五味子甲素在小鼠體內(nèi)組織的分布特點及其靶向療效研究

趙振宇，姜曉慧，王春梅，李　賀，孫晶波，陳建光，張成義

(北華大學 藥學院，吉林 吉林 132013)

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五味子甲素在小鼠體內(nèi)組織的分布特點及其靶向療效研究

趙振宇，姜曉慧，王春梅，李賀，孫晶波，陳建光，張成義

(北華大學 藥學院，吉林 吉林 132013)

[摘要]【目的】 建立小鼠組織中五味子甲素的質(zhì)量濃度測定方法，并研究五味子甲素在小鼠體內(nèi)的組織分布及其靶向治療效果。【方法】 將五味子甲素按25 mg/kg一次灌胃ICR雄性小鼠，于給藥后0.5，1，2，3和4 h分別取小鼠心、肝、腎、腦，用生理鹽水洗凈后制成0.25 g/mL組織勻漿，以睪丸酮為內(nèi)標物，采用高效液相色譜法(HPLC)測定五味子甲素在小鼠心、肝、腎、腦中的質(zhì)量濃度，并對HPLC方法的專屬性、回收率、精密度和穩(wěn)定性進行考察。依據(jù)五味子甲素在各組織中的峰值及各時間段的質(zhì)量濃度，確定其分布最高的組織，對質(zhì)量濃度分布最高的組織進行相關的藥理學評價?！窘Y果】 小鼠心、肝、腎、腦組織中五味子甲素質(zhì)量濃度為0.625～20 μg/mL時，其質(zhì)量濃度與五味子甲素/內(nèi)標峰面積線性關系良好(r≥0.999 0)。HPLC法的專屬性良好；日內(nèi)精密度為(3.15±0.82)%～(4.77±0.57)%，日間精密度為(5.51±1.82)%～(8.46±2.93)%；穩(wěn)定性試驗的RSD<10%；絕對回收率為(89.04±3.82)%～(91.37±3.77)%，相對回收率為(95.65±5.76)%～(106.07±8.29)%。五味子甲素1次灌胃給藥(劑量25 mg/kg)后在小鼠體內(nèi)心、肝、腎、腦組織中均有分布，給藥1 h后五味子甲素在小鼠心臟、腦組織中質(zhì)量濃度達到峰值，給藥2 h后在小鼠肝臟和腎臟中質(zhì)量濃度達到峰值。整個分布情況顯示，給藥后1，2，3 h五味子甲素在小鼠肝臟組織中的質(zhì)量濃度均高于其他組織，且達峰值時其質(zhì)量濃度也顯著高于心臟、腎臟、腦(P<0.05)；其次是腎臟，五味子甲素質(zhì)量濃度較低的為心臟和腦。五味子甲素對CCl4所致的小鼠急性肝損傷確有一定的保護作用?！窘Y論】 該測定方法簡便、快速、穩(wěn)定，可用于小鼠內(nèi)臟組織中五味子甲素質(zhì)量濃度的測定；小鼠灌胃給藥后五味子甲素在小鼠體內(nèi)心、肝、腎、腦組織中均有分布，且達峰值時以肝臟中質(zhì)量濃度最高，其次是腎臟，心臟與腦中較低；五味子甲素對CCl4所致的小鼠急性肝損傷有一定保護作用。

[關鍵詞]五味子甲素；小鼠組織；靶向療效

現(xiàn)代藥理學研究證實，五味子對肝臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)均具有較好的調(diào)節(jié)作用[1-4]，其降脂保肝作用對現(xiàn)代人多發(fā)的高血脂、脂肪肝等具有較好的防治效果。木脂素是五味子重要的活性成分，其中五味子甲素的藥效學活性較為明顯[5-6]。五味子甲素被吸收進入體內(nèi)后，經(jīng)由循環(huán)系統(tǒng)運送到各組織臟器，其組織分布特點同自身理化性質(zhì)、組織親和力等因素密切相關[7]。因此，了解五味子甲素的組織分布特點對相關新藥和保健品的開發(fā)具有重要意義。目前，國內(nèi)外關于五味子甲素的組織分布研究仍較為少見。本研究參考之前確證的五味子木脂素主要生物活性[8]，采用高效液相色譜法(HPLC)測定了五味子甲素在小鼠體內(nèi)主要臟器(心、肝、腎、腦)組織的分布情況，并對五味子甲素質(zhì)量濃度較高的靶器官進行相關生物活性研究，以期為五味子甲素的肝靶向制劑研究奠定基礎。

