亞麻子大孔樹脂純化物急性毒性實驗研究*

錢夢茹，劉效栓，劉軍剛，李喜香，李季文，畢映燕，張亞會甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部

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亞麻子大孔樹脂純化物急性毒性實驗研究*

錢夢茹1，劉效栓2△，劉軍剛2，李喜香2，李季文2，畢映燕2，張亞會1
1甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部

目的：考察亞麻子大孔樹脂純化物（M REF）的急性毒性，為擬定臨床用量提供參考。方法：將昆明種小鼠隨機分為對照組（N S溶液）和M REF溶液低劑量組（0.000 253 g/m L）、中劑量組（0.002 53 g/m L）、高劑量組（0.025 3 g/m L），每組10只進行實驗，根據(jù)實驗結(jié)果測定LD50或進一步實驗測定最大給藥量。結(jié)果：干預(yù)7天內(nèi)對照組，M REF溶液高、中、低劑量組小鼠皮膚、毛發(fā)、眼和黏膜、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動及體質(zhì)量均無明顯變化，無動物死亡；LD50未測出，受試動物灌胃M REF溶液（0.025 3 g/m L）的24小時內(nèi)最大給藥量為33.7 g/kg，相當于成人每天服用M REF0.12 g/kg（按60 kg體質(zhì)量計算）的505.5倍，未見毒性反應(yīng)。結(jié)論：低、中、高劑量的M REF溶液與生理鹽水對照組比較未出現(xiàn)任何急性毒性反應(yīng)，由其最大給藥量可知該藥口服安全，屬無毒級。

亞麻子；大孔樹脂純化物；急性毒性實驗

亞麻子(Semen lini)是亞麻科亞麻屬植物亞麻(Linum usitatissimum L.)的種子。研究發(fā)現(xiàn)亞麻子具有多種生物活性，如抗癌、防治心血管疾病、減緩更年期癥狀、預(yù)防骨質(zhì)疏松癥等，對預(yù)防膳食模式依賴性的疾病和改善患者預(yù)后有重要意義。但其也含有毒性成分如抗營養(yǎng)因子植酸、生氰糖苷、抗吡多醇因子(抗維生素B)和致甲狀腺腫素等物質(zhì)［1］，目前未見有關(guān)亞麻子大孔樹脂純化物(M REF)毒性的報道。故本研究考察大劑量M REF溶液對小鼠所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)及24小時內(nèi)灌胃的最大給藥量，以確定其臨床應(yīng)用安全性，為擬定臨床用量提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供，動物質(zhì)量合格證號：SCXK(甘)-2010-0001。

1.2 M REF制備 稱取亞麻子適量，在60～70℃水浴條件下，以料液比為37倍，氯化鈉用量為2 g，浸提120分鐘脫膠，用60℃水洗至無咸味，自然干燥，粉碎成粗粉，稱取適量粗粉加8倍量70%乙醇在60～70℃提取2次，2 h/次，濾過，收集濾液，減壓濃縮至原料重量的2倍，加40%氫氧化鈉至濃縮液中使氫氧化鈉濃度為4%，60℃水解35分鐘，放置室溫用濃鹽酸調(diào)至pH=4，放置40分鐘，過濾，收集濾液，濃縮，將濃縮液配制成相當于1.5 BV的藥液，以1.2 m L/m i n流速上樣，上樣結(jié)束后，靜置4小時，用5BV的蒸餾水以1.5 m L/m i n流出速度洗脫，棄洗脫液，以3 BV 10%乙醇洗脫，棄洗脫液，再用3 BV 20%乙醇、4 BV 30%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25(60℃)的浸膏，微波干燥(溫度＜60℃，5分鐘)，粉碎，即得。

1.3 M REF溶液制備 將制備所得M REF(純度61%，甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部提供)配制成溶液(含M REF0.0253g/m L)，用時分別稀釋成原濃度的0.1倍、0.01倍。取原溶液、0.1倍溶液、0.01倍溶液供小鼠灌胃給藥。

1.4 方法 將小鼠隨機分為4組，即對照組(N S)及 M REF溶液低劑量組(0.000253g/m L)、中劑量組(0.00253g/m L)、高劑量組(0.025 3 g/m L)，每組10只。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，實驗前將全部實驗動物編號并稱重。

1.4.1 LD50測定 根據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［2］，對M REF溶液灌胃給藥小鼠的LD50進行測定。預(yù)實驗：將以上分組后小鼠禁食16小時，各組均按0.02 m L/g體質(zhì)量灌胃M REF溶液，灌胃后4小時嚴密觀察，此后每日觀察1次并記錄各組小鼠體質(zhì)量、皮膚毛發(fā)、眼和黏膜、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢變化及死亡情況。

1.4.2 最大給藥量實驗［3-4］取雌小鼠30只，禁食不禁水，16小時后稱重，隨機分為對照組和給藥組各15只。給藥組以0.02 m L/g體質(zhì)量灌胃M REF溶液2次，間隔6小時，對照組按0.02 m L/g體質(zhì)量給予生理鹽水。給藥后4小時內(nèi)密切觀察其反應(yīng)，此后繼續(xù)觀察7天。

