苗藥復(fù)方窩來溜溶液的抗菌活性研究

雷　曄　禹俊梅　劉書華

黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥技術(shù)系，貴州　凱里　556000

?

苗藥復(fù)方窩來溜溶液的抗菌活性研究

雷曄禹俊梅劉書華

黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥技術(shù)系，貴州凱里556000

【摘要】目的：研究苗藥復(fù)方窩來溜溶液的抗菌活性。方法：以復(fù)方窩來溜溶液為研究對(duì)象，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。結(jié)果：苗藥復(fù)方窩來溜溶液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的平均抑菌率都達(dá)到100.00%。結(jié)論：苗藥復(fù)方窩來溜溶液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌具有較強(qiáng)的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】苗藥復(fù)方窩來溜；蜘蛛香；抗菌

苗藥復(fù)方窩來溜溶液為苗藥蜘蛛香、桂枝、桑枝、松葉等制成的復(fù)方溶液劑。主要藥物蜘蛛香(Valeriana wallichii DC，V.jatamansi Jones)又名馬蹄香、老虎七、土細(xì)辛、印度纈草等，具有理氣和中，散寒除濕，活血消腫的功效。臨床用于脘腹脹痛、嘔吐泄瀉、小兒疳積、風(fēng)寒濕痹、肺氣水腫、月經(jīng)不調(diào)和跌打損傷，外用于治療瘡癤等。為使苗藥復(fù)方窩來溜溶液劑作為健康產(chǎn)品用于相關(guān)人群，依據(jù)衛(wèi)生部GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[1]規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)苗藥復(fù)方窩來溜溶液劑進(jìn)行抗菌作用試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1儀器與材料

1.1儀器HH.B11.500電熱恒溫培養(yǎng)箱9060749。

1.2材料復(fù)方窩來溜溶液劑(批號(hào)：20140407，貴州苗侗百草醫(yī)藥發(fā)展有限公司)。大腸桿菌(8099)、金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、白色念珠菌(ATCC 10231)由中國普通微生物菌種保藏管理中心提供，試驗(yàn)使用第6～7代37℃培養(yǎng)18～24h。所用試劑均為分析純。

2方法

2.1微生物污染檢測(cè)采用GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄B“產(chǎn)品微生物檢測(cè)方法”作為檢測(cè)依據(jù)。試驗(yàn)溫度20.4℃、濕度43%，實(shí)驗(yàn)室潔凈度為百級(jí)，用無菌方法打開同批號(hào)的3瓶包裝，從每瓶包裝中取原液混合做樣液備用。①細(xì)菌菌落總數(shù)檢測(cè)：共接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1ml樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15～20ml倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻，待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置(35±2)℃培養(yǎng)48h后，計(jì)算平板上的菌落數(shù)。②大腸菌群檢測(cè)：取樣液5ml，接種50ml乳糖膽鹽發(fā)酵管，置(35±2)℃培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。③金黃色葡萄球菌檢測(cè)：取樣液5ml，加入到50ml SCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置(35±2)℃培養(yǎng)24h。自上述增菌液中取1～2接種環(huán)，劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，置(35±2)℃培養(yǎng)24～48h，在血瓊脂平板上觀察菌落特征。④溶血性鏈球菌檢測(cè)：取樣液5ml，加入到50ml葡萄糖肉湯，(35±2)℃培養(yǎng)24h。將培養(yǎng)物劃線接種血瓊脂平板，(35±2)℃培養(yǎng)24h觀察菌落特征。⑤綠膿桿菌檢測(cè)：取樣液5ml，加入到50ml SCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置(35±2)℃培養(yǎng)18～24h，觀察培養(yǎng)液表面情況。⑥真菌菌落總數(shù)檢測(cè)方法：接種五個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1ml樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的沙氏瓊脂培養(yǎng)基15～25ml倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置(25±2)℃培養(yǎng)7天，分別于3、5、7天觀察，計(jì)算平板上的菌落數(shù)。2.2抗菌試驗(yàn)采用GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄C4“溶出性抗(抑)菌產(chǎn)品抑菌性能試驗(yàn)方法”為依據(jù)，試驗(yàn)溫度(20±1)℃。將試驗(yàn)菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液(要求的濃度為：用100μl滴于5ml樣液內(nèi)，回收菌數(shù)為1×104～9×104cfu/ml)。取被試樣液(5ml)和對(duì)照樣液(與試樣同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理)各4管。取上述菌懸液，分別在每個(gè)被試樣液和對(duì)照樣液內(nèi)滴加100μl，均勻混合，開始計(jì)時(shí)，作用2、5、10、20min，用無菌鑷分別將樣液(0.5ml)投入含5ml PBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng)稀釋，然后取其中2～3個(gè)稀釋度，分別吸取0.5ml，置于兩個(gè)平皿，用涼至40～45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌)或沙氏瓊脂培養(yǎng)基(白色念珠菌)15ml做傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，培養(yǎng)48h(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌)或72h(白色念珠菌)，做活菌菌落計(jì)數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)三次。按下式計(jì)算抑菌率：X=(A-B)/A×100%(式中，X為抑菌率，%；A為對(duì)照品平均菌落數(shù)；B為被試品平均菌落數(shù)。)

