糖尿病ZDF大鼠早期微血管并發(fā)癥的生化指標(biāo)及病理組織學(xué)變化

陳小真，戎亦驪，馬全鑫，黃俊杰，朱科燕，陳　誠(chéng)，施佳君，李園園，陳民利

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心/比較醫(yī)學(xué)研究中心，杭州310053)

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糖尿病ZDF大鼠早期微血管并發(fā)癥的生化指標(biāo)及病理組織學(xué)變化

陳小真，戎亦驪，馬全鑫，黃俊杰，朱科燕，陳誠(chéng)，施佳君，李園園，陳民利

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心/比較醫(yī)學(xué)研究中心，杭州310053)

目的觀察自發(fā)性2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)ZDF大鼠早期微血管并發(fā)癥的生化指標(biāo)及病理變化。 方法取6只7～8周齡的雄性ZDF大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，開始飼喂Purina#5008飼料，另取8只同周齡的雄性ZL大鼠為正常對(duì)照組，飼喂普通飼料。在12、14、16周齡時(shí)檢測(cè)血糖(GLU)、血清膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)、糖化血紅蛋白(HbA1c)，16周齡時(shí)處死，并對(duì)眼球、腎、心、腦組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。 結(jié)果ZDF大鼠GLU、CHOL、TG、HDL-C、LDL-C、hsCRP水平逐漸升高。16周齡時(shí)，ZDF大鼠RBP、mALB、TRF含量顯著高于ZL大鼠(P<0.01)。腎小球、視網(wǎng)膜、心肌、腦部出現(xiàn)不同程度的微血管病變，腎小球部分血管基膜增厚，視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞增多，血管壁增厚，心臟出現(xiàn)少量心肌纖維化，海馬區(qū)神經(jīng)元異常。 結(jié)論ZDF大鼠在16周齡時(shí)出現(xiàn)T2DM早期微血管并發(fā)癥，其中T2DM早期腎病、視網(wǎng)膜病變、心肌病變較為突出，腦神經(jīng)元輕微病變。

微血管；2型糖尿??；病理；ZDF大鼠

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)是一種代謝紊亂性疾病，可引發(fā)多種微血管和大血管并發(fā)癥，并伴有冠心病、高血壓、腦血管病、腎病、眼部并發(fā)癥、神經(jīng)病變、脂血癥、脂肪肝等并發(fā)癥，其中微血管并發(fā)癥包括糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)、糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)、糖尿病神經(jīng)病變及糖尿病心肌病等[1]。目前關(guān)于1型糖尿病微血管病變的研究較多，對(duì)T2DM微血管病變的研究較少。Zucker糖尿病肥胖大鼠(zucker diabetes fatty，ZDF)是從出現(xiàn)糖尿病表型的Zucker大鼠中篩選出來(lái)的，是一種新型的自發(fā)性T2DM模型[2]。在高脂飼喂后出現(xiàn)高血糖與高胰島素血癥，并伴有肥胖、脂質(zhì)紊亂及糖耐量異常等代謝綜合征[3]，與人類T2DM發(fā)病進(jìn)程相似，因此本文選取ZDF大鼠為研究對(duì)象，以Zucker瘦型大鼠(zucker lean，ZL)作為對(duì)照，觀察ZDF大鼠糖尿病早期微血管并發(fā)癥的生化指標(biāo)及相關(guān)組織的病理改變，并探討其發(fā)病特點(diǎn)。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境

SPF級(jí)7～8周齡雄性ZDF大鼠6只及同周齡的雄性ZL大鼠8只，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供【SCXK(京)2012-X001】；飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心屏障實(shí)驗(yàn)室【SYXK(浙)2013-184】，環(huán)境溫度：(22±2)℃，相對(duì)濕度：50%～60%，光照：12 h/12 h明暗交替，噪聲<50 dB；在IVC籠內(nèi)飼養(yǎng)，自由飲食，并在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的“3R”原則給予人道主義關(guān)懷。

