刺五加莖總木脂素含量測定*

張　穎，岳姝岐，李瑞芳，孫　暉

（黑龍江中醫(yī)藥大學 中藥血清藥物化學重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040）

刺五加莖總木脂素含量測定*

張穎，岳姝岐，李瑞芳，孫暉

（黑龍江中醫(yī)藥大學 中藥血清藥物化學重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040）

目的：建立紫外分光光度法測定刺五加莖中總木脂素含量的方法。方法：采用紫外分光光度法以刺五加苷E為對照品，在最大吸收波長處測定。結果：刺五加苷E顯色后在560nm處有最大吸收，在6.93～23.1μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關系（r=0.9995），平均回收率為99.28%（n=6）。結論：本方法可以快速準確的測定刺五加莖中總木脂素的含量。

刺五加；木脂素；含量測定

刺五加為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus（Rupr.et Maxim.）Harms的干燥根、根莖或莖，具有補肝腎、強筋骨的功效［1］。實驗室前期對刺五加莖化學成分進行了研究，結果表明：含有大量的木脂素類化合物，并發(fā)現(xiàn)口服后在體內(nèi)直接作用物質(zhì)主要是其木脂素類成分的代謝物，提示總木脂素類成分是表達刺五加莖臨床療效的主要藥效物質(zhì)基礎［2］。刺五加莖中的木脂素類成分具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒抗菌、抗骨質(zhì)疏松、降血糖、神經(jīng)保護、心血管保護、雌激素樣作用［3-10］。而在以往的文獻報道中，僅僅是單獨測定刺五加中刺五加苷E的含量。因此，本實驗選擇紫外分光光度法測定刺五加莖中總木脂素含量。

1　實驗部分

1.1儀器與試藥

UVmini-1240紫外可見分光光度計（日本島津公司）；分析天平PB1501-N型（瑞士梅特勒）；

刺五加莖采于黑龍江，經(jīng)王喜軍教授鑒定為正品；刺五加苷E對照品（四川省維克奇生物科技有限公司）；變色酸（天津市致遠化學試劑有限公司）；其他所用試劑均為分析純。

1.2試劑溶液的制備

1.2.1對照品溶液的配制精密稱取干燥至恒重的刺五加苷E對照品適量，置25mL容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，溶解。得濃度為0.231mg·mL-1的對照品溶液。

1.2.2供試品溶液的制備取干燥刺五加莖粉末（40目）約5g，精密稱定，置于250mL圓底燒瓶中，加入60%乙醇50mL回流提取2h，抽濾，置于250mL容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2　方法與結果

2.1檢測波長的選擇

在400～800nm波長范圍內(nèi)分別掃描刺五加苷E對照品溶液及供試品溶液發(fā)現(xiàn)兩者在560nm處均有一個吸收峰且峰形變化平緩便于定量測定。因此，將560nm作為檢測波長。

2.2含量測定方法（變色酸法）

精密吸取供試品溶液及刺五加苷E對照品溶液置于10mL具塞試管中，蒸干，依次加入0.5mL 10%變色酸溶液，3mL濃H2SO4，搖勻后加入1.5mL蒸餾水，密封試管口，搖勻，置于試管架上，放入水浴鍋，沸水浴加熱30min，取出后直流水迅速冷卻，搖勻，空白試劑調(diào)零，560nm處測定。

2.3刺五加苷E標準曲線的繪制

精密吸取刺五加苷E對照品溶液150、200、250、300、350、400、450、500μL，分別置于10mL具塞試管中，按“2.2”項下操作?？瞻自噭┱{(diào)零，在560nm處測定吸光度，以對照品吸光度為縱坐標，質(zhì)量濃度（μg·mL-1）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為y=0.0295x-0.0048，r=0.9995。結果表明，刺五加苷E在6.93～23.1μg·mL-1濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關系，標準曲線見圖1。

圖1　刺五加苷E的標準曲線Fig.1　Standard curve of Eleutheroside E

2.4方法學考察

2.4.1精密度試驗精密吸取對照品溶液200μL，按“2.2”項下操作測定吸光度，連續(xù)測定6次，其RSD值為0.28%，說明儀器精密度良好，所測數(shù)據(jù)準確可靠，結果見表1。

表1　精密度試驗結果Tab.1　Results of precision tests

2.4.2穩(wěn)定性試驗精密吸取供試品溶液200μL，按“2.2”項下操作測定吸光度，每隔20min測定一次吸光度值，其RSD值為0.78%，表明供試品溶液顯色后120min內(nèi)穩(wěn)定，結果見表2。

表2　穩(wěn)定性試驗結果Table.2　Results of stability tests

2.4.3加樣回收率試驗精密吸取6份已知總木脂素含量的供試品溶液各100μL，精密加入一定量的對照品溶液，按“2.2”項下操作測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算回收率，其RSD值為2.41%，表明已建立的含量測定方法結果準確，結果見表3。

表3　加樣回收率試驗結果Table.3　Results of recovery tests

2.5樣品測定

取干燥刺五加莖粉末（40目）3份，每份約5g，精密稱定，按“1.2.2”項制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液200μL，按“2.2”項下操作測定吸光度。結果見表4。測得供試品溶液中總木脂素的平均含量為1.62%。

表4　刺五加莖總木脂素的含量測定結果（n=3）Table.4　Contents of lignans in stems of Acanthopanax senticosus（n=3）

3　結論

利用變色酸比色法測定刺五加莖總木脂素含量。其原理為：木脂素類化合物的化學結構上多具有1個亞甲二氧基（-OCH2-O-），濃H2SO4可使其水解并定量釋放出甲醇，后者可與變色酸反應產(chǎn)生紫紅色。在一定波長處測定其吸光度，即可計算出總木脂素的含量。經(jīng)方法學考察，其精密度、穩(wěn)定性、重復性RSD值分別為0.28%、0.78%、0.82%，回收率為99.28%，供試品溶液在顯色120min內(nèi)穩(wěn)定，表明建立的測定方法重復性好，測定結果準確可靠，簡便易行，可用于刺五加莖總木脂素含量的測定。為刺五加莖總木脂素提取及富集工藝奠定基礎。

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Determination of content of total lignans in the stem of acanthopanax senticosus*

ZHANG Ying，YUE shu-qi，LI Rui-fang，SUN Hui
（National TCM Key Laboratory of Serum Pharmacochemistry，Hei Long Jiang University of Traditional Chinese Mdicine，Harbin 150040，China）

Objective：established A UV spectrophotometry method for the determination of total ignin in the stem of acanthopanax senticosus was.Method：Use ultraviolet spectrophotometer to measure total lignans in the stem of acanthopanax senticosus，eleutheroside E as reference substances，at the maximum absorption wavelength，respectively.Result：eleutheroside E with maximum absorption at 560nm，it had a good linear relationship within the range of 6.93～23.1ug·mL-1（r=0.9995）and the average recovery was 99.28%（n=6）.Conclusion：The method is simple，accurate，and can be used for the quantitative determination of total ignin in the stem of acanthopanax senticosus.

acanthopanax senticosus；lignans；determination

R9

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20160728

2016-05-09

國家科技支撐計劃（2011BAI03B03）刺五加產(chǎn)業(yè)關鍵技術、綜合開發(fā)利用研究

張穎（1979-），女，在讀博士研究生，從事中藥質(zhì)量控制及中藥血清藥物化學研究。
導師簡介：孫暉（1963-），女，教授，博士研究生導師，從事中藥質(zhì)量控制、中藥血清藥物化學、方證代謝組學研究。