1材料與方法

1.1材料及儀器

健康清潔級ICR雄性小鼠，體質(zhì)量16～20 g/只，購于長春市億斯試驗動物技術有限責任公司，合格證號為SCXK(吉)：2011-0004；五味子甲素標準品，HPLC純度≥98%，購于四川維克奇生物科技有限公司；D-半乳糖、甲醇(色譜純)、聚乙二醇400、睪丸酮標準品均購于北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司；聯(lián)苯雙酯片，批號：1420073069，購于江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司。

日本島津 LC-20A 高效液相色譜儀(包括自動進樣器、LC solu-tion色譜工作站等)；瑞士METTLER-TOLEDO AL204電子天平；艾本德Eppendorf 5418R高速離心機；S10手提式高速分散器(寧波新芝生物科技有限公司)。

1.2五味子甲素的組織分布研究

1.2.1色譜條件Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；預柱：C18保護柱(4.0 mm×3.0 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(V(甲醇)∶V(水)=70∶30)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；進樣量20 μL；柱溫：40 ℃。

1.2.2五味子甲素標準溶液和睪丸酮內(nèi)標溶液的配制精密稱取五味子甲素標準品10 mg，置于20 mL的容量瓶中，甲醇溶解并定容，制得0.5 mg/mL的五味子甲素儲備液。精密吸取上述儲備液適量，用甲醇-水稀釋成質(zhì)量濃度為0.5，1.0，5.0，10.0，15.0和20.0 μg/mL的系列標準溶液，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

取睪丸酮0.5 g，置于50 mL容量瓶中，用甲醇-水配制成質(zhì)量濃度為10 mg/mL的內(nèi)標溶液。

1.2.3給藥方案及樣品的采集取ICR雄性小鼠15只，隨機分為5組，每組3只，給藥前禁食12 h，自由飲水。五味子甲素用體積分數(shù)20%聚乙二醇400水溶液分散，按照25 mg/kg劑量灌胃給藥，分別于給藥后0.5，1，2，3和4 h各處死一組小鼠，分離心、肝、腎、腦，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干后稱質(zhì)量，加入適量體積的生理鹽水制成0.25 g/mL的組織勻漿。

1.2.4組織樣品的處理取1 mL組織勻漿液置于2 mL離心管中，5 000 r/min離心10 min，取上清200 μL，置于2 mL離心管中，加入甲醇-水60 μL，渦旋30 s，加10 mg/mL睪丸酮40 μL，渦旋30 s，加入乙腈400 μL，渦旋2 min，14 000 r/min離心10 min，吸取上清液，待測。同法制備未給五味子甲素的小鼠空白組織勻漿液，備用。

1.2.5方法學考察(1)方法的專屬性：取五味子甲素和內(nèi)標混合標準溶液、空白肝組織勻漿液、空白肝組織勻漿液加一定質(zhì)量濃度混合標準溶液及給藥2 h后的肝組織勻漿液，分別按1.2.1節(jié)色譜條件進行HPLC分析。

(2)標準曲線的制備：取各空白組織勻漿200 μL，加入五味子甲素系列標準溶液各100 μL，配制成五味子甲素質(zhì)量濃度為0.625，1.25，2.5，5.0，10.0和20.0 μg/mL的樣品，按1.2.4節(jié)方法處理后進行HPLC分析。對五味子甲素/內(nèi)標峰面積(y)與五味子甲素質(zhì)量濃度(x)進行線性回歸，得到相應的回歸方程。

(3)回收率的測定：①絕對回收率。按1.2.2節(jié)五味子甲素標準溶液配制方法，配制五味子甲素在肝組織樣品中質(zhì)量濃度為60，300和600 μg/mL的質(zhì)量控制樣品，進行HPLC分析，記錄峰面積，與相同質(zhì)量濃度的五味子甲素標準品溶液直接進樣測定的峰面積相比即得絕對回收率。②相對回收率。將上述HPLC分析所得峰面積代入標準曲線，計算五味子甲素質(zhì)量濃度，即測定質(zhì)量濃度，其與實際質(zhì)量濃度的比值即為相對回收率。

