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    關(guān)于“綠葉中的色素提取和分離”的思考與改進(jìn)

    2016-08-20 11:01:12周臻華
    生物學(xué)教學(xué) 2016年6期
    關(guān)鍵詞:細(xì)線層析濾紙

    周臻華

    (江蘇省前黃高級(jí)中學(xué) 常州 213161)

    1 問(wèn)題的提出

    在進(jìn)行人教版高中生物學(xué)教材 “綠葉中的色素提取和分離”實(shí)驗(yàn)時(shí),會(huì)遇到如下問(wèn)題:提取的色素濾液為什么是黃綠色的?哪種提取劑提取的色素含量最多?如何才能做到充分研磨?究竟加多少 SiO2和CaCO3是合適的?濾紙條的一端為什么要減去兩個(gè)小角?怎樣才能劃好濾液細(xì)線?為什么濾紙條上的濾液細(xì)線不能浸入層析液中?等等。為了解決這些問(wèn)題,筆者和興趣小組的學(xué)生一起進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),嘗試以不同的方法進(jìn)行探索。

    2 問(wèn)題的解決

    通過(guò)對(duì)下列實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)的思考與改進(jìn),最終獲得更清晰的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,實(shí)驗(yàn)成功率得到明顯提高。

    2.1 實(shí)驗(yàn)材料的選擇 教材建議的實(shí)驗(yàn)材料是新鮮菠菜葉。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),菠菜是有季節(jié)性的蔬菜,跨季節(jié)的菠菜大多來(lái)自溫室大棚培養(yǎng)。這樣綠葉提取的濾液多呈現(xiàn)黃綠色,實(shí)驗(yàn)效果不佳。采集了多種校園植物葉片進(jìn)行嘗試,有法國(guó)冬青、大葉黃楊、火棘、酢漿草、龍葵、烏蘞莓等。結(jié)果顯示龍葵和烏蘞莓的實(shí)驗(yàn)效果最佳。

    茄科茄屬的龍葵和葡萄科烏蘞莓屬的烏蘞莓,均為小型草本植物,葉片深綠色。本文以烏蘞莓為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方法改進(jìn)。選擇烏蘞莓葉片,洗凈、晾干(這樣提取液中水分含量少些,制備的提取液顏色較深)。

    2.2 提取劑的選擇 教材中用丙酮作為提取劑。綠葉中的色素均為脂類化合物,不溶于水,僅溶解于非極性的有機(jī)溶劑。提取液為淺綠色或黃綠色。根據(jù)“石油醚、乙醚等醚類能夠提高類胡蘿卜素的提取效率”[1]和“提取液以丙酮加少量石油醚,提取效果好”[2]的提議,采用先加入3 mL丙酮研磨,再加入2 mL石油醚的方法,獲得提取液為墨綠色。色素提取效果較好。

    2.3 研磨方法的選擇 教材中采用方法是:稱取2 g葉片,剪碎,加入2 mL丙酮和少量石英砂 SiO2和少量CaCO3進(jìn)行快速和充分的研磨。一般認(rèn)為,加入 SiO2是為了研磨更充分;加入CaCO3是為了保護(hù)色素,防止色素被破壞??墒顷P(guān)于取少量的 SiO2和少量CaCO3,怎樣充分研磨?很多學(xué)生不得要領(lǐng),要么快速研磨,但不夠充分,導(dǎo)致濾液色淺;要么充分研磨,但時(shí)間過(guò)長(zhǎng),由于丙酮揮發(fā)速度快于研磨速度,結(jié)果反而沒(méi)有得到提取液。少量究竟用多少?筆者采用方法為:(A)稱取2 g葉片(去掉主葉脈的),疊加整齊,順次剪成煙絲狀,再剪成碎末,放入研缽中,加入 0.5 g CaCO3和 0.5 g SiO2,充分研磨成葉泥。加3 mL丙酮稍研磨后加入2 mL石油醚再研磨幾下;同時(shí)設(shè)計(jì)了對(duì)比實(shí)驗(yàn)組;(B)用Na2CO3代替CaCO3進(jìn)行實(shí)驗(yàn);(C)在原有用料基礎(chǔ)上添加 0.5 g NaCl的實(shí)驗(yàn);(D)在原有用料基礎(chǔ)上去掉 0.5 g CaCO3的實(shí)驗(yàn)。每組都進(jìn)行了相同的操作,獲得的提取液均為墨綠色(表1)。

