養(yǎng)血透骨法對肺癌化療后患者免疫功能影響的臨床研究*

饒群陽　徐基平　王　昊　劉成高　蔡春蓮

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養(yǎng)血透骨法對肺癌化療后患者免疫功能影響的臨床研究*

饒群陽徐基平王昊劉成高蔡春蓮

湖南省衡陽市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤Ⅱ科(衡陽 421001)

摘要：目的觀察透骨法對肺癌化療后患者免疫功能的影響。方法采用直接免疫熒光標(biāo)記全血溶血法、流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測治療前后肺癌化療后患者外周血血清T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8、NK細(xì)胞及巨噬細(xì)胞水平。結(jié)果在提升肺癌化療后患者免疫功能方面，治療組明顯優(yōu)于對照組(P<0.01)。結(jié)論透骨養(yǎng)血法能明顯提升肺癌化療后患者的免疫功能，并能改善其化療后的臨床癥狀，提高腫瘤患者生存質(zhì)量，毒副反應(yīng)少，具有明顯的療效優(yōu)勢。

關(guān)鍵詞：養(yǎng)血透骨法；肺癌化療后；直接免疫熒光標(biāo)記全血溶血法；流式細(xì)胞儀技術(shù)；免疫功能

腫瘤發(fā)病率逐年增加，治療后復(fù)發(fā)率逐漸上升，研究表明惡性腫瘤患者普遍存在免疫功能低下[1]，接受化療的肺癌病人免疫功能受損以細(xì)胞免疫功能受損為主[2]，細(xì)胞免疫在腫瘤免疫中發(fā)揮著重大的作用，分別由T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞組成，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫又分為CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞，在機(jī)體的抗腫瘤免疫系統(tǒng)中占據(jù)著主導(dǎo)地位。肺癌化療后患者免疫功能的抑制及下降導(dǎo)致治療的失敗，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及免疫抑制，全身臟器功能衰竭而死亡。在2013年5月至2014年11月期間，筆者采用直接免疫熒光標(biāo)記全血溶血法、流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測100例肺癌化療后患者外周血血清T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8及NK細(xì)胞水平，研究養(yǎng)血透骨法對肺癌化療后患者免疫功能的影響。

1　資料與方法

1.1一般資料患者來源均為我院2013年05月至2014年11月的腫瘤內(nèi)科及呼吸內(nèi)科肺癌化療后的住院病人，共觀察100例，按隨機(jī)法分為治療組和對照組兩組，各為50例，治療組中，男性28例，女性22例，年齡 19～76歲之間，平均年齡為(45.5±9.55)歲，病程在0.5～8年，平均病程為(3.5±2.2)年；對照組中男性29例，女性21例，年齡在33～74歲之間，平均年齡為(44.6±9.75)歲，病程在0.25～9年，平均病程為(3.8±2.0)年，兩組患者在年齡、性別、病程均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照：虛癥參考標(biāo)準(zhǔn)[3]。 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《臨床疾病診斷依據(jù)治愈好轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)》[4～5]。

1.3納入標(biāo)準(zhǔn)[6](1)經(jīng)病理學(xué)及細(xì)胞學(xué)確診并住院接受化療后，不愿或不再接受化療的晚期肺癌化療后病人。(2)心電圖提示大致正常。(3)血生化(肝、腎功能)、凝血常規(guī)基本正常，白細(xì)胞在3.5×109/L以上，紅細(xì)胞在6.0×1012/L以上，血小板在50×109/L以上的患者。小便常規(guī)基本正常，大便常規(guī)未見隱血，基本正常。(4)K氏評分在60分以上，預(yù)計(jì)壽命在3月以上的患者。

1.4觀察方法采用單盲平行對照法觀察，觀察藥物劑量、給藥方法及療程。

1.5治療方法

1.5.1治療組養(yǎng)血透骨法(衡陽市中醫(yī)院協(xié)定方)，中藥水煎服，每日1劑，三煎后分2次溫服。

1.5.2對照組口服貞芪扶正顆粒(由通化修正藥業(yè)公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號：001624 131121)，一次1包，沖服，一天2次。

1.5.3療程2周為一療程，觀察1月(注：根據(jù)臨床用藥經(jīng)驗(yàn)及回顧性研究確定)。

1.5.4服藥方法每次均由住院部責(zé)任班護(hù)士將藥物配成200ml的湯劑，端與病人口服，每日2次，兩組患者服藥時(shí)間及劑量相同。

1.6相關(guān)說明凡入選病例，觀察及治療期間僅采用與提升患者免疫力無關(guān)的相應(yīng)的西醫(yī)對癥處理方法，并記錄其具體用量。

1.7剔除標(biāo)準(zhǔn)患者中斷觀察研究在7天以上者，中途出現(xiàn)嚴(yán)重的肝腎功能、出血、心臟病、死亡等以及其他嚴(yán)重病癥不能繼續(xù)堅(jiān)持研究的患者。

