紫白膏對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛大鼠血漿IL-6、IL-10影響*

蔡而瑋　張倩倩

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【實(shí)驗(yàn)研究】

紫白膏對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛大鼠血漿IL-6、IL-10影響*

蔡而瑋1張倩倩2

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院肛腸二科(福州 350004); 2.福建中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院(福州 350000)

摘要：目的研究紫白膏對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛模型大鼠血漿中IL-6、IL-10的影響。方法將健康SD大鼠48只,雌雄各半,隨機(jī)分成正常組、單純模型組、凡士林組、紫白膏組。除正常組外,其余大鼠均建立腸病術(shù)后疼痛模型；正常組、模型組不予藥物治療,其余各組大鼠分別給予相應(yīng)藥物創(chuàng)面換藥,連續(xù)給藥3天，每天2次，在末次給藥后1小時(shí)取血。測(cè)定各組大鼠血漿IL-6和IL-10含量。結(jié)果四組IL-6情況：?jiǎn)渭兡Ｐ徒M、凡士林組血漿IL-6水平均高于正常組(P<0.05)，統(tǒng)計(jì)學(xué)有明顯差異；凡士林組IL-6略低于模型組(P>0.05)，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。紫白膏組IL-6低于模型組、凡士林組(P<0.05)，統(tǒng)計(jì)學(xué)有明顯差異；紫白膏組血漿IL-6水平略高于正常組(P>0.05)，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；四組IL-10情況：模型組大鼠血漿IL-10與正常組比較無明顯差異(P>0.05)，凡士林組IL-10水平高于模型組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，紫白膏組IL-10水平高于凡士林組、模型組、正常組，統(tǒng)計(jì)學(xué)具有明顯差異(P<0.05)。結(jié)論紫白膏能控制肛腸病術(shù)后疼痛大鼠血漿IL-6水平，并提升IL-10水平，這可能是紫白膏的臨床鎮(zhèn)痛效果機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：紫白膏；疼痛； 大鼠； IL-6；IL-10

術(shù)后疼痛是人體由于組織損傷、神經(jīng)纖維受外源性理化因素刺激而產(chǎn)生的一種痛苦感覺, 可見于大多數(shù)手術(shù)后患者，亦是是肛腸科常見的并發(fā)癥。紫白膏是本院院內(nèi)制劑，主要成分是大黃、紫草、石膏、白及及冰片等，其被長(zhǎng)期應(yīng)用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面恢復(fù)并取得了良好療效[1～2]。本研究通過測(cè)量肛腸病術(shù)后疼痛大鼠血清IL-6、IL-10的含量,研究紫白膏對(duì)肛腸病術(shù)后大鼠血清IL-6、IL-10的影響，從微觀及分子水平探討我院自制劑紫白膏的鎮(zhèn)痛作用機(jī)理。

1　研究材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康清潔級(jí)SD大鼠,48只,雌雄各半,體質(zhì)量為(200±20) g,由福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心代購(gòu)，廠家：上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，合格證編號(hào)：2007000573723，許可證號(hào)2012-0002。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物及試劑(1)紫白膏：由福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院中藥制劑室制備。(2)凡士林：福建省人民醫(yī)院代購(gòu),天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司生產(chǎn)。(3)IL-6、IL-10ELISA試劑盒：鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司代購(gòu)，品牌CUSABIO，產(chǎn)品編號(hào)：CSB-E04640r，CSB-E04595r。 (4)10%水合氯醛：福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室代購(gòu)，批號(hào)：符合HG3-1004-76。

1.3實(shí)驗(yàn)器材手術(shù)包(包括眼科手術(shù)刀、鑷子、剪刀等)、千分之一電子天平、高速離心機(jī)、酶標(biāo)儀、毛細(xì)玻璃管、-20℃冰箱。

1.3研究方法

1.3.1動(dòng)物分組將48只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分成4組，即正常組、單純模型組、凡士林組、紫白膏組。

1.3.2動(dòng)物造模參考何永恒教授造模方法[3]。大鼠經(jīng)腹腔注射 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g體重麻醉，麻醉后仰臥固定,將鼠尾近端包括肛周進(jìn)行消毒, 肛門松弛后,以肛緣為界,切開皮膚至直腸點(diǎn)膜,切口修剪成三角形缺損,底寬約l.0cm,高約2. 0cm,深至皮下深筋膜層。