(4)精密度的測定：在相同條件下日內(nèi)測定上述樣品的相對回收率5次，計算日內(nèi)精密度；連續(xù)測定7 d，計算日間精密度。

(5)穩(wěn)定性的測定：取上述五味子甲素60，300和600 μg/mL的質(zhì)量控制樣品，在室溫條件下放置24 h后進行HPLC分析，每種樣品重復5次，計算測定結果的RSD值。

1.3五味子甲素對小鼠CCl4所致急性肝損傷的影響

1.3.1動物分組與處理取ICR雄性小鼠20只適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為4組，分別為對照組、模型組、陽性藥物(聯(lián)苯雙酯)組和五味子甲素組。陽性藥物組小鼠灌胃給予聯(lián)苯雙酯片150 mg/kg；五味子甲素組小鼠灌胃給予五味子甲素分散溶液(質(zhì)量濃度0.6 mg/mL)，劑量為300 mg/kg；對照組和模型組均灌胃給予同等劑量的蒸餾水。各組小鼠每日灌胃1次，連續(xù)15 d，期間常規(guī)飼料喂養(yǎng)，自由飲水。末次給藥1 h后，模型組、陽性藥物組和五味子甲素組小鼠均腹腔注射體積分數(shù)10% CCl4橄欖油注射液2.0 mL/kg，對照組同法給予等劑量橄欖油，6 h后取樣，期間各組小鼠均禁食、不禁水。

1.3.2肝臟病理檢測小鼠造模6 h后斷髓處死，取出肝臟，在生理鹽水中將血液洗凈，置入體積分數(shù)10%甲醛溶液中固定后，0.01 mol/L PBS浸泡過夜，常規(guī)梯度酒精脫水，石蠟包埋，制成4 μm石蠟切片，HE染色，最后滴加中性樹膠封片，置于顯微鏡下觀察、拍照。

1.4統(tǒng)計學分析

2結果與分析

2.1五味子甲素的組織分布

2.1.1系統(tǒng)的專屬性分析由圖1可知，五味子甲素、內(nèi)標物睪丸酮峰形良好，無雜質(zhì)峰干擾，保留時間分別為16.4 min (五味子甲素)和11.0 min(內(nèi)標物睪丸酮)左右，與相鄰色譜峰的分離度均大于 1.5。

2.1.2標準曲線繪制五味子甲素在小鼠心、肝、腎、腦中分布的標準曲線見表1。由表1可知，五味子甲素質(zhì)量濃度在0.625～20 μg/mL時與五味子甲素/內(nèi)標峰面積線性關系良好。

2.1.3回收率試驗方法對60，300和600 μg/mL五味子甲素溶液的絕對回收率分別為(90.14±4.79)%，(91.37±3.77)%和(89.04±3.82)%；相對回收率分別為(106.07±8.29)%，(95.65±5.76)%和(100.35±4.62)%。結果表明，本試驗所用的五味子甲素質(zhì)量濃度測定方法具有良好的回收率。

2.1.4精密度及穩(wěn)定性試驗方法對60，300和600 μg/mL五味子甲素溶液的日內(nèi)精密度分別為(4.65±0.73)%，(4.77±0.57)%和(3.15±0.82)%，日間精密度分別為((8.46±2.93)%，5.59±1.69)%和(5.51±1.82)%，結果表明，該方法精密度良好。3個質(zhì)量濃度的五味子甲素樣品穩(wěn)定性測試RSD值均小于10%，表明五味子甲素在室溫條件下放置24 h表現(xiàn)穩(wěn)定。

