玫瑰糠疹合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

周大慶，胡俊光，徐 波山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355；2山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院

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玫瑰糠疹合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

周大慶1，胡俊光1，徐 波2△
1山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355；2山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院

目的：建立玫瑰糠疹合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)玫瑰糠疹合劑中赤芍、防風(fēng)進(jìn)行定性鑒別；通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定制劑中芍藥苷、升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量。芍藥苷的色譜條件為ZO RBA XSB-C18色譜柱（4.6 m m×250 m m，5 μm），流動(dòng)相以乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液（14∶86），柱溫30℃，流速1.0 m L/m i n，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷色譜條件為ZO RBA XSB-C18色譜柱（4.6 m m×250 m m，5 μm），流動(dòng)相以乙腈-0.1%磷酸水（40∶60），柱溫30℃，流速1.0 m L/m i n，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。結(jié)果：赤芍、防風(fēng)薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。芍藥苷在10～60 μg/m L范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關(guān)系（r=1），平均加樣回收率為98.53%，RSD為1.18%；升麻素苷在5.98～35.88 μg/m L范圍內(nèi)，升麻素苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），平均加樣回收率為98.3%，RSD 為1.77%；5-O-甲基維斯阿米醇苷在2.86～17.1 6 μg/m L范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關(guān)系（r=1），平均加樣回收率為99.07%，RSD為1.09%。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)方法可靠、準(zhǔn)確，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

玫瑰糠疹合劑；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；赤芍；防風(fēng)

玫瑰糠疹合劑是根據(jù)臨床驗(yàn)方開(kāi)發(fā)研制而成的一種中藥制劑，由赤芍、防風(fēng)、荊芥、苦參、生地黃、白鮮皮、甘草等10味中藥組成，具有涼血、祛風(fēng)止癢之功效［1］，治療玫瑰糠疹具有良好療效。方中赤芍清熱涼血，散瘀止痛，用于熱入營(yíng)血、溫毒發(fā)斑、吐血衄血、目赤腫痛、肝郁脅痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、癮瘕腹痛、跌撲損傷、癰腫瘡瘍。防風(fēng)祛風(fēng)解表，勝濕止痛、止痙，用于感冒頭痛、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)疹瘙癢、破傷風(fēng)［2］。原標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)單，無(wú)定量控制方法。本研究采用TLC及H PLC法對(duì)方中主要藥味赤芍、防風(fēng)進(jìn)行定性及定量分析，為全面有效控制玫瑰糠疹合劑的質(zhì)量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

Agi l ent 1260型高效液相色譜儀(美國(guó)Agil ent公司)；芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736-201337)；升麻素苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111522-201310)；5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111523-201208)；荊芥對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120911-201110)；甲醇、乙腈為色譜純；水為純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 赤芍的TLC鑒別［2］取本品10 m L，加乙醇20 m L，振搖超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? m L使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 m L含2 m g的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例稱取缺赤芍的其他藥材，按制備工藝制備陰性樣品，同法制備缺赤芍的陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 玫瑰糠疹合劑中赤芍的TLC

2.2 防風(fēng)的TLC鑒別［1］取本品10 m L，加丙酮20 m L，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，加乙醇1m L使殘?jiān)芙?，得到供試品溶液。取升麻素苷?duì)照品、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品適量，加乙醇制成每1 m L各含1 m g的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。另取防風(fēng)對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方比例稱取缺防風(fēng)的其他藥材，按制備工藝制備陰性樣品，同法制備缺防風(fēng)的陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液及對(duì)照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖2。

圖2 玫瑰糠疹合劑中防風(fēng)的TLC

2.3 芍藥苷的H PLC法測(cè)定

2.3.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) ZO RBAX SB-C18色譜柱(4.6 m m×250 m m，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(14∶86)，柱溫30℃，流速1.0 m L/m i n，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，進(jìn)樣量10μL，見(jiàn)圖3。