1.3.3創(chuàng)面換藥紫白膏組:造模后創(chuàng)面外用紫白膏。凡士林組:造模后創(chuàng)面外用凡士林。模型組:只造模不使用藥物。正常組:不造模、不使用任何藥物。各組大鼠造模后，正常組、模型組不用藥物處理,其余組分別用相應(yīng)藥物均勻涂于相應(yīng)創(chuàng)面上，紗布覆蓋創(chuàng)面。連續(xù)換藥3天,每天早晚2次(上午8點(diǎn)至9點(diǎn)、下午4點(diǎn)至5點(diǎn))。

1.3.4樣本采集各組動(dòng)物分別換藥3天，于末次換藥后1h,將大鼠經(jīng)腹腔注射 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g體重麻醉，用5ml注射器抽取腹主動(dòng)脈血4 mL,抗凝保存，采集后30min內(nèi)離心10min(3000r/min)，取上清液在-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?，避免反?fù)凍融。

1.3.5數(shù)據(jù)處理每孔設(shè)計(jì)復(fù)孔，取平均值計(jì)算。以廠家提供專業(yè)軟件，根據(jù)軟件提示繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣本 OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)濃度。

2　結(jié)果

表1　各組實(shí)驗(yàn)大鼠IL-6水平比較

表2　各組實(shí)驗(yàn)大鼠IL-10水平比較　(例)

3　結(jié)論

紫白膏能控制肛腸病術(shù)后疼痛大鼠血漿IL-6水平，并提升IL-10水平，這可能是紫白膏臨床鎮(zhèn)痛效果的機(jī)制之一。

4　討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為大部分手術(shù)后患者由于組織損傷、 創(chuàng)口修復(fù)、 神經(jīng)纖維受外源性理化因素刺激從而產(chǎn)生術(shù)后疼痛。疼痛亦是肛腸科常見的并發(fā)癥，創(chuàng)傷或手術(shù)等組織損促使導(dǎo)致炎癥介質(zhì)的釋放，繼而外周傷害感受器被激活，傷害性信號(hào)就會(huì)通過脊髓上行傳導(dǎo)至丘腦和大腦皮層，中樞對(duì)這部分信號(hào)進(jìn)行整合后人就產(chǎn)生疼痛感覺[4]。而手術(shù)后創(chuàng)面神經(jīng)纖維末梢暴露, 反復(fù)受到外界理化因素(如IL-6、IL-1β、TNF-α)的刺激，一方面炎癥因子直接刺激外周產(chǎn)生疼痛, 另一方面,炎癥因子經(jīng)過一些反應(yīng)后作用于脊髓背角神經(jīng)元 NMDA 受體和AMPA 受體, 使脊髓背角神經(jīng)元長(zhǎng)時(shí)去極化, 其興奮性和反應(yīng)性增加導(dǎo)致中樞敏感化。最終引起了組織對(duì)正常刺激的反應(yīng)增強(qiáng)和反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng), 產(chǎn)生持久性疼痛，故術(shù)后疼痛主要的病理基礎(chǔ)是炎癥因子的刺激[5]。因此，減少炎性介質(zhì)的產(chǎn)生可成為肛腸病術(shù)后緩解疼痛的思路之一。

IL- 6是由多種細(xì)胞分泌(如單核巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等)產(chǎn)生的具有分化和促生長(zhǎng)作用的生物活性細(xì)胞因子，本質(zhì)是一種多肽物質(zhì)，是炎癥免疫反應(yīng)的關(guān)鍵介質(zhì)之一。炎癥激活免疫細(xì)胞產(chǎn)生的一系列致炎細(xì)胞因子,如IL-1α、IL-1β、IL-18及TNF-α等均可進(jìn)一步誘導(dǎo)正常細(xì)胞產(chǎn)生 IL-6，它可以刺激活化B細(xì)胞增殖，分泌抗體[6]，在創(chuàng)傷后代謝反應(yīng)中起重要作用。IL-10主要由輔助性Th2細(xì)胞產(chǎn)生，是一種生物活性強(qiáng)，具有多向性的免疫抑制因子。它可以限制中性粒細(xì)胞產(chǎn)生,抑制中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的趨化性，抑制單核-巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子如IL-1、 TNF-α及IL-6等[7],所以可以說IL-10是一種抗炎因子。作為廣泛生物活性的細(xì)胞因子，白介素6和白介素10被認(rèn)為是術(shù)后創(chuàng)傷血清中的炎性和抗炎因子的代表，可作為評(píng)價(jià)術(shù)后炎癥反應(yīng)強(qiáng)烈程度的檢測(cè)指標(biāo)[8]，而術(shù)后疼痛的病理基礎(chǔ)是炎癥因子刺激，所以通過檢測(cè)術(shù)后大鼠血漿白介素6和白介素10的水平能在一定程度上反應(yīng)術(shù)后大鼠的疼痛情況。