圖 1　內(nèi)標睪丸酮和五味子甲素生物樣品的HPLC分析 A.內(nèi)標睪丸酮和五味子甲素混合標準溶液； B.小鼠空白肝組織；C.小鼠空白肝組織加內(nèi)標睪丸酮和 五味子甲素混合標準液；D.五味子甲素給藥2 h后小鼠肝組織樣品；a.內(nèi)標睪丸酮，b.五味子甲素 Fig.1　HPLC chromatogram of internal standard and Schisandrin A A.Standard solution of internal standard and Schisandrin A;B.Blank liver tissue of mice; C.Blank liver tissue of mice,internal standard,and Schisandrin A;D.Mice liver tissue samples 2 h after administration； a.Testosterone is internal standard,b.Schisandrin A表 1　五味子甲素在小鼠組織中分布的標準曲線Table 1　Distribution of Schisandrin A in mice tissues

注：y為甲素與內(nèi)標峰面積比，x為甲素質(zhì)量濃度(μg/mL)。

Note:yis the peak area ratio of Schisandrin A to dihydrotestosterone,xis the concentration of Schisandrin A.

2.1.5五味子甲素的組織分布在給藥后5個時間點分別處死一組小鼠，測定組織樣品五味子甲素/內(nèi)標峰面積，代入相應的標準曲線方程，計算得到樣品中五味子甲素的質(zhì)量濃度，結果如表2所示。

表 2　給藥后不同時間五味子甲素在小鼠各組織中的分布Table 2　Distribution of Schisandrin A in mice tissues at different times after administration

由表2可知，給藥1 h五味子甲素在小鼠心臟、腦組織中質(zhì)量濃度達到峰值，給藥2 h五味子甲素在肝臟和腎臟中質(zhì)量濃度達到峰值。五味子甲素在肝臟中質(zhì)量濃度峰值顯著高于心臟、腎臟、腦(P<0.05)；心臟、腎臟、腦中五味子甲素質(zhì)量濃度峰值差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2小鼠CCl4急性肝損傷病理形態(tài)學觀察

將制作好的小鼠CCl4急性肝損傷病理切片置于顯微鏡下觀察，結果(圖2)顯示，正常對照組小鼠肝小葉結構清晰，肝索呈放射狀且排列規(guī)則，匯管區(qū)和肝中央靜脈清晰可見，肝細胞形態(tài)呈球狀，核位于中央，細胞漿分染(圖2-A)；模型組小鼠肝小葉結構不佳，肝中央靜脈和肝竇擴張，肝細胞呈不同程度的胞漿淡染，排列紊亂，多數(shù)體積增大，有明顯的小灶性壞死，伴炎性細胞浸潤，壞死區(qū)周圍的肝細胞存在不同程度的嗜酸性變性(圖2-B)；聯(lián)苯雙酯陽性藥物組小鼠肝細胞結構基本正常(圖2-C)；五味子甲素給藥組小鼠肝細胞形態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，肝細胞嗜酸性變性明顯改善，中央靜脈周圍肝細胞形態(tài)基本恢復正常(圖2-D)。

圖 2　五味子甲素對CCl4所致小鼠肝損傷的保護效果 (HE，×100) A.正常對照組；B.模型組；C.聯(lián)苯雙酯陽性藥物組；D.五味子甲素組Fig.2　Protective effect of Schisandrin A on CCl4 induced liver injury in mice (HE，×100) A.Control group;B.Model group;C.Positive drug group (bifendate);D.Schisandrin A group

3討論

藥物吸收進入機體后會隨循環(huán)系統(tǒng)運送至各組織中，由于藥物的理化性質(zhì)以及體內(nèi)各組織的生理特征存在差異，造成藥物體內(nèi)分布存在差異性，進而會直接影響到藥物的治療效果、蓄積、毒副反應[9-10]，因此研究其組織分布特點，有利于相關制劑的開發(fā)和改進，使藥物最大限度地作用于靶器官。對天然藥物相關組分的組織分布進行研究，不僅具有上述作用，還能夠為天然藥物歸屬理論提供現(xiàn)代理論支持。五味子具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心的功效，對肝臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、免疫功能等均具有較好的藥效學活性[11]。對其主要活性成分木脂素中的甲素在哺乳動物組織的分布特征進行研究，有助于進一步闡明五味子歸經(jīng)的實質(zhì)，同時還可為相關藥品和保健品的開發(fā)提供理論參考。