圖3 玫瑰糠疹合劑中芍藥苷H PLC圖

2.3.2 溶液的制備 1)對(duì)照品溶液的制備。精密稱取芍藥苷5.00 m g甲醇溶解定容至100 m L(芍藥苷的濃度為50 μg/m L)備用；2)供試品溶液的制備。取本品1m L，置100m L容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用；3)陰性對(duì)照樣品溶液的制備。按處方比例精密稱取缺赤芍的其余藥材，按上述制備工藝制備陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照樣品溶液。

2.3.3 線性關(guān)系考察 取“2.3.2”項(xiàng)下芍藥苷對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、12 μL，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度C(m g/m L)為橫坐標(biāo)，得到芍藥苷回歸方程為A=11.056C-2.793(r=0.9998)。結(jié)果表明，在10～60 μg/m L范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示RSD=0.57%，表明儀器精密度良好。

2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定芍藥苷的峰面積。測(cè)定結(jié)果RSD=2.32%，表明供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批樣品，按“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法平行制得6份供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。測(cè)定結(jié)果為RSD=1.35%，表明本法重現(xiàn)性良好。

2.3.7 加樣回收實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的同批樣品0.5m L，共6份，分別加入一定量的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品，按“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備，按照確定的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC測(cè)定

2.4.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) ZO RBAX SB-C18色譜柱(4.6 m m×250 m m，5 μm)，流動(dòng)相以乙腈-0.1%磷酸水(40∶60)，柱溫30℃，流速1.0m L/m i n，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，理論板數(shù)按升麻素苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，進(jìn)樣量10μL，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 玫瑰糠疹合劑中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC圖

2.4.2 溶液的制備 1)對(duì)照品溶液的制備。精密稱取升麻素苷對(duì)照品2.99 m g及5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品1.43 m g，置容積為100 m L同一量瓶中，加甲醇溶解后，稀釋至刻度，搖勻，備用(升麻素苷濃度為29.9μL，5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度為14.3μL)。2)供試品溶液的制備。取本品5 m L，置10 m L容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。3)陰性對(duì)照樣品溶液的制備。按處方比例精密稱取缺防風(fēng)的其余藥材，按上述制備工藝制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照樣品溶液。

2.4.3 線性關(guān)系考察 取“2.4.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、12 μL，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，并以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度C(m g/m L)為橫坐標(biāo)，得升麻素苷回歸方程：A=48.017C+1(r=0.999 9)；5-O-甲基維斯阿米醇苷回歸方程：A=30.212C-0.053 3(r=0.999 7)。結(jié)果表明在 5.98～35.88 μL/m L范圍內(nèi)，升麻素苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關(guān)系；在2.86～17.16μL/m L范圍內(nèi)，5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關(guān)系。

2.4.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。測(cè)定結(jié)果表明，升麻素苷RSD=0.52%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD=1.42%，本法重現(xiàn)性良好。

2.4.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積。測(cè)定結(jié)果表明，升麻素苷RSD=0.74%；5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD=1.40%，表明供試品溶液在10小時(shí)穩(wěn)定。

2.4.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批樣品，按“2.4.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法平行制得6份供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。測(cè)定結(jié)果表明，升麻素苷RSD=1.53%；5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD=1.61%，本法重現(xiàn)性良好。

2.4.7 加樣回收實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的同批樣品10 m L，共6份，分別精密加入一定量的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷標(biāo)準(zhǔn)品，按“2.4.2”項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制備，按照確定的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2—3。

表2 升麻素苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 5-O-甲基維斯阿米醇苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品測(cè)定結(jié)果 取不同批號(hào)的樣品，按前述供試品溶液

制備法制備，按照確定的色譜條件測(cè)定，計(jì)算結(jié)果，見(jiàn)表4。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果（n=3） m g/m L