    表1 烏蘞莓綠葉色素的提取(提取液的顏色)

    2.4 過(guò)濾提取液 在過(guò)濾提取液時(shí),采用單層尼龍布過(guò)濾:用尖嘴鑷子夾住尼龍布包好的濾渣按順時(shí)針?lè)较驍D捏,加快過(guò)濾速度。用小試管收集濾液,立即用棉塞塞緊試管口。

    2.5 濾紙條制備和點(diǎn)樣 教材中將干燥的定性濾紙,剪成長(zhǎng)與寬略小于試管的長(zhǎng)與寬的濾紙條,并將一端剪去兩角,并在這一端1 cm處用鉛筆畫(huà)一條細(xì)線。試管狹小,濾紙條不易放入層析液中,更多的情況是濾紙條上的濾液細(xì)線浸沒(méi)入層析液中,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。本文采用方法為:改小試管為50 mL小燒杯,濾紙條制作為長(zhǎng)7.5 cm,寬1.5 cm,并將一端剪去兩角,剪角后底邊寬度接近濾紙條寬度的1/2。并在這一端1 cm處用鉛筆畫(huà)一條細(xì)線。至于為什么剪去兩角,和學(xué)生一起設(shè)計(jì)剪去兩角和不剪兩角的濾紙條實(shí)驗(yàn),進(jìn)行對(duì)照。發(fā)現(xiàn)可有效防止由液體表面張力引起的濾紙條邊緣擴(kuò)散過(guò)快的現(xiàn)象。

    劃濾液細(xì)線時(shí),采用“推血涂片方法[3]。具體做法為:取兩片載玻片,一支膠頭滴管。用膠頭滴管吸色素濾液,把濾液滴加兩滴在一塊潔凈的載玻片上中央位置,用另一塊潔凈載玻片傾斜45°輕輕推濾液成一薄層,稍等片刻。等提取液大量揮發(fā)后,濾液薄層還沒(méi)干燥時(shí),在濾紙條距離1 cm處折疊,折痕處在載玻片的薄層濾液上輕輕推過(guò),可來(lái)回幾次直到把載玻片上的濾液全部吸干。將對(duì)折的濾紙拉直,就可看見(jiàn)濾液細(xì)線可以在濾紙條上呈現(xiàn)“直、細(xì)、勻、齊”的特點(diǎn)。此法嘗試2~3次之后,就可熟練掌握濾液揮發(fā)的狀態(tài)和涂抹色素的時(shí)機(jī)。這樣劃出的濾液細(xì)線達(dá)到“直、細(xì)、勻、齊”,效果較好。

    2.6 色素的層析 采用50 mL小燒杯和培養(yǎng)皿組合進(jìn)行層析。濾紙條的長(zhǎng)度與小燒杯對(duì)比,長(zhǎng)出的部分彎折處理,便于掛在小燒杯的杯沿,這樣可以防止色素濾液細(xì)線浸入層析液中。

    層析液的配制:選擇4種層析液進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),其中①石油醚∶丙酮∶苯=20∶2∶1;② 石油醚∶丙酮 = 9∶1;③無(wú)水乙醇∶丙酮 = 9∶1;④ 四氯化碳 +無(wú)水硫酸鈉(少許)。

    2.7 層析最終結(jié)果分析 將A、B、C、D四組提取液分別用4種層析液層析。在相同時(shí)間內(nèi),A組(2 g葉片+ 0.5 g CaCO3+ 0.5 g SiO2)和B組(2 g葉片+ 0.5 g Na2CO3+ 0.5 g SiO2)濾液,在4種不同的層析液中分離效果都很明顯;C組(2 g葉片+ 0.5 g CaCO3+ 0.5 g SiO2+ 0.5 g NaCl)墨綠色濾液在4種層析液中,分離效果均不明顯;D組(2 g葉片+ 0.5 g SiO2)墨綠色濾液分離效果居間。

    結(jié)論:層析液最佳的配方是①石油醚∶丙酮∶苯=20∶2∶1;其次為② 石油醚∶丙酮 = 9∶1。

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