2.3判斷標(biāo)準(zhǔn)①細(xì)菌菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果判定，菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)采用二位有效數(shù)字。將復(fù)檢樣品依前法復(fù)測(cè)2次，2次結(jié)果平均值都不超過200cfu/ml，則被檢樣品合格，如其中有任何1次結(jié)果平均值超過200cfu/ml，則判定被檢樣品不合格。②大腸菌群檢測(cè)結(jié)果判定，如乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，可判定為大腸菌群陰性，凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美蘭平板上培養(yǎng)有典型大腸菌落，可報(bào)告被檢樣品檢出大腸桿菌。③金黃色葡萄球菌檢測(cè)結(jié)果判定：在血瓊脂平板上有金色葡萄球菌生長的，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。④溶血性鏈球菌檢測(cè)結(jié)果判定：在血瓊脂平板上有溶血性鏈球菌生長的，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。⑤綠膿桿菌檢測(cè)結(jié)果判定，如培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液呈黃綠色或藍(lán)綠色，則從培養(yǎng)液薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷三甲溴化銨瓊脂平板培養(yǎng)，有綠膿桿菌生長的，可報(bào)告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。⑥真菌菌落檢測(cè)結(jié)果判定：當(dāng)沙氏培養(yǎng)基上的菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)采用二位有效數(shù)字。如樣品真菌菌落總數(shù)超過100cfu/ml，復(fù)檢2次，2次結(jié)果都不超過100cfu/ml，則判定被檢樣品合格，其中有任何1次結(jié)果超過100cfu/ml，則判定被檢樣品不合格。⑦抗菌試驗(yàn)結(jié)果判定，抑菌率≥50%～90%，產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率≥90%，產(chǎn)品有較強(qiáng)抑菌作用。

3結(jié)果

3.1檢測(cè)結(jié)果復(fù)方窩來溜溶液經(jīng)檢測(cè)細(xì)菌菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、真菌菌落總數(shù)均符合GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的要求，見表1。

表1　窩來溜溶液微生物檢測(cè)結(jié)果

3.2抑菌效果經(jīng)三次重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果表明：在(20±1)℃條件下，苗藥復(fù)方窩來溜溶液劑原液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率達(dá)100.00%，表明產(chǎn)品具有較強(qiáng)的抑菌作用。見表2、3、4。

表2　窩來溜溶液劑對(duì)大腸桿菌的抑菌效果

注：陽性對(duì)照組平均回收菌落數(shù)為53000CFU/ml (45200CFU/ml～58000CFU/ml);陰性對(duì)照均無菌生長。

4討論

苗藥復(fù)方窩來溜溶液經(jīng)微生物污染檢測(cè)，產(chǎn)品符合GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定。在(20±1)℃的條件下，苗藥復(fù)方窩來溜溶液原液分別對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率均達(dá)100.00%。說明苗藥復(fù)方窩來溜溶液劑原液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌具有較強(qiáng)的抑菌作用。

表3　窩來溜溶液劑對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果

注：陽性對(duì)照組平均回收菌落數(shù)為31467CFU/ml (29600CFU/ml～34400CFU/ml)；陰性對(duì)照均無菌生長。

表4　窩來溜溶液劑對(duì)白色念珠菌的抑菌效果

注：陽性對(duì)照組平均回收菌落數(shù)為68600CFU/ml (62400CFU/ml～74200CFU/ml)；陰性對(duì)照均無菌生長。

苗藥復(fù)方窩來溜中的主要成分蜘蛛香具有廣泛的藥理活性，蜘蛛香所含的環(huán)烯醚萜類成分具有抗腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮、解痙等作用[2]。曹斌[3]等證明蜘蛛香可顯著延長戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間，明顯減少醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥和一定的鎮(zhèn)痛作用；郜紅利[4]等證明蜘蛛香中的總黃酮類成分具有鎮(zhèn)痛、改善胃腸運(yùn)動(dòng)的作用；蜘蛛香有抗前列腺增生、抗菌及抗病毒等作用[5]。此外，蜘蛛香的揮發(fā)油成分對(duì)芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌有明顯的抑制作用[6]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，蜘蛛香無明顯的藥物依賴作用和毒性作用[6]，因此具有天然、毒性低、藥理作用廣泛的特點(diǎn)。以蜘蛛香為主要成分的苗藥窩來溜在黔東南地區(qū)苗族民間常外用于祛風(fēng)濕、活血、強(qiáng)力等。研究結(jié)果進(jìn)一步佐證了將苗藥窩來溜制成的溶液劑可對(duì)常見致病菌如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌具有較強(qiáng)的抑菌作用。

參考文獻(xiàn)

[1] GB15979-2002. 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

[2] 李少華，閆智勇.蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2012,21(6)：633-637.

[3] 曹斌，洪庚辛.蜘蛛香的中樞抑制作用[J].中國中藥雜志，1994，19(1):40.

[4] 郜紅利，譚玉柱.蜘蛛香提取物的藥理學(xué)研究[J].華西藥學(xué)雜志，2014，29(2)：154-157.

[5] 李蓉，吳瑩. 蜘蛛香的藥理作用研究進(jìn)展[J].科技資訊，2009，(31): 159.

[6] 陳暢，李韶菁，唐仕歡，等.蜘蛛香藥理研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2012，37(14)：2174-2177.

【中圖分類號(hào)】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)10-0021-02

(收稿日期：2016.03.16)

Study on the antibacterial effect of Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution

LEI YeYU JunmeiLIU Shuhua

Qiandongnan National Polytechnic, Kaili 556000, China

Abstract:Objective To study the antimicrobial activity of the Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution in laboratory. Methods Take Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution as the reseach object, the antibacterial test of Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans was carried out in laboratory. Results Antibacterial test showed that the inhibitory rate of Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans was 100% on average. Conclusion Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution has a strong inhibitory effect on Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans.

Key words:Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu; Valeriana wallichii DC ;V.jatamansiJones; Antibacterial test