組織中藥物的含量通常會由于質(zhì)量濃度過低而較難測出，本研究在預試驗基礎上，以HPLC法為主要手段，通過對各項檢測條件的優(yōu)化來滿足臟器中分布藥物含量的測定。在流動相的選擇方面，對乙腈-水、甲醇-水等多種流動相體系進行了對比，結果顯示在甲醇-水流動相體系下，檢測成分均有較好的響應，待測組織中的內(nèi)源性物質(zhì)對被測組分無明顯干擾，各峰之間分離度較好；進一步考察甲醇和水的配比，發(fā)現(xiàn)當甲醇比例增大時，可使色譜峰的出峰時間提前，但組織中的內(nèi)源性雜質(zhì)干擾增加，當甲醇和水體積比為70∶30時，內(nèi)源性雜質(zhì)減少，出峰時間較為適中，峰型較好，因此本研究選擇該流動相配比。在內(nèi)標法的選擇方面，本試驗曾經(jīng)參考周淵等[12]的方法，選用外標法進行檢測，但由于組織中的內(nèi)源性物質(zhì)對五味子甲素的干擾較多，無法準確評價其藥物質(zhì)量濃度，因此本研究選取睪丸酮為內(nèi)標物質(zhì)，并考察發(fā)現(xiàn)其受待測組織內(nèi)源性物質(zhì)的影響較小，穩(wěn)定性較高。

本試驗在預試驗基礎上對五味子甲素灌胃給藥后4 h內(nèi)的5個時間點的組織分布情況進行了研究，代表了組織分組的吸收相(0.5～1 h，各組織中五味子甲素含量逐漸增加)、平衡相(1～2 h，除肝、腎組織中的質(zhì)量濃度達峰值外，其他所測組織中五味子甲素質(zhì)量濃度基本處于平衡狀態(tài))、消除相(2 h后五味子甲素質(zhì)量濃度呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢)。給藥后甲素在小鼠心、肝、腎、腦組織中均有分布，且呈動態(tài)。達峰值時間上，腦組織和心組織均在給藥1 h達到最高質(zhì)量濃度，肝組織和腎組織均在給藥2 h達到峰值。隨著給藥時間的延長，以上組織中藥物含量也出現(xiàn)相應變化，其中口服五味子甲素在肝臟中的質(zhì)量濃度最高，提示其主要通過肝臟代謝，此結果也與中醫(yī)理論中五味子歸肝經(jīng)[13]相符；其次為腎臟中五味子甲素達峰時質(zhì)量濃度高于心臟和腦，提示腎臟可能為五味子甲素的主要排泄器官，同時也可能由于肝臟和腎臟的血流量大，循環(huán)好，促使五味子甲素的轉(zhuǎn)運量相對較大；分布較少的為心臟和腦，可能由于五味子甲素與心臟和腦組織的親和力較小有關。

上述結果已證實肝臟為五味子甲素的靶向作用器官，而目前防治各種有害因素引發(fā)的肝損傷仍是一個全球性的難題[14-17]。因此，本研究設計了CCl4致急性肝損傷這一經(jīng)典的試驗性肝損傷動物模型來探討五味子甲素保肝的活性。CCl4所致肝損傷主要表現(xiàn)為血清中轉(zhuǎn)氨酶活性增加，肝細胞脂質(zhì)過氧化或壞死，在形態(tài)學和病理生理學的某些表現(xiàn)與人的肝病較為相似[18-21]。本試驗病理檢查結果顯示，五味子甲素給藥組小鼠肝細胞形態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，與CCl4肝損傷模型組比較，中央靜脈周圍肝細胞形態(tài)基本恢復正常，說明五味子甲素對肝損傷具有保護作用，且其對肝臟保護作用與其在肝臟組織中的分布特點具有密切相關性。

[參考文獻]

[1]Yang J M,Ip S P,Yeung H J,et al.HPLC-MS analysis ofSch-isandralignans and their metabolites in Caco-2 cell monolayer and rat everted gut sac models and in rat plasma [J].Acta Pharm Sin B,2011,1(1):46.

[2]Tilg H, Day C.Management strategies in alcoholic liver disease [J].Nature Clinical Practice Gastroenterology & Hepatology,2007,4(1):24-34.