2 結(jié)果

2.1 LD50測定 LD50測定實驗中，M REF溶液高、中、低各劑量組小鼠灌胃給予M REF溶液后，高劑量組小鼠出現(xiàn)呼吸頻快、一過性興奮、繼而短暫靜臥的反應(yīng)，大約1小時后恢復(fù)正常；第2天各劑量組動物無死亡、無異常反應(yīng)，毛色光澤，大、小便顏色正常。連續(xù)觀察7天，分別于給藥后第1天、第3天及第7天同一時間稱量各組小鼠的體質(zhì)量。各劑量組小鼠體質(zhì)量與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；給藥后7天各組小鼠無死亡、無異常反應(yīng)；處死小鼠，觀察心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、大腦、小腦、胃、胰腺、大腸、小腸、睪丸、卵巢等主要臟器體積、顏色、質(zhì)地均無明顯改變，故無法測得LD50，見表1。

表1 M REF小鼠LD50實驗不同時間動物體質(zhì)量變化情況

2.2 最大給藥量實驗 因LD50實驗中未見小鼠死亡，無法測得最大致死劑量，無法進行藥物LD50測定，故進行最大給藥量實驗。最大給藥量實驗中24小時累積給藥量為33.7g/kg。給藥后4小時內(nèi)高劑量組小鼠出現(xiàn)短暫興奮，而后活動明顯減少，臥伏，4小時后動物活動狀態(tài)恢復(fù)正常，體質(zhì)量觀察發(fā)現(xiàn)動物增長良好，呼吸、活動正常，飲食、飲水、排便均正常，口、眼、鼻，無異常分泌物。7天內(nèi)動物無死亡、無異常反應(yīng)，毛色光澤，大、小便顏色正常。于給藥后第1天、第3天及第7天同一時間稱量每只小鼠體質(zhì)量。結(jié)果顯示高劑量組小鼠體質(zhì)量與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。第7天處死小鼠，觀察心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、大腦、小腦、胃、胰腺、大腸、小腸、睪丸、卵巢等主要臟器體積、顏色、質(zhì)地均無明顯改變。M REF溶液的成人(按60kg體質(zhì)量計算)日用劑量為0.12 g/kg。故本實驗給予小鼠日累積劑量為臨床成人擬推薦日用劑量的505.5倍。表明M REF溶液臨床應(yīng)用具有安全性，見表2。

表2 M REF小鼠M TD實驗不同時間動物體質(zhì)量變化情況

3 討論

實驗結(jié)果表明，M REF溶液高、中、低劑量組均未對小鼠引起急性毒性反應(yīng)，且給藥后小鼠體質(zhì)量增長正常，最大給藥量為33.7 g/kg，相當于成人每日服用M REF 0.12 g/kg(按60 kg體質(zhì)量計算)的505.5倍，說明其臨床應(yīng)用安全可靠。

［1］ 張文斌.亞麻木酚素的提取純化與生物活性研究［D］.無錫：江南大學(xué)，2007.

［2］ 國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品評審中心.中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則［EB/O L］.2005［2014-04］.ht t p：//w w w.cde.org.cn/zdyz.dom et hod=l arge Page&i d=2086.

［3］ 徐淑云，卞如濂，陳修.藥理學(xué)實驗方法［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：227-228.

［4］ 戚志華，張松，黨學(xué)良，等.歸辛膠囊急性毒性實驗研究［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2013，13（28）：5418-5421.

Acute Toxicity Test of Macroporous Resin Extract from Flaxseed

QIAN Mengru1，LIU Xiaoshuan2△，LIU Jungang2，LI Xixiang2，LI Jiwen2，BI Yingyan2，ZHANG Yahui1
1 Pharmacy College of Gansu University of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China；2 Pharmacy Department of Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective：To provide the reference of working out clinical dosage by investigating acute toxicity test of macroporous resin extract from flaxseed（MREF）.Methods：The mice were randomly allocated to the control group（NS solution），low （0.000 253 g/mL），moderate（0.002 53 g/mL）and high（0.025 3 g/mL）doses groups of MREF solutions，ten mice each group，maximum dosage was detected by further test or LD50 detected according to the results of the test.Results：There was no obvious change in skin，hair，eye and mucous membrane，respiratory system，central nervous system，limb activities and body weight of the mice in the control group，high，moderate and lowdosesgroupsofMREFsolutionswithinsevendaysafterintervention，andnoanimaldeath；LD50wasn'tdetected，maximum dosage of MREF solutions（0.025 3 g/mL）for the tested animals were 33.7g/kg within 24 hours，equivalent to 505.5 times of the adults taking MREF in the concentrations of 0.12 g/kg（calculated by adult body weight 60kg）each day，no toxicity has been seen.Conclusion：No acute toxicity test has been seen when low，moderate and high doses groups of MREF solutions were compared with the control group of physiological saline，the drug is safe for oral administration and of non-toxic grade according to the maximum dose of MREF solution.

flaxseed；macroporous resin extract；acute toxicity test

R284

A

1004-6852（2016）01-0017-02

2015-03-25

2011年甘肅省第四批科技支撐計劃（編號1104FK CA 121）。

錢夢茹（1990—），女，碩士研究生。研究方向：中藥炮制與制劑工藝。