不同化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)在皮質(zhì)醇檢測(cè)中的性能評(píng)價(jià)與比較*

陳　翊，李穎能，陳煥輝，林　濤，湯勇才

(1.廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心中心實(shí)驗(yàn)室　510120；2.廣東省廣州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　510180)

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不同化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)在皮質(zhì)醇檢測(cè)中的性能評(píng)價(jià)與比較*

陳翊1，李穎能2，陳煥輝1，林濤1，湯勇才2

(1.廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心中心實(shí)驗(yàn)室510120；2.廣東省廣州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科510180)

摘要:目的比較貝克曼Access 2 Immunoassay System化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)及羅氏COBAS E 411電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇的分析性能與檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性。方法按照ISO15189中方法評(píng)估貝克曼及羅氏分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇檢測(cè)的精密度、功能靈敏度、參考范圍、方法學(xué)、陽性符合率、陰性符合率。結(jié)果貝克曼與羅氏分析系統(tǒng)在皮質(zhì)醇檢測(cè)中精密度良好，功能靈敏度符合各自廠商設(shè)定的臨床檢測(cè)的下限，實(shí)驗(yàn)室自建參考范圍后，將兩分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇的測(cè)定值進(jìn)行線性回歸分析，二者間相關(guān)性良好，線性回歸系數(shù)r2=0.977，陽性符合率、陰性符合率均為100%。結(jié)論兩分析系統(tǒng)對(duì)于皮質(zhì)醇的分析性能優(yōu)異，均可滿足臨床檢驗(yàn)需求。經(jīng)過方法學(xué)比對(duì)，二者相關(guān)性良好，能夠通過回歸方程對(duì)二者間測(cè)定值進(jìn)行引證。

關(guān)鍵詞:皮質(zhì)醇；化學(xué)發(fā)光免疫分析；電化學(xué)發(fā)光免疫分析；性能評(píng)價(jià)

近年來，化學(xué)發(fā)光免疫法越來越多地被應(yīng)用于人體激素的測(cè)定，作為一種靈敏度非常高的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)和高特異性免疫反應(yīng)技術(shù)相結(jié)合的新型標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，該方法有著廣闊的應(yīng)用前景。但在實(shí)際臨床檢測(cè)的應(yīng)用中，不同檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果存在差異。如何評(píng)估化學(xué)發(fā)光免疫法的測(cè)定結(jié)果，推動(dòng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化，并達(dá)到實(shí)驗(yàn)室間的檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)，尚需進(jìn)一步研究。本課題組以皮質(zhì)醇為對(duì)象，通過對(duì)現(xiàn)階段化學(xué)發(fā)光免疫法應(yīng)用最廣泛的2種方法(化學(xué)發(fā)光免疫法和電化學(xué)發(fā)光免疫法)進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)，探討化學(xué)發(fā)光免疫法不同檢測(cè)儀器間結(jié)果的相關(guān)性。皮質(zhì)醇是體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)中的一種高豐度甾類化合物，其主要用于血壓維持、抗過敏反應(yīng)，以及糖類、蛋白質(zhì)、脂肪的新陳代謝調(diào)節(jié)等[1]。皮質(zhì)醇是一種主要由腎上腺皮質(zhì)合成和分泌的糖皮質(zhì)激素，在促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的作用下，腎上腺增加對(duì)皮質(zhì)醇的分泌，而高濃度的皮質(zhì)醇會(huì)抑制ACTH的合成，從而使皮質(zhì)醇濃度維持恒定[2]。因此，血液中皮質(zhì)醇水平常用于診斷腎上腺相關(guān)疾病，如阿狄森癥和庫(kù)欣綜合征等[3-4]。臨床上皮質(zhì)醇的檢驗(yàn)主要通過免疫法進(jìn)行。其中，化學(xué)發(fā)光免疫法和電化學(xué)發(fā)光免疫法同時(shí)具備化學(xué)發(fā)光法靈敏度及免疫法高特異性的優(yōu)點(diǎn)，在皮質(zhì)醇的定量測(cè)定中應(yīng)用廣泛。本文按照臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的EP12-A2文件及ISO15189醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的要求[5-6]，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室貝克曼Access 2 Immunoassay System(化學(xué)發(fā)光免疫法)與羅氏COBAS E 411(電化學(xué)發(fā)光免疫法)檢測(cè)系統(tǒng)的皮質(zhì)醇檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，并對(duì)二者結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料樣本來自廣州市第一人民醫(yī)院2015年3～6月門診、住院患者血清，年齡5～73歲。血清樣本按照相應(yīng)檢測(cè)需求進(jìn)行收集，樣本無溶血與脂血，待測(cè)血清樣本保存于-20 ℃。