[3]Wang B,Hu J,Tan W,et al.Simultaneous quantification of four activeSchisandralignans from a traditional Chinese medicineSchisandrachinensis(Wuweizi) in rat plasma using liquid chromatography mass spectrometry [J].J Chromatogr B,2008,865(1):14.

[4]趙紅霞,鞠大宏,劉梅潔,等.五味子有效成分藥理學研究進展 [J].中國醫(yī)藥導刊,2014,14(10):1334-1336.

Zhao H X，Ju D H，Liu M J，et al.Progress in pharmacological research ofSchisandrachinensiseffective components [J].Chinese Med,2014,14(10):1334-1336.

[5]應國清,俞志明,單劍峰,等.五味子有效組分的研究進展 [J].河南中醫(yī),2005,25(6):84-87.

Ying G Q,Yu Z M,Shan J F,et al.Research progress on the effective components ofSchisandra[J].Henan Journal of Traditional Chinese Medicine,2005,25(6):84-87.

[6]Assimopoulou A N,Papageorgiou V P.Radical scavenging activity of alkanna tinctoria root extracts and their main constituents,hydroxynaphthoquinones [J].Physiother Res,2005,19(2):141-147.

[7]于洋,嚴子玲,賴巧,等.五味子配伍對吳茱萸主成分在大鼠腸道吸收中的影響研究 [J].中國藥師,2014,17(3):349-352.

Yu Y,Yan Z L,Lai Q,et al.Study on the effect of intestinal absorption in rats ofSchisandraturczfructusevodiae principal component [J].China Pharmacist,2014,17(3):349-352.

[8]王春梅,李賀,李生,等.北五味子木脂素對小鼠酒精性肝損傷的保護作用 [J].食品科學,2014,35(13):262-265.

Wang C M,Li H,Li S,et al.Protective effect ofFructuschinensison alcohol induced liver injury in mice [J].Journal of Food Science,2014,35(13):262-265.

[9]Ko K M,Ip S P,Poon M K,et al.Effect of a lignan-enriched fructusSchisandraeextract on hepatic glutathione status in rats:protection against carbon tetrachloride toxicity [J].Planta Medica,1995,61(2):134-137.

[10]Sid B,Verrax J,Calderol P B.Role of oxidative stress in the pathogenesis of alcohol-induced liver disease [J].Free Radical Research,2013,47(11):894-904.

[11]Wu D,Cederbaum A I.Alcohol,oxidative stress,and free radical damage [J].Alcohol Research&Health,2003,27(4):277-284.

[12]周淵,毛春芹,胡俊揚,等.液-質(zhì)聯(lián)用研究五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素在大鼠體內(nèi)的組織分布 [J].藥物分析雜志,2013,33(7):1121-1126.

Zhou Y，Mao C Q，Hu J Y，et al.Tissue distribution of Schisandrin，deoxyschisandrin and Schisandrin B in rat determined by HPLC-MS [J].Chin J Pharm Anal,2013，33(7)：1121-1126.

[13]王明媚,周亮,張鑫,等.藥物性肝損傷的診斷和防治研究進展 [J].中國藥業(yè),2014,23(7):94-96.

Wang M M,Zhou L,Zhang X,et al.Research progress of diagnosis and treatment of drug-induced liver injury [J].Chinese Pharmaceutical,2014,23(7):94-96.

[14]Wang B L,Hu J P,Tan W,et al.Simultaneous quantification of four activeSchisandralignans from a traditional Chinese medicineSchisandrachinensis(Wuweizi) in rat plasma using liquid chromatography/mass spectrometry [J].Journal of Chromatography B:Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences,2008,865(1/2):114-120.

[15]鄭春英,李宏濤,吳桐,等.HPLC法同時測定五味子不同部位中三種木脂素成分含量 [J].食品科學,2007,28(7):376-379.

Zheng C Y,Li H T,Wu T，et al.Simultaneous determination of three kinds of different parts ofSchisandralignans content with HPLC method [J].Food Science,2007,28(7):376-379.

[16]陳寶芝,李生,吳金瀅,等.五味子粗多糖對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護作用及其機制 [J].吉林大學學報(醫(yī)學版),2014,40(1):92-96.

