白掌的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

王　穎，張晶晶，賈愛(ài)平，安　云（銀川市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，寧夏銀川 750021）

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白掌的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

王穎，張晶晶，賈愛(ài)平，安云
（銀川市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，寧夏銀川 750021）

摘要：以白掌莖尖作為外植體，在不同激素配比下進(jìn)行組織培養(yǎng)。結(jié)果表明：適宜誘導(dǎo)白掌莖尖產(chǎn)生愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.2 mg/L；白掌不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+ KT1.0 mg/L；最好的芽分化數(shù)是第4代；最適宜生根培養(yǎng)基是1/2MS+NAA0.5 mg/ L+1.0 mg/L。

關(guān)鍵詞：白掌 莖尖 培養(yǎng)基 繁殖

白掌，屬于天南星科，白鶴芋屬，多年生草本，翠綠葉片，潔白佛焰苞，清新幽雅，是世界上重要的觀花。它還是過(guò)濾室內(nèi)廢氣的能手，對(duì)付氨氣、丙酮、苯和甲醛都有一定功效［1］。20世紀(jì)初，開(kāi)始應(yīng)用于盆栽觀賞，視白鶴芋為“清白之花”，具有純潔平靜、祥和安泰之意。

白鶴芋的繁殖方法主要是分株繁殖，但繁殖速度慢，且成活率低，不適應(yīng)商品化規(guī)模生產(chǎn)的需要。利用組培的方法，即可在短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)繁大量組培苗供生產(chǎn)應(yīng)用［2-5］。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

以生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的盆栽白掌植株為實(shí)驗(yàn)材料，剪取其莖尖作為外植體。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1 組織培養(yǎng)條件

以MS為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基均加入蔗糖30 g/L，進(jìn)口瓊脂9.0 g/L，pH值為5.5～6.0。培養(yǎng)溫度（25±1）℃，光照12 h/d，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx。

1.2.2 外植體的處理

將選好的完整植株葉片和根系去掉，用自來(lái)水沖洗2～3 h后，切除暴露在外界的表層，經(jīng)無(wú)菌水沖洗3次，然后用75%的酒精處理1 min，轉(zhuǎn)入到0.1%的HgCl2溶液中消毒8 min，最后用無(wú)菌水沖洗5次。用解剖刀切取3～5 mm的莖尖，接種到誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基中。

1.2.3 不同激素配比對(duì)莖尖誘導(dǎo)愈傷組織的影響

試驗(yàn)以白掌的莖尖作為外植體，MS為基本培養(yǎng)基，激素為6-BA、NAA，兩因素三水平正交試驗(yàn)（A1～A6，分別是A1：MS+6-BA1.0+ NAA0.1；A2：MS+6-BA1.0+ NAA0.2；A3：MS+6-BA2.0+NAA0.1；A4：MS+6-BA2.0+ NAA0.2；A5：MS+6-BA3.0+ NAA0.1；A6：MS+6-BA3.0+ NAA0.2），從中篩選出最優(yōu)培養(yǎng)基。

統(tǒng)計(jì)出現(xiàn)愈傷組織的時(shí)間、出愈率和出芽率、觀察愈傷組織及不定芽的生長(zhǎng)情況。每個(gè)處理15瓶，每瓶接種3個(gè)，3次重復(fù)。

1.2.4 不同激素配比對(duì)不定芽增殖的影響

以MS為基本培養(yǎng)基，當(dāng)莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)出的叢生芽長(zhǎng)到0.5～0.8 cm時(shí)，將叢生芽連同愈傷組織分切成0.4～0.6 cm的小塊，附加激素6-BA、IBA、KT3種激素接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)（B1～B9，分別是B1：MS+6-BA1.0+ IBA0.5+KT0；B2：MS+6-BA1.0+ IBA1.0+KT0.5；B3：MS+6-BA1.0+IBA1.5+KT0.5；B4：MS+6-BA2.0+ IBA0.5+KT0；B5：MS+6-BA2.0+IBA1.0+KT1.0；B6：MS+6-BA2.0+ IBA1.5+KT1.0；B7：MS+6-BA3.0+ IBA0.5+KT0；B8：MS+6-BA3.0+ IBA1.0+KT1.5；B9：MS+6-BA3.0+ IBA1.5+KT1.5）共9種組合，從中篩選出最優(yōu)培養(yǎng)基。

記錄增殖的叢芽數(shù)，叢芽的生長(zhǎng)情況。每個(gè)處理15瓶，每瓶接種3個(gè)，3次重復(fù)。

1.2.5 繼代次數(shù)對(duì)白掌不定芽分化培養(yǎng)的影響

在培養(yǎng)基選出的最優(yōu)培養(yǎng)基，對(duì)白掌進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)。繼代5次，記錄每次愈傷組織誘導(dǎo)及芽分化的芽數(shù)。

1.2.6 不同激素配比對(duì)叢生芽生根培養(yǎng)的影響

I/2MS為基本培養(yǎng)基，分別添加激素NAA、活性炭共6種組合。待分化的不定芽長(zhǎng)至3～4 cm左右時(shí)，接種至生根培養(yǎng)基中，25 d后統(tǒng)計(jì)生根數(shù)和生根率，平均根長(zhǎng)，篩選出最佳生根培養(yǎng)基。每個(gè)處理15瓶，每瓶接種3株，3次重復(fù)。

1.3項(xiàng)目測(cè)定

污染率（%）=污染的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù)×100%；死亡率（%）=褐化死亡數(shù)/外植體接種的總數(shù)×100%；出愈率（%）=產(chǎn)生愈傷組織的外植體數(shù)數(shù)/接種的外植體總數(shù)×100%；出芽率（%）=愈傷組織的出芽數(shù)/出愈數(shù)×100%；增殖系數(shù)=增殖叢芽數(shù)/接種外植體數(shù)；平均根長(zhǎng)=生根總長(zhǎng)/分化出的總根數(shù)。