1.2儀器與試劑貝克曼Access 2 Immunoassay System分析儀(化學(xué)發(fā)光免疫法)，羅氏COBAS E 411分析儀(電化學(xué)發(fā)光免疫法)，皮質(zhì)醇檢測(cè)試劑盒、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均為各自儀器配套試劑。

1.3方法

1.3.1樣本檢測(cè)所有測(cè)試均嚴(yán)格按照相應(yīng)儀器和試劑操作規(guī)程進(jìn)行，保證測(cè)試時(shí)儀器校準(zhǔn)合格，質(zhì)控在控。

1.3.2精密度試驗(yàn)收集臨床皮質(zhì)醇樣本，配制成皮質(zhì)醇高、低值兩濃度樣本。將兩樣本當(dāng)日內(nèi)各重復(fù)檢測(cè)20次，計(jì)算測(cè)定值結(jié)果均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)(CV)，得出批內(nèi)重復(fù)性。將兩樣本每天測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定20 d，計(jì)算測(cè)定值結(jié)果均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差及CV，得出批間重復(fù)性。

1.3.3功能靈敏度驗(yàn)證以空白樣本對(duì)低值質(zhì)控進(jìn)行稀釋，稀釋最終濃度為各自宣稱檢出限附近(貝克曼0.4 μg/dL和羅氏0.018 μg/dL)。利用兩分析系統(tǒng)分別對(duì)上述濃度皮質(zhì)醇樣本進(jìn)行測(cè)定，每天測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定10 d，計(jì)算各分析系統(tǒng)對(duì)上述樣本測(cè)定結(jié)果的均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差及CV。

1.3.4參考范圍建立選取120例健康人血清臨床樣本(早晨10：00前取血)，分別以貝克曼和羅氏免疫分析儀進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行參考范圍建立。

1.3.5方法學(xué)比對(duì)選取40例能夠均勻覆蓋皮質(zhì)醇檢測(cè)范圍的臨床樣本，利用貝克曼Access 2 Immunoassay System分析系統(tǒng)和羅氏COBAS E 411分析系統(tǒng)分別檢測(cè)上述樣本，并對(duì)兩分析系統(tǒng)的測(cè)定值相關(guān)性進(jìn)行比對(duì)分析。

1.3.6陰性符合率與陽性符合率結(jié)合實(shí)驗(yàn)室自建的參考范圍及40例臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)兩分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇檢測(cè)的陰性符合率與陽性符合率。

2結(jié)果

2.1精密度評(píng)價(jià)貝克曼和羅氏分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇測(cè)定的精密度通過批內(nèi)精密度和批間精密度呈現(xiàn)，見表1。貝克曼和羅氏分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇測(cè)定的批間、批內(nèi)CV均小于10%，具備良好的精密度，符合臨床檢驗(yàn)要求。

表1　　貝克曼和羅氏分析系統(tǒng)檢測(cè)皮質(zhì)醇的精密度

2.2功能靈敏度評(píng)估本文測(cè)定貝克曼與羅氏分析系統(tǒng)在皮質(zhì)醇測(cè)定中的功能靈敏度，用于評(píng)估二者功能靈敏度的差異。利用皮質(zhì)醇低值質(zhì)控品分別配制檢出限(貝克曼0.4 μg/dL和羅氏0.018 μg/dL)附近的濃度樣本0.50 μg/dL和0.05 μg/dL，以兩分析系統(tǒng)每日分別測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定10 d。貝克曼分析系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果為(0.55±0.07)μg/dL，CV為12.9%，羅氏分析系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果為(0.052±0.009)μg/dL，CV為17.3%，兩分析系統(tǒng)對(duì)于各自宣稱皮質(zhì)醇檢出限附近濃度的樣本檢測(cè)結(jié)果CV<20%，表明二者宣稱檢測(cè)限能夠作為臨床檢測(cè)的下限。