Purina#5008營(yíng)養(yǎng)組分：蛋白質(zhì)23.75%、總脂肪7.55%、粗纖維4.00%、消化能14.6 KJ/kg。

1.2試劑與儀器

Advantage血糖儀(德國(guó)羅氏公司)，Bouin氏固定液(苦味酸飽和溶液，冰醋酸，甲醛)，Premier Hb9210型糖化血紅蛋白分析儀(愛(ài)爾蘭Trinity Biotech公司)，7020 型全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司)，大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒，大鼠視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒，大鼠尿微量白蛋白(mALB)試劑盒，超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)ELISA試劑盒，購(gòu)自杭州誠(chéng)維生物科技有限公司，Thermo光譜掃描多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)，ST5010染色機(jī) (德國(guó)Leica公司)，80I相差顯微鏡(日本Nikon公司)。Masson試劑盒，PAS試劑盒，購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1動(dòng)物分組：

ZDF大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察3 d后開始飼喂Purina#5008飼料，作為模型組(Model group)。ZL大鼠飼喂普通飼料，作為正常對(duì)照組(Control group)，并在8周時(shí)處死動(dòng)物。

1.3.2血液生化指標(biāo)測(cè)定

動(dòng)物在禁食12 h后，分別在8、10周齡時(shí)，尾尖取血，血糖儀測(cè)定GLU；在12、14、16周齡時(shí)，尾靜脈取血0.5 mL，3000 r/min離心10 min，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)GLU、CHOL、TG、HDL-C、LDL-C。取全血200 μL，用糖化血紅蛋白分析儀測(cè)定HbA1c。

16周齡時(shí)，收集大鼠24 h尿液，利用ELISA試劑盒檢測(cè)尿液中TRF、mALB的含量；同時(shí)用ELISA試劑盒檢測(cè)大鼠血清中hsCRP、RBP的含量。

1.3.3病理組織學(xué)觀察

大鼠16周齡時(shí)，解剖取心、腎、腦、眼球，分別進(jìn)行組織固定及染色。取心臟組織進(jìn)行馬松(Masson)染色，腦組織切片進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色，腎臟組織切片進(jìn)行糖原(PAS)染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病理變化。

取各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的左眼球，在Bouin氏固定液固定24 h后，以視乳頭為中心，垂直于虹膜切開，固定、脫水、石蠟包埋、切片，進(jìn)行HE染色，觀察視網(wǎng)膜厚度。參照潘琳[4]的方法，取各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的右眼球，通過(guò)視網(wǎng)膜毛細(xì)血管消化鋪片，進(jìn)行PAS染色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.1一般情況與體重變化

正常對(duì)照組ZL大鼠生長(zhǎng)良好，活動(dòng)靈活，毛色健康，無(wú)其他癥狀；ZDF大鼠采食量、飲水量增加，毛色無(wú)光澤、枯黃，尿量及排泄物增多。ZDF大鼠體重顯著高于ZL大鼠(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)期間，ZL大鼠體重持續(xù)增加，ZDF大鼠在8～10周齡快速增長(zhǎng)，而從12周齡起開始緩慢增長(zhǎng)。

2.2空腹血糖的變化及HbA1c水平

ZDF大鼠在12周齡時(shí)空腹血糖顯著上升，顯著高于ZL大鼠(P<0.05，P<0.01)，14周齡起血糖增長(zhǎng)緩慢(圖1)。

在16周齡時(shí)，ZDF大鼠HbA1c水平顯著高于ZL大鼠(P<0.01)(圖2)。

注：與正常對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01。圖1　ZDF大鼠體重和空腹血糖的變化Note： Compared with the control group, *P<0.05, **P<0.01.Fig.1　Changes of weight and GLU in ZDF rats

注：與正常對(duì)照組相比，**P<0.01。圖2　ZDF大鼠HbA1c水平Note： Compared with the control group, **P<0.01.Fig.2　Level of HbA1c in ZDF rats

