骨痹止痛液中烏頭堿的限量檢查*

李喜香，李興勇，王雪梅，包　強(qiáng)

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

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骨痹止痛液中烏頭堿的限量檢查*

李喜香，李興勇，王雪梅，包強(qiáng)

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

目的:建立骨痹止痛液中烏頭堿限量檢查方法。方法:采用RP-HPLC對(duì)骨痹止痛液中的烏頭堿進(jìn)行限量檢查，色譜柱為Waters Symmetry Shield C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-5 mL/L三乙胺水溶液(70∶30)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)235 nm，進(jìn)樣體積20 μL，柱溫為室溫。結(jié)果：烏頭堿在0.017 6～0.176 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積積分值線性關(guān)系良好(r=0.999 6)；平均加樣回收率為98.49%，RSD值為0.99%(n=6)。結(jié)論:該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，可用于骨痹止痛液中烏頭堿的限量檢查。

骨痹止痛液/成分分析；RP-HPLC；烏頭堿

骨痹止痛液是中藥酒劑，來(lái)源于甘肅省中醫(yī)院骨科專家經(jīng)驗(yàn)方(專利號(hào)：ZL201210296740.5)，由乳香、沒(méi)藥、木瓜、獨(dú)活、羌活、小茴香、當(dāng)歸、續(xù)斷、厚樸、川芎、白芷、制川烏、制草烏組成，具有活血止痛、祛風(fēng)除濕的功效，用于跌打瘀滯、腫痛，風(fēng)濕拘攣，四肢麻木，骨節(jié)酸痛等癥的治療。骨痹止痛液處方中的制川烏和制草烏具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛的功效，主要含二萜類烏頭堿[1]。烏頭堿是其有效成分，鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)，且連續(xù)用藥不易產(chǎn)生耐受現(xiàn)象[2-3]；但也是毒性成分?？紤]到制川烏和制草烏均為毒性藥材，使用時(shí)需對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的限量，為保證用藥安全有效，筆者采用RP-HPLC法對(duì)骨痹止痛液中的烏頭堿進(jìn)行限量檢查，為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供依據(jù)。

1　藥品、試劑與儀器

骨痹止痛液(批號(hào)20140305，20140421，20140513)，由甘肅省中醫(yī)院提供。烏頭堿對(duì)照品(批號(hào)MUST-15013008，純度>98%)，購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司；甲醇為色譜純，購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠；水為娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。2695型高效液相色譜儀(配有1525四元泵，2487 紫外檢測(cè)器,717自動(dòng)進(jìn)樣器)，美國(guó)Waters公司產(chǎn)品；FA1004電子分析天平，上海良平儀器儀表有限公司產(chǎn)品；HWS-24電熱恒溫水浴鍋，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

按照參考文獻(xiàn)[4]。色譜柱為Waters Symmetry Shield C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-5 mL/L三乙胺溶液(70∶30)；檢測(cè)波長(zhǎng)235 nm，流速1.0 mL/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量20 μL。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱定烏頭堿對(duì)照品1.10 mg,置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；準(zhǔn)確量取4.00 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得0.008 8 g/L的對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

準(zhǔn)確量取骨痹止痛液35 mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，并定容?0 mL量瓶中，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性對(duì)照溶液的制備

取處方中除制川烏和制草烏外的其余藥材，按骨痹止痛液的工藝條件滲漉制備陰性樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備缺制川烏和制草烏的陰性對(duì)照溶液。按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，供試品色譜中烏頭堿與其他組分達(dá)到分離，缺制川烏和制草烏的陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5線性關(guān)系考察

取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液2，4，6，8，10，20 μL，按 2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=1.00×106X-6.49×103,r=0.999 6。結(jié)果表明：烏頭堿在0.017 6～0.176 0 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6精密度試驗(yàn)

精密量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量20 μL，測(cè)定烏頭堿的峰面積值，計(jì)算得RSD值為1.24%。結(jié)果表明：該方法精密度良好。

A.烏頭堿對(duì)照品；B.供試品；C.缺制川烏和制草烏陰性對(duì)照品

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次骨痹止痛液6份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)得烏頭堿的平均含量為1.96 mg/L，RSD值為1.63%。結(jié)果表明：該方法重復(fù)性良好。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.3項(xiàng)下供試品溶液，室溫放置，分別在0，2，4，6，8，10，12，24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果：烏頭堿峰面積的RSD值為1.58%。結(jié)果表明：24 h內(nèi)供試品溶液基本穩(wěn)定。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量為1.97 mg/L的骨痹止痛液(批號(hào)20140305)6份，每份20 mL，置于蒸發(fā)皿中，分別精密加入2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液4.50 mL，按2.3項(xiàng)下方法制備加樣供試品溶液，精密量取20 μL進(jìn)樣分析，記錄色譜峰峰面積，計(jì)算其回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　骨痹止痛液中烏頭堿加樣回收率試驗(yàn)

2.10樣品限量檢查

取3批骨痹止痛液，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行限量檢查，結(jié)果見(jiàn)表2。此3批骨痹止痛液中的烏頭堿含量與文獻(xiàn)報(bào)道[5-9]的臨床用藥中烏頭堿限量檢查結(jié)果相近。

表2　骨痹止痛液中烏頭堿限量檢查結(jié)果

3　討　論

制川烏和制草烏是臨床常用藥，常用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)痛、腰腿疼、神經(jīng)痛等[10-11]，但其所含雙酯型生物堿毒性劇烈，且治療量和中毒量相近，主要對(duì)神經(jīng)和心血管系統(tǒng)造成嚴(yán)重傷害，在臨床上用之不慎會(huì)引起中毒[12-14]。烏頭堿是其主要毒性成分，口服烏頭堿0.2 mg即可引起中毒。鑒于市場(chǎng)上制川烏和制草烏飲片有較為嚴(yán)重的充偽和摻偽現(xiàn)象，為保證骨痹止痛液的安全有效性，有必要對(duì)烏頭堿的含量進(jìn)行限量檢查。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[15]，含烏頭堿酒劑與水煎劑、其他非酒劑對(duì)比，幾乎沒(méi)有水煎等降毒過(guò)程，而且乙醇對(duì)脂溶性有毒烏頭堿的成分提取以及對(duì)體內(nèi)吸收程度和速度均起促進(jìn)作用，增大其生物利用度和最高血藥濃度，更容易引起中毒；因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立RP-HPLC法測(cè)定該制劑中烏頭堿的含量，為制定其烏頭堿的限量標(biāo)準(zhǔn)提供試驗(yàn)基礎(chǔ)，從而保證骨痹止痛液臨床用藥的安全。

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(編輯陶珠)

2016-01-28；修回日期：2016-04-08

1001-6910(2016)07-0065-03

R284

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2016.07.31

李喜香(1968-)，女(漢族)，甘肅秦安人，主任中藥師，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥制劑工藝研究。

甘肅省中醫(yī)藥管理局科研項(xiàng)目(GZK-2012-45)

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