金蕎麥藥酒對膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型大鼠IL-22、IL-18及TNF-α的影響

萬進(jìn)軍　潘朝旺

鄂州職業(yè)大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北　鄂州　436000

?

金蕎麥藥酒對膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型大鼠IL-22、IL-18及TNF-α的影響

萬進(jìn)軍潘朝旺

鄂州職業(yè)大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北鄂州436000

【摘要】目的：觀察金蕎麥藥酒對膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響。方法：將Wistar大鼠隨機(jī)分成6組，空白組、模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組，建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型，檢測血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α的含量。結(jié)果：與空白組比較，模型對照組血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α明顯升高；與模型組比較，各給藥組的上述指標(biāo)均得到改善。結(jié)論：金蕎麥藥酒治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的機(jī)制可能與降低IL-22、IL-18、TNF-α有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】金蕎麥藥酒；膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎；白細(xì)胞介素-22；白細(xì)胞介素-18；腫瘤壞死因子-α

金蕎麥別名苦蕎麥、蕎麥當(dāng)歸、蕎麥三七、金鎖銀開、賊骨頭、鐵拳頭、土茯苓等；其性涼，味辛、苦，具有清熱解毒、活血化瘀、健脾利濕的作用。金蕎麥藥酒在民間用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)效果明顯，課題組前期研究也證明金蕎麥藥酒具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎作用[1]，但尚未見關(guān)于抗RA作用的研究。實(shí)驗(yàn)旨在研究金蕎麥藥酒對Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型(CIA)大鼠血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響，探討其抗RA免疫作用機(jī)制，為金蕎麥應(yīng)用于RA提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

1.1藥物雷公藤多苷片(批號：20131114，浙江得恩德制藥有限公司)；金蕎麥藥酒，以金蕎麥根莖及塊根計(jì)，每毫升藥酒相當(dāng)于0.4g原藥材，本院自制。

1.2動物Wistar大鼠60只，體重(200±20)g，SPF級，雌雄各半，合格證號：SCXK(鄂)2011-0012，由三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.3試劑完全弗氏佐劑(FCA)、雞Ⅱ型膠原(CⅡ)由sigma 公司提供；白細(xì)胞介素-22(IL-22)、白細(xì)胞介素-18(IL-18)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)測定試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。1.4儀器UV754紫外可見分光光度計(jì)(上海佑科儀器儀表有限公司)；臺式冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器公司)。

2方法

2.1動物造模及分組給藥隨機(jī)抽取10只大鼠，為空白組，其余50只建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型[2-3]。用0.2%醋酸將CⅡ溶解，使其濃度為2mg/ml，放置過夜(4℃條件下)，與FCA按1∶1比例混合，在冰浴中乳化，得到CⅡ乳劑，對每只大鼠右后肢足趾、背部及尾根部3點(diǎn)皮內(nèi)共注射0.4ml，在相同部位3點(diǎn)對空白組注射生理鹽水0.1ml。所有造模大鼠7d后加強(qiáng)免疫1次，即按原方法注射CⅡ乳劑0.2ml。將造模大鼠隨機(jī)分為5組，即模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組。空白組，模型對照組于造模后給予生理鹽水15ml/(kg·d)，雷公藤多苷組給予雷公藤多苷片0.03g/(kg·d)，金蕎麥高、中、低劑量組分別給予金蕎麥藥酒5.40、2.70、1.35ml /(kg·d)，相當(dāng)于原生藥2.16、1.08、0.54g/(kg·d)，連續(xù)給藥21d。

2.2血清TNF-α、IL-22、IL-18的測定末次給藥2h后，將大鼠用3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，固定，腹總動脈取血，離心，制備血清，按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。2.3滑膜細(xì)胞TNF-α、IL-22、IL-18的測定取大鼠后肢右膝關(guān)節(jié)，分離出滑膜，剪碎，用生理鹽水1∶20勻漿，按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。

3結(jié)果

3.1對血清TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較，模型對照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比，血清TNF-α、IL-22、IL-18含量降低，除低劑量組IL-22無明顯差異外，其他組別和指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

組別劑量/g/kgTNF-α/ng/LIL-22/ng/LIL-18/ng/L空白組生理鹽水268.46±83.50**136.29±21.06**258.36±23.09**模型對照組生理鹽水473.54±102.69210.35±28.64365.31±35.60雷公藤多苷組0.03302.34±89.28**148.09±19.28**272.05±28.64**金蕎麥高劑量組2.16296.76±83.51**146.35±24.98**275.32±22.92**金蕎麥中劑量組1.08312.0±75.24**154.36±24.69**278.32±23.57**金蕎麥低劑量組0.54332.18±94.72*184.82±33.57296.12±38.38*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2對滑膜細(xì)胞TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較，模型對照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比，血清TNF-α、 IL-22 、IL-18含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

組別劑量/g/kgTNF-α/ng/LIL-22/ng/LIL-18/ng/L空白組生理鹽水37.4±12.5**22.8±3.5**15.3±2.0**模型對照組生理鹽水57.5±15.631.2±4.926.1±3.6雷公藤多苷組0.0342.3±13.2**24.5±5.3**17.0±2.6**金蕎麥高劑量組2.1641.7±15.1**24.3±4.7**17.3±2.4**金蕎麥中劑量組1.0843.0±13.4**26.3±3.6*18.5±2.9**金蕎麥低劑量組0.5447.1±14.2*26.8±4.7*19.1±3.5*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3討論