祖國(guó)醫(yī)藥外治法治療肛腸病歷史悠久，紫白膏是本院院內(nèi)制劑，其臨床療效顯著。但筆者認(rèn)為中醫(yī)藥的療效不僅僅是體現(xiàn)在臨床效果上，中醫(yī)應(yīng)走向科學(xué)化道路，故通過本實(shí)驗(yàn)為紫白膏的臨床效果提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支持。紫白膏主要成分是大黃、紫草、石膏、白及、冰片等，全方起到清熱利濕、涼血止血、消腫止痛的功效。本方以大黃、紫草為君，研究證實(shí)大黃素[9]、紫草素[10]等中藥提取物對(duì)炎性介質(zhì)有干預(yù)效果；白及、煅石膏共為臣，有研究[11]證實(shí)白及具有緩解術(shù)后疼痛效果，而煅石膏具有收斂生肌，多外用以治癰疽瘡瘍，潰不收口，金瘡出血等[12]。冰片為使，研究證實(shí)其具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛效果[13]?？偠^之，本方整體藥理具有抗炎鎮(zhèn)痛效果，本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了紫白膏對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛模型大鼠IL-6的控制作用和對(duì)IL-10的提升作用，此可能為紫白膏鎮(zhèn)痛機(jī)制之一，但遺憾的是本實(shí)驗(yàn)不能證實(shí)紫白膏對(duì)炎性因子產(chǎn)生作用的具體機(jī)理，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

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*基金項(xiàng)目：福建省科技廳紫白膏治療混合痔術(shù)后的臨床研究(No.2011Y0033)

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.01.023

文章編號(hào)：1003-8914(2016)-01-0048-03

收稿日期：(本文校對(duì)：葉玲2015-01-12)

The influence of the ZiBai Cream on IL-6 and IL-10 in plasma of rats with anorectal postoperative pain

CAI Erwei1ZHANG Qianqian2

(1.The Affiliated People's Hospital of Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fujian, Fuzhou 350004, China;2.Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fujian, Fuzhou 350000, China)

Abstract：ObjectiveTo study on the influence of the ZiBai Cream on IL-6 and IL-10 in plasma of rats with anorectal postoperative pain. MethodsThe healthy 48 SD rats, half male and half female, were randomly divided into 4 groups，namely the normal group, pure model group, vaseline group, ZiBai cream group。Except the normal group, the other rats were established anorectal diseases anorectal diseaseanorectal diseasepostoperative pain model；Except the normal group and model group, other groups of rats were given corresponding medicine dressing change, continuous administration for 3 days, 2 times a day，In the last 1 hours after administration of blood treatment。Determine the plasma IL-6 and IL-10 content in all rats。ResultsFour groups of IL-6: IL-6 levels in plasma of simple model group, vaseline group are higher than those of normal group(P<0.05), statistically significant difference; The level of IL-6 vaseline group is slightly lower than the model group(P>0.05), but no statistical difference； The ZiBai cream group IL-6 was lower than that of model group, vaseline group(P<0.05)，statistics had significant difference。Four groups of IL-10：No significant difference was found between the plasma IL-10 of the rats in the model group and the normal group(P>0.05)；Vaseline group was higher than that in the model group, but the difference was not statistically significant(P>0.05)；The ZiBai cream group IL-10 levels higher than vaseline group, model group and normal group, with significant difference in Statistics(P<0.05)。ConclusionZiBai cream can control the rat plasma IL-6 level of anorectal postoperative pain，and enhance the level of IL-10，This may be one of the mechanism of analgesic effect of ZiBai cream。

Key words：ZiBai cream；Pain； rats；IL-6；IL-10