1.8觀察指標(biāo)(1)療效性觀察：①研究前后患者血生化、血常規(guī)、心電圖等對比。②研究前后患者相關(guān)癥狀、體征、卡式評分標(biāo)準(zhǔn)(KPS)等對比?？ㄊ皆u分標(biāo)準(zhǔn)[7]、臨床癥狀療效評定[5]。(2)研究指標(biāo)(免疫指標(biāo))觀察方法：①標(biāo)本采集：在檢查當(dāng)天上午7：00至9：00采血，采血時(shí)間分別為：治療前(一周內(nèi))，用藥期間第15天(前后三天)，觀察結(jié)束后(一周內(nèi))，每次抽血均檢查2次取其平均值作為觀察數(shù)據(jù)。每次采血2ml作為標(biāo)本，乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2)抗凝處理。②試劑與儀器：FACSARIA流式細(xì)胞儀(美國BECKMAN-COULTER公司)，型號為EPICS-XL。試劑由美國BECKMAN-COULTER公司統(tǒng)一提供，包括鼠抗人單抗克隆CD4-FITC/CD8-PE和CD3- PECY5等單克隆抗體。(3)檢測方法：①細(xì)胞免疫的熒光標(biāo)記，將鼠抗人單抗克隆CD4-FITC/CD8-PE和CD3- PECY5，加入抗凝全血0.1ml中，雙標(biāo)記抗體20μl，充分混勻后避光于溫室孵育30min，使用免疫熒光制備儀進(jìn)行紅細(xì)胞裂解，溫室避光15min后，使用流式細(xì)胞儀對各細(xì)胞亞群百分比進(jìn)行檢測。②流式細(xì)胞儀檢測 使用BECKMAN-COULTER公司配套的Sy-stemⅡ系統(tǒng)軟件數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)，先進(jìn)行光路流路的校準(zhǔn)，校準(zhǔn)后進(jìn)行熒光補(bǔ)償，然后上樣本檢測。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料先進(jìn)性方差齊性檢驗(yàn)，方差齊則組內(nèi)采用配對t檢驗(yàn)(使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)處理)，組間采用兩樣本比較的t檢驗(yàn)。各組有效率比較采用radit分析及χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞治療前后變化的比較分析見表1。

表1　兩組患者治療前后T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞變化　(例，x±s)

注：*P<0.01，治療后治療組和對照組之間存在有顯著性差異。提示：在提升肺癌化療后患者免疫功能方面，治療組明顯優(yōu)于對照組。

2.2各組患者臨床癥狀療效治療前后變化的比較分析見表2。

表2　兩組患者治療后臨床癥狀療效變化　(例，%)

注：*P<0.01，治療后治療組和對照組之間存在有顯著性差異。提示：在改善肺癌化療后患者臨床癥狀方面，治療組明顯優(yōu)于對照組。

2.3兩組患者KPS評分治療前后均在60分以上，兩組無顯著性差異(P>0.05)。

3　討論

研究表明，惡性腫瘤T細(xì)胞亞群較健康人減低[8～10]，而B 細(xì)胞影響較小，McMichael認(rèn)為[11]T淋巴細(xì)胞作為細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的中心樞紐，Th和Ts細(xì)胞之間的平衡是通過CD4+和CD8+細(xì)胞之間的百分比表達(dá)出來的，其值下降表示免疫狀態(tài)受抑制。目前研究還發(fā)現(xiàn)，CD4+細(xì)胞在協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞中起著重要作用[12]，CD4+細(xì)胞數(shù)減少可使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸[13～14]。中醫(yī)藥在增強(qiáng)劑機(jī)體免疫功能方面療效顯著，周立峰等[15]的研究表明，圣愈湯能糾正環(huán)磷酰胺所致的免疫低下小鼠T細(xì)胞亞群的異常，升高血液中IL-2及IL-4的含量，從而提高機(jī)體的免疫應(yīng)答水平。黃梅等[16]研究證明，四君子湯可調(diào)整機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子水平及功能狀態(tài)，通過健脾補(bǔ)氣增加脾的衛(wèi)氣功能從而調(diào)節(jié)免疫功能。

