既可能是真陽(yáng)性，也可能是真陰性。采供血機(jī)構(gòu)為了保證臨床用血安全，任何一項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果為灰區(qū)或反應(yīng)性的血液，均不會(huì)發(fā)往臨床使用［16］。如果該灰區(qū)標(biāo)本為真陽(yáng)性，則把住了血液安全關(guān)，降低了輸血風(fēng)險(xiǎn)；如果該灰區(qū)標(biāo)本為真陰性，其結(jié)果也就是假陽(yáng)性，則浪費(fèi)了血液資源，造成不必要的血液報(bào)廢。

4　結(jié)語(yǔ)

4項(xiàng)傳染性指標(biāo)以初檢復(fù)檢兩次ELISA進(jìn)行檢測(cè)的模式下，為了提高血液安全水平，應(yīng)設(shè)置灰區(qū)，因其真陽(yáng)性的概率較大；隨著檢測(cè)技術(shù)的快速發(fā)展，近年來(lái)核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）逐漸應(yīng)用于獻(xiàn)血者傳染性指標(biāo)的檢測(cè)［17-19］，可以對(duì)ELISA弱陽(yáng)性及灰區(qū)標(biāo)本進(jìn)行NAT檢測(cè)，取得一定的研究數(shù)據(jù)后，再探討ELISA實(shí)驗(yàn)的灰區(qū)設(shè)置問(wèn)題，這有待于進(jìn)一步深入研究。

［1］中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).GB18467-2011獻(xiàn)血者健康檢查要求［S］.北京：衛(wèi)生部，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)管理委員會(huì).

［2］劉胡敏，陶傳敏，黃錦江，等.ELISA檢測(cè)丙型肝炎病毒設(shè)置灰區(qū)的必要性［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，40（8）：1490-1491，1494.

［3］陳顯，胡文佳，黃成垠，等.獻(xiàn)血者ELISA檢測(cè)為灰區(qū)標(biāo)本的確證試驗(yàn)與核酸檢測(cè)情況分析［J］.中國(guó)輸血雜志，2015，28 （2）：198-199.

［4］陳霞，黃麗麗，姜標(biāo).ELISA法檢測(cè)HBsAg灰區(qū)設(shè)置的探討［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2011，13（1）：63-66.

［5］王鴻杰，葛紅衛(wèi).采供血質(zhì)量控制技術(shù)［M］//王憬惺.輸血技術(shù).北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：432-473.

［6］段友斌，寸偉.ELISA實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控失控的回顧性分析［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2014，16（1）：72-74.

［7］中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委.血站技術(shù)操作規(guī)程.國(guó)衛(wèi)醫(yī)發(fā)〔2015〕95號(hào)［S］.北京：中國(guó)人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委.

［8］蔡麗娜，朱紹汶，周春，等.2010-2013年中國(guó)南京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群HBV、HCV、HIV感染情況分析［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2014，22（4）：1089-1093.

［9］譚立明.ELISA法檢測(cè)的影響因素及其對(duì)策［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，31（4）：300-305.

［10］蔡云玲，刁麗波，洪汾.抗-HIV檢測(cè)結(jié)果分析及灰區(qū)設(shè)置探討［J］.中國(guó)輸血雜志，2015，28（9）：1142-1143.

［11］李金明.臨床酶免疫測(cè)定技術(shù)［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2006：96-105.

［12］陳善華，朱麗莉，李浩，等.ELISA方法檢測(cè)HBsAg設(shè)置灰區(qū)的必要性探討［J］.中國(guó)輸血雜志，2015，28（9）：1142-1143.

［13］謝云崢，楊軍，周國(guó)平，等.上海地區(qū)抗-HCV反應(yīng)性獻(xiàn)血者隨訪研究［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2013，15（3）：212-216.

［14］張艷梅，王新梅，郭喜彪，等.獻(xiàn)血者抗HCV ELISA檢測(cè)有反應(yīng)性與確證實(shí)驗(yàn)的比較［J］.臨床血液學(xué)雜志，2015，28（6）：483-485.

［15］張秀慧，余加宏，鐘政榮，等.ELISA法檢測(cè)HBsAg灰區(qū)和單試劑反應(yīng)性樣本的確認(rèn)結(jié)果分析［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2015，17（3）：224-226.

［16］陳洪生，陳佳微，張三明，等.ELISA“灰區(qū)”范圍的設(shè)定對(duì)獻(xiàn)血者血液檢測(cè)安全和血源保護(hù)的意義［J］.中國(guó)輸血雜志，2015，28（9）：1140-1141.

［17］白艷菊.核酸檢測(cè)技術(shù)在無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7（15）：249-250.

［18］李莉華，韓衛(wèi)，何路軍，等.國(guó)產(chǎn)核酸檢測(cè)試劑在不同檢測(cè)系統(tǒng)中的應(yīng)用［J］.臨床血液學(xué)雜志，2015，28（12）：643-646.

［19］趙紅娜，王藝芳，葛文超，等.鄭州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者中核酸檢測(cè)的初步應(yīng)用［J］.中國(guó)輸血雜志，2014，27（9）：923-926）

Analysis of Tracking Test Results of ELISA Grey-area Specimen in Blood Donors without Payment

ZHANG Guo-ping
The Blood Center of Jiaozuo City，Jiaozuo，Henan Province，454000 China

R446.6

A

1672-5654（2016）04（c）-0096-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.12.096

2016-01-22