2.3血脂和血清hsCRP變化

12、14、16周齡時(shí)，ZDF大鼠血清CHOL、TG、HDL-C均顯著高于ZL大鼠(P<0.01)，LDL-C在14、16周齡時(shí)顯著高于ZL大鼠(P<0.01)(圖3)。

16周齡時(shí)，ZDF大鼠血清hsCRP顯著高于ZL大鼠(P<0.01)(圖4)。

2.4血清RBP和尿液mALB、TRF的含量變化

16周齡時(shí)，ZDF大鼠血清RBP和尿液中mALB、TRF含量顯著高于ZL大鼠(P<0.01)(圖5)。

2.5病理組織學(xué)變化

2.5.1視網(wǎng)膜病變

眼球石蠟切片HE染色顯示ZL大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)、外界膜排列整齊，神經(jīng)纖維層排列緊密，血管壁未見(jiàn)增厚；ZDF大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層局部疏松，血管壁增厚，各層細(xì)胞排列紊亂，同時(shí)，可見(jiàn)部分脈絡(luò)膜層血管壁輕度增厚(圖6)。在NDP.view2軟件中，每只大鼠各選取5個(gè)點(diǎn)，測(cè)量從內(nèi)界膜到視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞層的厚度，計(jì)算各組視網(wǎng)膜平均厚度，發(fā)現(xiàn)ZDF大鼠視網(wǎng)膜厚度較ZL大鼠增厚，存在顯著性差異(P<0.01)(圖7)。

視網(wǎng)膜毛細(xì)血管消化鋪片后，進(jìn)行PAS染色，結(jié)果顯示ZL大鼠視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞分布規(guī)則，未發(fā)現(xiàn)增生或凋亡；ZDF大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞增多且部分增生，細(xì)胞核大小不一，周細(xì)胞減少(圖6)。

注：與正常對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01。圖3　ZDF大鼠血脂變化Note： Compared with the control group, *P<0.05, **P<0.01.Fig.3　Changes of lipid in ZDF rats

注：與正常對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01。圖4　ZDF大鼠血清hsCRP變化Note： Compared with the control group, *P<0.05, **P<0.01.Fig.4　Changes of serum hsCRP in ZDF rats

2.5.2腎臟病變

腎臟石蠟切片經(jīng)HE染色顯示，ZL大鼠腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)完整，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維變化；ZDF大鼠腎小球肥大，腎小球基膜增厚，系膜細(xì)胞增生，分布彌散，擠壓毛細(xì)血管。

PAS染色顯示ZL大鼠腎小球無(wú)明顯病理改變，結(jié)構(gòu)完整，系膜區(qū)未見(jiàn)異常；ZDF大鼠腎小球體積略有增大，系膜輕度增生，系膜區(qū)增寬，部分毛細(xì)血管基膜增厚，腎小球血漿蛋白出現(xiàn)部分玻璃樣變性(圖8)。

2.5.3心肌病變

由HE染色可見(jiàn)ZL大鼠心肌細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)明顯異常；ZDF大鼠心肌細(xì)胞肥大，排列紊亂，細(xì)胞核大小不規(guī)則，成纖維細(xì)胞增多，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。

Masson染色顯示ZL大鼠心肌間質(zhì)和血管周圍存在少量膠原纖維，排列整齊，細(xì)胞間隙均勻；ZDF大鼠心肌間質(zhì)出現(xiàn)少量心肌纖維化，膠原纖維沉積，排列紊亂，細(xì)胞間隙擴(kuò)大(圖9)。

2.5.4腦部病變

腦組織切片，HE染色顯示ZL大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元分布整齊，排列規(guī)則，海馬齒狀回顆粒層細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)核固縮等明顯變化；ZDF大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列出現(xiàn)紊亂，海馬齒狀回顆粒層部分神經(jīng)元異常，排列紊亂，細(xì)胞核變小(圖10)。