2.3參考范圍確認(rèn)兩分析系統(tǒng)各自的宣稱參考范圍分別為6.7～22.6 μg/dL(貝克曼)和6.2～19.4 μg/dL(羅氏)，考慮到本實(shí)驗(yàn)室所處地區(qū)、人群及操作差異，應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部參考范圍以輔助臨床判斷。根據(jù)C28-A3文件[7]，分別采用兩分析系統(tǒng)對(duì)120例健康人血清樣本(早晨10：00前取血)進(jìn)行皮質(zhì)醇測(cè)定，評(píng)估本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各檢測(cè)系統(tǒng)的參考范圍，貝克曼與羅氏分析系統(tǒng)說明書建議的參考范圍分別為6.7～22.6、6.2～19.4 μg/dL，本實(shí)驗(yàn)室自建參考范圍分別為6.5～21.3、7.1～24.4 μg/dL。

2.4方法學(xué)比對(duì)利用兩分析系統(tǒng)對(duì)均勻分布于檢測(cè)區(qū)間的40例臨床血清樣本進(jìn)行測(cè)試，將測(cè)定值結(jié)果進(jìn)行線性回歸，如圖1所示。兩分析系統(tǒng)比對(duì)回歸方程為Y=1.08X+1.84(其中X為貝克曼測(cè)定值結(jié)果，Y為羅氏測(cè)定值結(jié)果)，線性回歸系數(shù)r2=0.977。上述結(jié)果表明，二系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果存在偏差(斜率k=1.08)，但二者相關(guān)性良好。利用二分析系統(tǒng)進(jìn)行臨床判斷時(shí)，應(yīng)考慮到二者間測(cè)定值差異。

圖1　　　　　貝克曼與羅氏分析系統(tǒng)測(cè)定皮質(zhì)醇結(jié)果的線性回歸分析

2.5陽性符合率和陰性符合率按照本實(shí)驗(yàn)室自建的臨床參考范圍，對(duì)上述40例臨床樣本的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行陽性符合率和陰性符合率分析，對(duì)比分析二者的檢測(cè)結(jié)果，確認(rèn)其陰性符合率和陽性符合率均為100%。兩分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇的檢測(cè)結(jié)果表明，兩者對(duì)臨床判斷的一致性較好。

3討論

化學(xué)發(fā)光免疫法在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用日益增多，建立相應(yīng)的評(píng)估方法，推動(dòng)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化，使檢驗(yàn)結(jié)果更具溯源性，有著重要的意義。另一方面，根據(jù)CLSI的EP12-A2文件及ISO15189醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的規(guī)定，臨床檢驗(yàn)科室應(yīng)對(duì)分析試劑及配套檢測(cè)儀器的主要分析性能(如精密度、功能靈敏度、方法學(xué)、符合率等)進(jìn)行評(píng)估，以確保測(cè)定值的準(zhǔn)確性。

化學(xué)發(fā)光免疫法和電化學(xué)發(fā)光免疫法結(jié)合發(fā)光系統(tǒng)高靈敏檢測(cè)以及免疫法高特異性的優(yōu)點(diǎn)，易于實(shí)現(xiàn)高通量、自動(dòng)化分析，且具備優(yōu)異的分析性能，受到臨床檢驗(yàn)科室的青睞。但在實(shí)際工作中，實(shí)驗(yàn)室人員發(fā)現(xiàn)兩者的測(cè)定結(jié)果會(huì)有差異，如何對(duì)結(jié)果進(jìn)行解讀，是本次試驗(yàn)的出發(fā)點(diǎn)。