Chen B Z,Li S,Wu J Y,et al.Protective effect ofSchisandraon acute liver injury induced by CCl4in mice and its mechanism [J].Journal of Jilin University (Medical Science Edition),2014,40(1):92-96.

[17]Cederbaum A I,Lu Y,Wu D.Role of oxidative stress in alcohol-induced liver injury [J].Archives Toxicology,2009,83(6):519-548.

[18]Miranda M A,Luqo B A,Armendariz B J.Molecular basis and current treatment for alcoholic liver disease [J].International Journal of Environmental Research and Public Health,2010,7(5):1872-1888.

[19]Hwang I S,Kin J E,Lee Y J,et al.Protective effects of gomisin A isolated fromSchisandrachinensisagainst CCl4-induced hepatic and renal injury [J].International Journal of Molecular Medicine,2013,31(4):8884-8898.

[20]Minin E A,Buchwalow I B,Wellner M,et al.L-Arginine-NO-cGMP signaling following acute liver injury in the rat [J].Experimental and Toxicologic Pathology,2005,57(2):161-171.

[21]Deya,Cederbaumai.Alcohol and oxidative liver injury [J].Hepatology,2006,43(2):63-74.

DOI：網(wǎng)絡出版時間:2016-06-0816:2110.13207/j.cnki.jnwafu.2016.07.009

[收稿日期]2014-12-15

[基金項目]吉林省科技發(fā)展計劃項目(20130206036YY)；吉林省發(fā)改委科研平臺資助項目(2013G020)

[作者簡介]趙振宇(1989-)，男，河南鶴壁人，在讀碩士，主要從事天然藥物體內(nèi)分布代謝研究。 E-mail：longyuxiang0118@163.com [通信作者]張成義(1966-)，男，吉林吉林人，教授，博士，碩士生導師，主要從事天然藥物藥理學研究。 E-mail：zhchyjL@163.com

[中圖分類號]

[文獻標志碼]A

[文章編號]1671-9387(2016)07-0057-07

Distribution characteristics of Schisandrin A in mice tissues and its targeting therapeutic effect

ZHAO Zhenyu,JIANG Xiaohui,WANG Chunmei,LI He,SUN Jingbo,CHEN Jianguang,ZHANG Chengyi

(CollegeofPharmacy,BeihuaUniversity,Jilin,Jilin132013,China)

Abstract:【Objective】 This study established a method to detect the concentration of Schisandrin A in mice,investigated its distribution characteristics and examined its targeting therapeutic effect. 【Method】 Schisandrin A at concentration of 25 mg/kg was administered orally to ICR mice and the concentrations in heart,brain,kidney and liver were measured using HPLC with testosterone as internal standard 0.5,1,2,3,and 4 h after administration.The specificity,recovery,accuracy and stability of HPLC method were also studied.The tissue with highest Schisandrin A contribution was determined and the biological activities were evaluated.【Result】 The concentrations of Schisandrin A distribution in mice heart,liver,kidney,and brain tissues were 0.625 to 20 μg/mL,having a good linear relationship with the internal standard peak area ratio (r≥0.999 0).HPLC had a good specificity,with within-day precision of (3.15±0.82)%-(4.77±0.57)% and between-day precision of (5.51±1.82)%-(8.46±2.93)%.The RSD of stability test was <10%,the absolute recovery was (89.04±3.82)%-(91.37±3.77)%,and the relative recovery was (95.65±5.76)%-(106.07±8.29)%.Schisandrin A was distributed in heart,liver,kidney and brain,and the times needed to reach peak concentration were 1 hour in heart and brain,and 2 hours in liver,and 3 hours in kidney.The concentration of Schisandrin A in liver was significantly higher than in kidney,heart and brain (P<0.05).Schisandrin A had protective effect on CCl4 induced acute liver injury in mice.【Conclusion】 The established method was simple,rapid,stable,and can be used for determination of Schisandrin A in internal tissues of mice.After oral administration,peak and every time concentrations of Schisandrin A were highest in liver,and it can protect acute liver injury.

Key words:Schisandrin A;mice tissue;distribution;targeting therapeutic effect

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