3　討論

DM發(fā)病率逐年上升，DM并發(fā)癥的不斷惡化是其致殘和致死的主要原因，已成為人類健康的重大威脅，預(yù)計(jì)到2030年，糖尿病患者將增至3.8億，其中T2DM占總數(shù)的90%以上[5]。近來(lái)Gupta[6]等研究發(fā)現(xiàn)在無(wú)癥狀的T2DM患者中，微血管病變的發(fā)生率亦高達(dá)為32.55%。微血管并發(fā)癥主要表現(xiàn)在視網(wǎng)膜、腎、心肌、神經(jīng)組織及足趾等部位，使患者深受病痛折磨。

注：與正常對(duì)照組相比，**P<0.01。圖5　ZDF大鼠血清RBP和尿液mALB、TRF的變化Note： Compared with the control group, **P<0.01.Fig.5　Changes of serum RBP, urine mALB and TRF in ZDF rats

注：A：正常對(duì)照組，HE染色；B：模型組，HE染色；標(biāo)尺=100 μm；C：正常對(duì)照組，消化鋪片PAS染色；D：模型組，消化鋪片PAS染色；標(biāo)尺=50 μm。圖6　ZDF大鼠視網(wǎng)膜病理組織學(xué)變化Note： A: Control group, HE staining; B: Model group, HE staining; Bar=100 μm; C: Control group, PAS staining; D: Model group, PAS staining. Bar=50 μm.Fig.6　Histopathological of retinal staining in ZDF rats

目前，ZDF大鼠多用于T2DM及其并發(fā)癥的研究[7-8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：ZDF大鼠在16周齡時(shí)，體重、采食量、飲水量、尿量、血脂血糖、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、微量白蛋白(mALB)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)均顯著上升，且出現(xiàn)腎、視網(wǎng)膜、心臟、腦的病理組織學(xué)異常，具體表現(xiàn)為腎小球部分血管基膜增厚，系膜增生；視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞有所增多，血管壁增厚；心臟出現(xiàn)少量心肌纖維化，海馬區(qū)神經(jīng)元異常，說(shuō)明此時(shí)已出現(xiàn)T2DM早期微血管并發(fā)癥。

注：與正常對(duì)照組相比，**P<0.01。圖7　ZDF大鼠視網(wǎng)膜厚度變化Note： Compared with the control group, **P<0.01.Fig.7　Measurement of Retinal thickness in ZDF rats

注：A：正常對(duì)照組，HE染色；B：模型組，HE染色；標(biāo)尺=50 μm；C：正常對(duì)照組，PAS染色；D：模型組，PAS染色；標(biāo)尺=50 μm。圖8　ZDF大鼠腎臟PAS和HE染色Note： A: Control group, HE staining; B: Model group, HE staining; Bar=50 μm;C: Control group, PAS staining; D: Model group, PAS staining; Bar=50 μm.Fig.8　Histopathological of kidneyin ZDF rats by PAS staining and HE staining

注：A：正常對(duì)照組，HE染色；B：模型組，HE染色；標(biāo)尺=100 μm；C：正常對(duì)照組，Masson染色；D：模型組，Masson染色；標(biāo)尺=100 μm。圖9　ZDF大鼠心臟HE和Masson染色Note： A: Control group, HE staining; B: Model group, Masson staining; Bar=100 μm;C: Control group, HE staining; D: Model group, Masson staining; Bar=100 μm.Fig.9　Histopathological of myocardium in ZDF rats by HE staining and Masson staining

注：A：正常對(duì)照組，CA3區(qū)；B：模型組，CA3區(qū)；標(biāo)尺=100 μm；C：正常對(duì)照組，齒狀回；D：模型組，齒狀回；標(biāo)尺=100 μm。圖10　ZDF大鼠腦部切片HE染色Note： A: Control group,CA3; B: Model group,CA3;Bar=100 μm;C: Control group, dentate gyrus; D: Model group, dentate gyrus; Bar=100 μm.Fig.10　Histopathological of brain in ZDF rats by HE staining