3 討論

本研究在參考2010年版《中國(guó)藥典》(一部)及文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)玫瑰糠疹合劑中的赤芍和防風(fēng)進(jìn)行了TLC定性鑒別研究和H PLC色譜分析。防風(fēng)的TLC鑒別參照2010年版《中國(guó)藥典》(一部)及文獻(xiàn)方法，樣品的處理方法分別采用了丙酮處理和氯仿處理，丙酮處理后的樣品TLC結(jié)果不理想。在展開(kāi)劑的選擇上采用了三氯甲烷和甲醇的不同比例，分別選用了三氯甲烷-甲醇(4∶1)、三氯甲烷-甲醇(6∶1)、三氯甲烷-甲醇(8∶1)，結(jié)果三氯甲烷-甲醇(6∶1)效果較好。

在芍藥苷的H PLC分析中，采用三種不同的流動(dòng)相，結(jié)果甲醇-水(40：60)有拖尾現(xiàn)象，乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(25：75)分離效果不理想，乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(14∶86)比較適宜。在升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC測(cè)定中分別采用了甲醇-水(40∶60)［3］、甲醇-0.04 m ol/L乙酸鈉(30∶70)［4］、乙腈-水-醋酸(13∶88∶0.03)［5］作為流動(dòng)相進(jìn)行分離，效果均不理想，最終選擇乙腈-0.1%磷酸水(40∶60)作為升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC測(cè)定的流動(dòng)相效果最佳。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，完善了玫瑰糠疹合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可以有效控制制劑質(zhì)量。

［1］ 肖永慶，楊濱，姚三桃，等.防風(fēng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2001，26（3）：185-187.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］ 黃杰芳，李惠霞，鄧慧敏.辛夷鼻炎丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中草藥，2009，40（8）：1245-1247.

［4］ 劉煥蓉，王虹，秦雪梅，等.H PLC法測(cè)定玉屏風(fēng)不同配伍中4種黃酮成分［J］.中草藥，2011，42（6）：1122-1124.

Quality Standard of Gibert′s Disease Mixture

ZHOU Daqing1，HU Jun′guang1，XU Bo2△
1 Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2 Shandong Provincial Hospital

Objective：To establish quality standard of gibert's disease mixture.Methods：ChiShao（Radix paeoniae rubra）and FangFeng（Radix Saposhnikoviae）in gibert's disease mixture were qualitatively identified by TLC；the contents of peoniflorin，prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in the preparations were determined by HPLC.Chromatographic conditions of peoniflorin were ZORBAX SB-C18chromatographic column （4.6 mm×250 mm，5 μm），acetonitrile-0.2%phosphoric acid and 0.04%triethylamine solution as mobile phase，column temperature 30℃，flow rate 1.0mL/min，detection wavelength 230nm；chromatographic conditions of prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol were ZORBAX SB-C18chromatographic column（4.6 mm×250 mm，5 μm），acetonitrile-0.1%phosphoric acid（40：60）as mobile phase，column temperature 30℃，flow rate 1.0mL/min，detection wavelength 254 nm.Results：ChiShao and FangFeng showed clear spots，good separation and non-interference in negative control in TLC identification.Peoniflorin showed a good linear relationship in the range between 10 and 60μg/mL，its peak area and concentrations demonstrated better linear relationship （r=1），average recovery rate was 98.53%，RSD was 1.18%；prim-O-glucosylcimifugin showed a good linear relationship in the range between 5.98 and 35.88 μg/mL，its peak area and concentrationswereinagoodlinearrelationship（r=0.9999），averagerecoveryratewas98.3%，RSDwas1.77%；4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol showed a good linear relationship in the range between 2.86 and 17.16 μg/mL，its peak area and concentrations demonstrated better linear relationship（r=1），average recovery rate was 99.07%，RSD was 1.09%.Conclusion：The method，reliable and accurate，could be used for quality control of the preparation.

gibert's disease mixture；quality standard；ChiShao；FangFeng

R283.61

A

1004-6852（2016）01-0040-05

2015-06-29

周大慶（1988—），男，在讀碩士研究生。研究方向：中藥制劑及臨床藥學(xué)。