癌癥的發(fā)病率日益上升，正成為人類第一致死原因。而化療仍為臨床腫瘤內(nèi)科的基本手段，對于化療引起患者免疫功能下降等最近成為研究熱點(diǎn)，尤為突出。本課題取自曾廣盛先生(湖南省第一批名老中醫(yī)、全國第二批名老中醫(yī)學(xué)術(shù)繼承人指導(dǎo)老師)“病在氣血以補(bǔ)益為本，以開竅為觸機(jī)，二法同用方可補(bǔ)而不滯、令其氣血生機(jī)盎然”的經(jīng)驗(yàn)，選用枸杞子、當(dāng)歸、熟地黃、阿膠、黃芪、西洋參、牛黃、穿山甲、冰片等中藥組方成透骨養(yǎng)血法。其功能為益氣養(yǎng)血、開竅透骨、滋腎健脾，適用于癌癥化療后氣虛血弱、免疫功能低下等，改善其臨床癥狀，提高生存質(zhì)量，通過實(shí)驗(yàn)室方法為臨床提供依據(jù)，其中熟地黃滋陰補(bǔ)血、益精填髓；枸杞子滋補(bǔ)肝腎；阿膠補(bǔ)血止血、滋陰潤燥；當(dāng)歸補(bǔ)血活血；共用以滋腎補(bǔ)血活血。西洋參補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津；黃芪補(bǔ)氣升陽健脾、托毒排膿、斂創(chuàng)生?。欢唣B(yǎng)陰益氣，配合補(bǔ)血藥，以益氣生血、養(yǎng)陰生津。穿山甲活血通經(jīng)、搜風(fēng)通絡(luò)；牛黃清心、豁痰、開竅、熄風(fēng)、解毒；冰片開竅醒神、清熱解毒，三者共用芳香走竄，以開竅為動力，引諸藥直達(dá)病所，以透骨為目的，直搗病所，補(bǔ)血與透骨兩法合用，補(bǔ)益而不滋膩，散收結(jié)合，氣血雙補(bǔ)，肝脾腎兼顧，氣血互資共補(bǔ)，共奏益氣養(yǎng)血、開竅透骨之功，提升并激活患者血液免疫機(jī)制，達(dá)到提高免疫力，改善臨床癥狀，提高患者生活質(zhì)量，延長患者生存期的臨床療效。其立法、組方、治則緊扣癌癥化療后之氣陰兩虛、脾腎虧虛之病因病機(jī)，故而能效驗(yàn)于臨床。

參考文獻(xiàn)

[1]王潤潔，胡紅，黃芳，等.胃癌患者外周血淋巴細(xì)胞免疫功能的變化及臨床意義[J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2009,16(9)：26-28.

[2]吳昊.化療肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平分析[J].Internal Medicine of China,Otc.2011.6(5):433-434.

[3]全國中西醫(yī)結(jié)合虛證與老年病研究專業(yè)委員會.中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)[M].中西醫(yī)結(jié)合雜志，1986：198.

[4]中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.臨床疾病診斷依據(jù)治愈好轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)[M]. 北京：人民軍醫(yī)出版社出版，1998：422.

[5]湖南省衛(wèi)生廳，湖南省醫(yī)院管理協(xié)會.常見疾病診斷依據(jù)與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)[M].長沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

[6]中華人民共和國衛(wèi)生部.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則第一輯[S].中華人民共和國衛(wèi)生部，1993：57-59.

[7]劉亞嫻.中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2005：98.

[8]莫?jiǎng)俑＃蝹ゼ?五行匯總劉患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的檢測機(jī)意義[J].華夏醫(yī)學(xué)，2007,6(20)：1295-1296.

[9]徐紅，毛一香，張學(xué)光，等.晚期消化道腫瘤患者化療前后T細(xì)胞亞群的變化[J].癌癥，2008,27(4)：418-424.

[10]李焱，王士勇，于環(huán)，等.惡性腫瘤患者換藥前后免疫功能狀況及胸腺五肽等的調(diào)節(jié)作用[J].中華腫瘤防治雜志，2001,6(14)：924-927.

[11]Mc Michael. Monoclonal antibody in clinical medicine[J].Academic Press，1982，24(1):366.

[12]Ortalao JR，Mason A,Overton R. Lymphckine-actived kill cells:analysis of progernitors and effectors[J]. J Exp Med，1986，164:1193.

[13]蘇燎原，徐映東，耿勇志，等.淋巴細(xì)胞亞群與免疫的初探[J].免疫學(xué)雜志，1992，8(4):251.

[14]付體輝.腫瘤的免疫逃避機(jī)制[J].國外醫(yī)學(xué)腫瘤分冊，1999，17(6):366.

[15]周立峰，邱玉華，程鋼，等.圣愈湯對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的影響[J]，現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué).2009，21(9)：805-813.

[16]黃梅，夏天，張仲梅，等.四君子湯對脾虛患者血漿細(xì)胞因子的影響[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，21(4)：411-413.

*基金項(xiàng)目：衡陽市科技局項(xiàng)目(No.S30)

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.01.008

文章編號：1003-8914(2016)-01-0016-03

收稿日期：(本文校對：周曉艷2015-01-05)