微血管并發(fā)癥形成的過(guò)程大致為：微循環(huán)功能性改變，內(nèi)皮損傷，基膜增厚，紅細(xì)胞聚集，血小板粘附和聚集，最后是微血栓形成和微血管閉塞。微血管基底膜增厚是T2DM微血管病變的一種較早表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)表明，ZDF大鼠在飼喂4周后，空腹血糖顯著上升，HbA1c高于ZL大鼠。hsCRP是肝臟分泌的炎癥反應(yīng)蛋白，在T2DM發(fā)生、發(fā)展中起著非常重要的作用，在16周齡時(shí)，ZDF大鼠血清hsCRP含量顯著高于ZL大鼠，出現(xiàn)倍數(shù)增長(zhǎng)，說(shuō)明炎癥反應(yīng)加劇，提示hsCRP水平可以作為T2DM早期微血管并發(fā)癥的評(píng)估指標(biāo)，同時(shí)，ZDF大鼠血清CHOL、TG、HDL-C含量均顯著高于ZL大鼠，LDL-C含量較ZL大鼠有所升高，有可能是肝、腎功能異常所致，其結(jié)果有待進(jìn)一步研究。RBP、mALB、TRF是糖尿病早期腎損傷的敏感指標(biāo)，可靈敏地反映腎臟損害的程度，被認(rèn)為是T2DM早期微血管并發(fā)癥的重要指標(biāo)。RBP主要從腎臟排泄，當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)率降低，血中的RBP貯存，說(shuō)明腎功能受損；mALB是DN最早出現(xiàn)變化的生化指標(biāo)之一，是腎臟和心血管系統(tǒng)改變的早期標(biāo)志；TRF則是作為早期腎小管受損的標(biāo)志性微量蛋白。實(shí)驗(yàn)顯示ZDF大鼠在16周齡時(shí)RBP、mALB、TRF含量升高，推測(cè)腎臟細(xì)胞已處于增殖和肥大狀態(tài)、腎小球?yàn)V過(guò)障礙，腎功能已減退。

糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是T2DM常見(jiàn)微血管并發(fā)癥，已經(jīng)成為全球致盲的重要原因，研究表明，DR也是其他血管并發(fā)癥的早期常見(jiàn)表現(xiàn)[9]。早期病變首先引起微血管功能改變，使視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張，引起周細(xì)胞變性、基底膜增厚和內(nèi)皮細(xì)胞增生[10]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，ZDF大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層局部出現(xiàn)疏松，血管壁增厚，各層細(xì)胞排列紊亂，部分脈絡(luò)膜層血管壁輕度增厚；視網(wǎng)膜PAS染色顯示，內(nèi)皮細(xì)胞增多，部分增生，細(xì)胞核大小不一，周細(xì)胞減少，提示在機(jī)體炎癥反應(yīng)的促進(jìn)下，ZDF大鼠16周齡時(shí)已出現(xiàn)T2DM早期視網(wǎng)膜病變。

糖尿病腎病(DN)是由腎小球微血管病變而引起的蛋白排泄和濾過(guò)異常，已經(jīng)嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，發(fā)病率已上升至56%[11]，其主要病理變化為腎小球肥大、腎小球基底膜增厚、腎小管間質(zhì)纖維化，研究發(fā)現(xiàn)，SD大鼠DM造模4周后，動(dòng)物出現(xiàn)早期DN癥狀[12]。ZDF大鼠腎臟HE和PAS染色，發(fā)現(xiàn)部分腎小球部分血管基膜增厚，系膜增生，提示已經(jīng)有一定程度的腎功能障礙，出現(xiàn)T2DM早期DN微血管病變。

