西藏林芝地區(qū)川貝母（瓦布貝母）總生物堿含量研究※

林麗君鐘燕珠雷旭區(qū)炳雄林華（廣東省深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院藥劑科，深圳5800；廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣州500）

西藏林芝地區(qū)川貝母（瓦布貝母）總生物堿含量研究※

林麗君1鐘燕珠2*雷旭2區(qū)炳雄2林華2
（1廣東省深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院藥劑科，深圳518001；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣州510120）

目的以總生物堿含量為指標(biāo)，考察西藏林芝地區(qū)不同產(chǎn)地野生川貝母（瓦布貝母）的品質(zhì)情況，為今后林芝地區(qū)川貝母人工種植種質(zhì)選育奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法以西貝母堿為對照品，紫外分光光度法測定川貝母（瓦布貝母）總生物堿的含量。結(jié)果所測林芝地區(qū)川貝母（瓦布貝母）中總生物堿的含量均高于《中國藥典》要求，是其規(guī)定含量的1.26～3.44倍。結(jié)論林芝地區(qū)的野生川貝母（瓦布貝母）可作為人工種植育種的種質(zhì)來源。

林芝地區(qū)；川貝母；瓦布貝母；總生物堿

川貝母為止咳化痰的良藥，市場需求量巨大。但川貝母藥材主要來源于野生資源，且多分布在采挖困難的邊遠(yuǎn)地區(qū)，產(chǎn)量不多，供需矛盾日益突出。為緩解供需矛盾，醫(yī)藥工作者在人工種植川貝母方面做了較多有益的探索［1］。西藏林芝地區(qū)有一定量的野生川貝母（瓦布貝母）分布，具備種植川貝母的地理環(huán)境和氣候。瓦布貝母是《中國藥典》收載的川貝母來源之一。筆者以川貝母的主要有效成分總生物堿為指標(biāo)［2］，考察林芝市不同縣區(qū)瓦布貝母的品質(zhì)，為川貝母人工種植尋找優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源。

1儀器與試藥

1.1儀器UV BLustar A紫外分光光度計(jì)（北京萊伯泰科儀器有限公司），Sartorius BSA224S型分析天平，SII-NI4B電熱恒溫水浴鍋（北京精科華瑞儀器有限公司），具塞試管，分液漏斗，濾紙，具塞錐形瓶。

1.2試藥西貝母堿對照品（批號X-021150320、純度＞98％、成都瑞芬思生物科技有限公司），甲醇（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司），三氯甲烷（天津市富宇精細(xì)化工有限公司），溴甲酚綠（天津市天新精細(xì)化工開發(fā)中心），氫氧化鈉（天津市百世化工有限公司），磷酸二氫鉀（天津市百世化工有限公司），氨水（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）。

實(shí)驗(yàn)所用1～6號川貝母樣品采自西藏林芝市不同縣區(qū)，親自或委托他人向當(dāng)?shù)厮庌r(nóng)收購，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)譚樹輝副教授鑒定為瓦布貝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia var.wabuensis（S.Y. Tang et S.C.Yue）Z.D.Liu，S.Wang et S.C.Chen的干燥鱗莖。樣品信息見表1。

表1　樣品信息

2方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備取西貝母堿對照品適量，精密稱定9.99 mg，置50 mL容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，制成濃度為0.1998 mg·mL的對照品溶液。

2.2供試品溶液的制備取川貝母（瓦布貝母）樣品粉末（過三號篩）約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液3 mL，浸潤1 h，加三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液40 mL，置80℃水浴加熱回流2 h，放冷，濾過，濾液置50 mL量瓶中，用適量三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液洗滌藥渣3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置25 mL具塞試管中，水浴上蒸干，精密加入三氯甲烷10 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3線性關(guān)系考察精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、1.0、2.0 mL，置25 mL具塞試管中，分別補(bǔ)加三氯甲烷至10.0 mL，精密加水5 mL、再精密加0.05％溴甲酚綠緩沖液2 mL，密塞，劇烈震搖1 min，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，放置30 min。取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在415nm的波長處測定吸光度［3，4］，以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為：