1.4數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel和SPASS軟件進(jìn)行分析。

2　結(jié)果與分析

2.1不同激素配比對(duì)莖尖誘導(dǎo)愈傷組織的影響

由表1可見(jiàn)，將滅菌后的帶腋芽莖段接入到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，不同激素配比的出愈率、出芽率差異顯著。在A1～A6中，出愈率、出芽率隨著6-BA濃度的升高，先升高后降低，隨著NAA的濃度升高而升高。當(dāng)6-BA濃度為1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L 時(shí)，最大出愈率分別為53.33%、93.33%和64.44%。A4處理的愈傷組織緊密，黃綠，叢芽生長(zhǎng)健壯、葉展開(kāi)，生長(zhǎng)情況良好，表明A4兩種激素的配比達(dá)到較好的效果。白掌最佳的莖尖誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.2 mg/L。

2.2不同激素配比對(duì)不定芽增殖的影響

由表2可見(jiàn)，在B1～B9中，出芽數(shù)和增殖系數(shù)隨著6-BA濃度的升高，先升高后降低，6-BA濃度為2.0 mg/ L時(shí)，出芽數(shù)和增殖系數(shù)為最多；當(dāng)NAA的濃度為1.0 mg/ L升時(shí)，表現(xiàn)出最多；當(dāng)KT的濃度為0時(shí)，出芽數(shù)和增殖系數(shù)表現(xiàn)出最低?？梢?jiàn)，KT在激素濃度配比中，起了至關(guān)重要的作用。由此得出，白掌不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+ KT1.0 mg/L。

2.3繼代次數(shù)對(duì)白掌不定芽分化培養(yǎng)的影響

結(jié)果（表3）表明，第1代、第2代、第4代分別與其余4代之間存在顯著差異；第3代和第5代之間沒(méi)有差異。但是，這兩代與其余三代之間差異顯著。隨著繼代次數(shù)的增加，從第3代開(kāi)始芽分化數(shù)明顯增加，從第5代增殖系數(shù)開(kāi)始降低?？梢?jiàn)多代培養(yǎng)能提高白掌的芽分化數(shù)，而達(dá)到最好的分化數(shù)是第4代。

表1　不同激素配比對(duì)莖尖誘導(dǎo)愈傷組織的影響

表2　不同激素配比對(duì)不定芽增殖的影響

表3　不同繼代次數(shù)的芽分化數(shù)及多重比較

表4　NAA和活性炭對(duì)瓶苗生根的影響

2.4不同激素配比對(duì)叢生芽生根培養(yǎng)的影響

接種10 d后，各個(gè)瓶苗陸續(xù)有根產(chǎn)生，呈現(xiàn)白里透綠的顏色，18 d后逐漸呈現(xiàn)黃褐色，25 d后對(duì)生根的瓶苗進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。由表4可見(jiàn)，當(dāng)NAA的濃度為0.5 mg/L時(shí)，活性炭濃度為1.0 mg/L時(shí)，C2的生根數(shù)最多，生根數(shù)和平均根數(shù)顯著高于C1和C3。當(dāng)NAA的濃度為1.0 mg/L時(shí)，活性炭濃度為1.0 mg/L時(shí)，C5的生根數(shù)最多，生根數(shù)和平均根數(shù)顯著高于C4和C6。而C2的生根數(shù)和平均根長(zhǎng)顯著高于C5，所以，最適宜生根培養(yǎng)基是1/2MS+NAA0.5 mg/L+1.0 mg/L。

3　結(jié)論與討論

3.1芽苗增殖生長(zhǎng)旺盛

白掌莖尖組織培養(yǎng)誘導(dǎo)比較容易形成壓傷組織并分化出苗，芽苗增殖生長(zhǎng)旺盛。白掌莖尖誘導(dǎo)不定芽最佳的培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.2 mg/L。實(shí)驗(yàn)只選取白掌的莖尖作為外植體，外植體的選擇單一，將選擇白掌的側(cè)芽苗、花序?yàn)橥庵沧鲞M(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

3.2最佳培養(yǎng)基

由此得出，白掌不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+ KT1.0 mg/L。

3.3提高白掌的芽分化數(shù)

可見(jiàn)多代培養(yǎng)能提高白掌的芽分化數(shù)，而達(dá)到最好的分化數(shù)是第4代。

3.4最適宜生根培養(yǎng)基

最適宜生根培養(yǎng)基是1/2MS+NAA0.5 mg/L+1.0 mg/ L?；钚蕴吭谥参锝M織培養(yǎng)中的作用很大，在培養(yǎng)基中不僅能吸附有毒物質(zhì)，也能提供一個(gè)暗環(huán)境，避免強(qiáng)光對(duì)根生長(zhǎng)的抑制［6］。

參考文獻(xiàn)

［1］ 黃智明.珍奇花卉栽培.廣東科技出版社，1996，（90）

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［3］ 邱進(jìn)清，藍(lán)賀勝，謝國(guó)陽(yáng)，等.巨桉種源/家系引種試驗(yàn).江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，24（04）：517～521

［4］ 梁坤南.桉屬樹(shù)種/種源試驗(yàn).林業(yè)科學(xué)研究，2000，13（02）：203～208

［5］ 王豁然.巨桉種源試驗(yàn)及其在我國(guó)適生范圍的研究.林業(yè)科學(xué)研究，1989，2（05）：411～419

［6］ 劉根林，梁還珍，朱軍.活性炭在植物組織培養(yǎng)中的作用概述.江蘇林業(yè)科技，2001，28（05）46～48