目前認(rèn)為T2DM大血管并發(fā)癥是導(dǎo)致DM心肌病的主要原因，但越來(lái)越多的研究表明T2DM微血管并發(fā)癥也能夠影響心臟的結(jié)構(gòu)與功能[13-14]。心肌病變與T2DM微血管病變密切相關(guān)，微循環(huán)功能障礙會(huì)引起心肌纖維化及心肌缺血[15]。心臟切片Masson染色顯示，ZDF大鼠出現(xiàn)少量心肌纖維化以及膠原沉積，提示可能在高糖刺激下，內(nèi)皮細(xì)胞紊亂，血管通透性增強(qiáng)，毛細(xì)血管增生、變厚，導(dǎo)致T2DM早期微血管并發(fā)癥出現(xiàn)心肌病變。

T2DM出現(xiàn)的認(rèn)知功能障礙是由多種因素參與的復(fù)雜病理過(guò)程，其中糖代謝紊亂會(huì)使氧化應(yīng)激增強(qiáng)，導(dǎo)致神經(jīng)退行性病變[16]，慢性持續(xù)的高血糖引起大腦神經(jīng)元損傷及凋亡，損傷微血管，進(jìn)一步誘發(fā)T2DM神經(jīng)病變。ZDF大鼠腦部HE染色顯示海馬區(qū)部分神經(jīng)元異常，推測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)與記憶能力可能已經(jīng)降低，出現(xiàn)早期的認(rèn)知功能障礙。

綜上所述，ZDF大鼠飼喂Purina#5008飼料后，在16周齡時(shí)出現(xiàn)T2DM微血管并發(fā)癥早期病變；在T2DM早期，腎臟、視網(wǎng)膜、心肌、大腦已經(jīng)出現(xiàn)不同程度的微血管損傷，與高糖以及高糖引起的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。對(duì)ZDF大鼠T2DM早期微血管并發(fā)癥的生化與病理組織學(xué)變化的研究有助于T2DM微血管并發(fā)癥的防治，對(duì)T2DM微血管并發(fā)癥的早期診斷具有重要意義。

[1]Chen L，Magliano DJ，Zimmet PZ. The worldwide epidemiology of type 2 diabetes mellitus-present and future perspectives[J].NatRevEndocrinol，2012，8(4):228-236.

[2]Davidson EP，Coppey LJ，Holmes A，etal. Characterization of Diabetic Neuropathy in the Zucker Diabetic Sprague-Dawley Rat: A New Animal Model for Type 2 Diabetes[J]. Journal of diabetes research，2014，DOI: 10.1155/2014/714273.

[3]奚賽飛，斯徐偉，朱科燕，等. ZDF(fa/fa) 大鼠的糖脂代謝特點(diǎn)與胰島素抵抗特性[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，2014，34(2):102-106.

[4]潘林. 實(shí)驗(yàn)病理學(xué)技術(shù)圖鑒 [M]. 王太齡. 北京: 科學(xué)出版社，2012: 506-510

[5]Forouhi NG，Wareham NJ: Epidemiology of diabetes[J]. Medicine (Abingdon) 2014，42(12):698-702.

[6]Gupta A，Gupta A，Singh T. Occurrence of complications in newly diagnosed type 2 diabetes patients: a hospital based study[J].Journal of the Indian Medical Association，2013，111(4):245-247.

[7]Topp BG，Atkinson LL，F(xiàn)inegood DT. Dynamics of insulin sensitivity，β-cell function，and β-cell mass during the development of diabetes in fa/fa rats[J]. Am JEndocrinolMetab，2007，293(6): E1730-E1735.

[8]Futamura M，Yao J，Li X，etal. Chronic treatment with a glucokinase activator delays the onset of hyperglycaemia and preserves beta cell mass in the Zucker diabetic fatty rat[J]. Diabetologia，2012，55(4): 1071-1080.

[9]Cheung N，Wong TY. Diabetic retinopathy and systemic vascular complications[J]. Prog Retin Eye Res，2008，27(2): 161-176.