結(jié)果表明，西貝母堿在1.998～39.960μg·mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.4精密度試驗(yàn)精密量取同一對照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下的方法測定吸光度，連續(xù)依法測定6次，RSD值為0.92％（n=6），表明儀器精密度良好。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取同一供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下的方法，于0、1、2、4、8 h分別依法測定吸光度，RSD值為1.52％（n=5），表明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一川貝母樣品6份，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按“2.3”項(xiàng)下的方法，自“精密加水5 mL”起，依法測定吸光度，計(jì)算含量。結(jié)果樣品中總生物堿含量的平均值為0.1087％，RSD值為1.10％（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.7加樣回收率試驗(yàn)取已知總生物堿含量的樣品（0.1087％）6份，每份1 g，精密稱定，分別精密加入西貝母堿適量，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按“2.3”項(xiàng)下的方法，自“精密加水5 mL”起，依法測定吸光度，計(jì)算總生物堿含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.8樣品測定取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液，照“2.3”項(xiàng)下的方法，自“精密加水5 mL”起，依法測定吸光度，含總生物堿以西貝母堿計(jì)，計(jì)算樣品中總生物堿的含量。結(jié)果見表3。

表3　總生物堿含量測定結(jié)果（n=3）

3討論

伴隨著川貝母野生資源的極度短缺，藥材價格近年迅速攀升，且普遍存在摻偽現(xiàn)象，市場上難有合格川貝母藥材銷售。尋找優(yōu)質(zhì)川貝母種質(zhì)資源，并開展人工種植條件研究已到了刻不容緩的時刻。

西藏林芝地區(qū)川貝母（瓦布貝母）6個樣品中總生物堿含量與《中國藥典》規(guī)定含量（0.05％）相比較，均高于其要求，采自察隅縣的5號樣品含量最低，也達(dá)到規(guī)定含量的1.26倍；采自巴宜區(qū)的1號、4號樣品中總生物堿達(dá)規(guī)定含量的3倍以上，分別為3.06倍和3.44倍，采自米林縣的2號、6號樣品也分別是規(guī)定含量的2.19倍和2.68倍。表明林芝地區(qū)野生川貝母（瓦布貝母）品質(zhì)均較好，可從中篩選優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的品種，作為人工種植育種的種質(zhì)來源。

［1］向麗，韓建萍，陳士林.人工栽培川貝母種苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2011，4（2）：91-94.

［2］顏曉燕，彭成.川貝母藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2014，22（31）：2963-2965.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：36-38.

［4］王純玉，何祖新，吳玉良.不同商品規(guī)格川貝母總生物堿含量測定的方法研究［J］.中國藥業(yè)，2013，22（15）：31-33.

Research on the Total Alkaloid Content of Bulbus Fritillariae Wabuensis in Nyingchi Prefecture of Tibet

LIN Lijun1，ZHONG Yanzhu2，LEI Xu2，OU Bingxiong2，LIN Hua2
（1.Department of Pharmacy，Shenzhen Luohu District Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Province，Shenzhen 518001，China；2.Department of Pharmacy，The Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou，518001，China）

Objective To investigate the general quality of wild Bulbi fritillariae wabuensis from different places of origin in Nyingchi Prefecture，Tibet Autonomous Region，with the total alkaloids content as the indicator，in order to lay the experimental basis for germplasm selection and breeding of future artificial cultivation of F.wabuensis in Nyingchi prefecture.Methods UV-Vis spectrophotometric determination of the total alkaloids of F.wabuensis was conducted，with Sipeimine as the reference substance.Results The measured total alkaloid contents of F wabuensis bulbi from Nyingchi Prefecture were all above the standards stipulated in the Pharmacopoeia of the People's Republic of China（PPRC），being 1.26 to 3.44 times its statutory content in PPRC.Conclusion Wild F.wabuensis bulbi from Nyingchi prefecture of Tibet can be used as a source of germplasm for breeding in artificial cultivation.

Nyingchi prefecture；F.wabuensis bulbus；Bulbus fritillariae wabuensis；total alkaloids

doi：10.3969/j.issn.1672-2779.2016.14.0661672-2779（2016）-14-0146-02

※廣東省省級科技計(jì)劃項(xiàng)目（No：2013B060400021）
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duduzyz@sohu.com

（本文編輯：張文娟本文校對：張文娟2016-04-27）