本文對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)貝克曼Access2ImmunoassaySystem化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)和羅氏COBASE411電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)的皮質(zhì)醇定量檢測(cè)分析性能進(jìn)行評(píng)估。由于發(fā)光原理的區(qū)別，這兩套檢測(cè)系統(tǒng)在試劑、儀器設(shè)計(jì)方面均存在顯著區(qū)別，因而二者測(cè)定值結(jié)果可能存在系統(tǒng)性差異。試驗(yàn)結(jié)果表明，兩分析系統(tǒng)均具備良好的精密度，其批間與批內(nèi)CV均小于10%，符合CLSI的EP5-A2標(biāo)準(zhǔn)[8]。兩分析系統(tǒng)的功能靈敏度均滿足皮質(zhì)醇臨床檢測(cè)的要求。為了進(jìn)一步比較兩分析系統(tǒng)間測(cè)定值準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室自建參考范圍，并對(duì)40例臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的方法學(xué)比對(duì)，以及陽性符合率、陰性符合率分析，數(shù)據(jù)表明兩分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性好，線性相關(guān)系數(shù)r2=0.977，測(cè)定值略有偏差(線

性回歸方程Y=1.08X+1.84，其中X與Y分別代表貝克曼與羅氏皮質(zhì)醇測(cè)定值結(jié)果)，但此測(cè)定值偏差并不影響臨床判斷，二者的陽性符合率、陰性符合率均為100%。

綜上所述，本次研究遵循ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可要求，建立了化學(xué)發(fā)光免疫法不同檢測(cè)系統(tǒng)間的性能評(píng)價(jià)方法，應(yīng)用貝克曼和羅氏化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)對(duì)皮質(zhì)醇的分析性能進(jìn)行評(píng)估，兩分析系統(tǒng)均滿足臨床檢驗(yàn)性能要求，并且系統(tǒng)間的測(cè)值相關(guān)性良好，但相互引證時(shí)需考慮二者間存在的系統(tǒng)性測(cè)定值偏差，在臨床判斷時(shí)需結(jié)合各自參考范圍進(jìn)行分析。

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* 基金項(xiàng)目：廣東省廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014Y2-00031)。

作者簡(jiǎn)介：陳翊，女，副主任檢驗(yàn)技師，主要從事臨床檢驗(yàn)研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.019

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)14-1949-03

(收稿日期：2016-01-12修回日期：2016-03-18)

Performance evaluation and comparison of different chemiluminescence immunoassay systems in detection of cortisol*

CHENYi1,LIYingneng2,CHENHuanhui1,LINTao1,TANGYongcai2

(1.CentralLaboratory,GuangzhouMunicipalWomenandChildren′sMedicalCenter,Guangzhou,Guangdong510120,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,GuangzhouMunicipalFirstPeople′sHospital,Guangzhou,Guangdong510180,China)

Abstract:ObjectiveTo compare the analytical performance and results correlation of cortisol detection by the Beckman Access 2 Immunoassay System chemiluminescence system and the Roche COBAS E 411 electrochemical luminescence system.MethodsThe precision,functional sensitivity,reference range,positive coincidence rate and negative coincidence rate of both Beckman Access 2 Immunoassay System and Roche COBAS E 411 systems for detecting cortisol were evaluated according to the method of ISO15198.ResultsBoth Beckman Access 2 Immunoassay System and Roche COBAS E 411 system exhibited better precision,the functional sensitivity conformed to the lower limit of clinical detection set by the manufacturers,after establishing the reference range of cortisol by the laboratory,the cortisol values detected by these two systems were performed the linear regression analysis,the results indicated that the correlation between them was good,the linear regression coefficient r2=0.977,and the positive and negative coincidence rates were 100%.ConclusionThe two analytical systems have excellent performance for cortisol,which all meet the clinical detection requirements.The methodological comparison shows good correlation between them,and the detection results could be cited between these two systems by the regression equation.

Key words:cortisol;chemoluminescence;electrochemical luminescence;performance evaluation