[10]陳雨，朱曉華. 糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 國(guó)際眼科雜志， 2006，6(2): 433-435.

[11]Naqshbandi M，Harris SB，Esler JG，etal. Global complication rates of type 2 diabetes in Indigenous peoples: A comprehensive review[J]. Diabetes research and clinical practice，2008，82(1): 1-17.

[12]唐麗琴，劉圣，陳禮明，等. 復(fù)方黃連膠囊對(duì)糖尿病大鼠血脂及血液流變學(xué)的影[J]. 中國(guó)藥房，2007，18(15): 1129-1131.

[13]符麗娟，龐東渤. 糖基化終產(chǎn)物在糖尿病大鼠心肌病變中的作用[J]. 中國(guó)微循環(huán)，2009，13(4): 277-279.

[14]簡(jiǎn)春燕，吳鏗. 糖尿病性心肌病發(fā)病機(jī)制和治療的研究現(xiàn)狀[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志，2012，6(1): 164-167

[15]Boussageon R，Bejan-Angoulvant T，Saadatian-Elahi M，etal. Effect of intensive glucose lowering treatment on all-cause mortality，cardiovascular death，and microvascular events in type 2 diabetes: Meta-analysis of randomized controlled trials[J]. BMJ，2011，343.

[16]McCrimmon RJ，Ryan CM，F(xiàn)rier BM. Diabetes and cognitive dysfunction[J]. Lancet，2012，379(9833): 2291-2299.

Biochemical indicators and pathological changes of early microvascular complications in spontaneous type 2 diabetesmellitus (T2DM) ZDF rats

CHEN Xiao-zhen, RONG Yi-li, MA Quan-xin, HUANG Jun-jie,ZHU Ke-yan, CHEN cheng, SHI Jia-jun, LI Yuan-yuan, CHEN Min-li

(Laboratory Animal Research Center Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China)

ObjectiveTo investigate the biochemical indicators and pathological changes of early microvascular complications in spontaneous type 2 diabetes (T2DM) ZDF rats. Methods Six male ZDF rats aged around 7-8weeks were allowed to acclimate for 3days after feeding Purina#5008, eight male ZL rats at the same age were assigned to control group, fed with regular diets. At 12,14,16week, blood glucose (GLU), serum cholesterol (CHOL), triglyceride (TG), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C), low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C), high-sensitivity C-reactive protein (hsCRP), glycated hemoglobin (HbA1c) were detected. All rats were sacrificed at 16 week and pathological examinations were applied to eye, kidney, heart, brain tissues. Results GLU, CHOL, TG, HDL-C, LDL-C, hsCRP levels in ZDF rats were increased gradually (P<0.01). At 16 week, RBP, mALB, TRF contents in ZDF rats were significantly higher than ZL rats (P<0.01). Glomeruli, retina, myocardium, brain tissue showed varying degrees of microvascular disease, vascular basement membrane of the glomerular part appeared thicken, retinal endothelial cells were increased, vascular wall was thicken, and the heart showed a small amount of myocardial fibrosis, hippocampal neurons appeared abnormal. ConclusionsZDF rats showed early microvascular complications of T2DM at16 week, among which T2DM early nephropathy, retinopathy, cardiomyopathy become more prominent, cerebral neuron appeared slight lesion.

Microvessel; Type 2 diabetes mellitus; Pathology; ZDF rats

浙江省中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)項(xiàng)目(2015ZZ009)；比較醫(yī)學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(XTD201301)。

陳小真(1991-)，女，碩士生，研究方向：中藥藥理與比較醫(yī)學(xué)，E-mail：sochenxiaozhen@126.com。

陳民利(1963-)，女，教授、碩士，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，E-mail：cmli991@aliyun.com。

研究報(bào)告

R-332

A

1671-7856(2016) 05-0063-08

10.3969.j.issn.1671-7856. 2016.005.010

2016-02-01