RA是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病。研究表明，NK細(xì)胞在RA發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用[4]，NK-22細(xì)胞是不同表型的NK細(xì)胞之一，RA患者血液和滑液中NK-22細(xì)胞明顯高于正常人[5]。IL-22是NK-22細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子之一，能促進(jìn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖，是促成纖維樣滑膜細(xì)胞增生的細(xì)胞因子[6]，在RA的病理過程中發(fā)揮重要作用。IL-18作為一種新型IL家族促炎細(xì)胞因子，主要與IL-18受體結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)表明，RA患者血清IL-18明顯升高，其水平與病情呈正相關(guān)[7]，提示IL-18參與RA病情的活動，其作用與促進(jìn)T細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，誘導(dǎo)以Th1細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫反應(yīng)，使病變組織 Th1/Th2比例失衡有關(guān)[8]。TNF-α是一種免疫調(diào)節(jié)和前炎性因子，在病變關(guān)節(jié)中可促進(jìn)前列腺素E2(PGE2)等多種炎癥介質(zhì)釋放，引起關(guān)節(jié)軟骨的吸收破壞，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增生；且TNF-α常與IL-1β一起合成與釋放，是致病機(jī)制中一對重要的促炎癥細(xì)胞因子，參與了RA發(fā)生、發(fā)展的全過程。

在RA患者病變關(guān)節(jié)滑膜內(nèi)，巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增多，其不僅與關(guān)節(jié)疼痛數(shù)、壓痛數(shù)、血沉、C 反應(yīng)蛋白等反應(yīng)RA病情程度的指標(biāo)呈明顯的正相關(guān)，還與X線關(guān)節(jié)破壞的侵蝕積分和狹窄積分呈明顯的正相關(guān)[9]，可能與其釋放IL-22、IL-18、TNF-α等炎性因子有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，金蕎麥藥酒對CIA大鼠免疫功能有明顯影響，可降低血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α含量，這些可能是其治RA的作用機(jī)制之一。

參考文獻(xiàn)

[1] 程友斌，潘洪林. 金蕎麥抗炎活性部位篩選研究[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20(9)：2219-2220．

[2] 徐琦，尹抗抗，譚達(dá)全，等.麻黃加術(shù)湯對大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型作用機(jī)制的研究[J]．湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，31(5)：13-15．

[3] 馬艷苗，王永輝，李艷彥，等. 風(fēng)濕寧膠囊對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響[J]．中醫(yī)雜志，2013，54(4)：326-328．

[4] Ahern DJ,Brennan FM. The role of Natural Killer cells in the pathogenesis of rheumatoid arthritis: major contributors or essential homeostatic modulators [J]. Immunol Lett,2011,136(2):115-121.

[5] Ren J,Feng Z,Lv Z,et al. Natural killer-22 cells in the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis are an innate source ofinterleukin 22 and tumor necrosis factor-α[J].J Rheumatol,2011,38(10):2112-2118.

[6] 任潔，周毅，吳會霞，等. NK-22細(xì)胞及IL-22相關(guān)功能分子在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞增殖中的作用[J]．南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，34(1)：20-24．

[7] 任敏，武加標(biāo)，湯麗，等. 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)與血清IL-18水平變化的相關(guān)性研究[J]．中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志，2013， (1)：22-26．

[8] Pay S，Erdem H，Pekel A，et al.Synovial proinflammatory cytokines and their correlationw ithmatrix metalloprote inase-3 expression in Behcets′ disease Does interleuk in-1 beta play a major role in Behcets′ synovitis [J]. Rheumatol, 2006, 26(7):608-613.

[9] 戴冽，湯美安，尹培達(dá)，等. 滑膜巨噬細(xì)胞與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情活動及關(guān)節(jié)破壞的相關(guān)性[J]．中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，1999，3(4)：229-231．

基金項(xiàng)目：湖北省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(B2014176)；鄂州職業(yè)大學(xué)科研重點(diǎn)項(xiàng)目(2015zd06)。

作者簡介：萬進(jìn)軍(1971-)，男，湖北鄂州人，副教授，主要從事藥學(xué)的教學(xué)與科研。

【中圖分類號】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)10-0016-02

(收稿日期：2016.03.27)

Influence of Fagopyrum Dibotrys Medicinal Liquor on IL-22，IL-18 andTNF-α of Collagen-induced Arthritis Model Rats

WAN JinjunPAN Chaowang

Ezhou Polytechnic,Ezhou 436000,China

Abstract:Objective To observe the influence of fagopyrum dibotrys medicinal liquor on IL-22，IL-18 and TNF-αof collagen-induced arthritis model rats.Methods 60 wistar rats were divided into 6 groups at random：blank group, model group,high dose fagopyrum dibotrys group， low dose fagopyrum dibotrys group，and glucosidorum tripterygll totorum group. The rat model of Ⅱ collagen-induced arthritis (CIA) was established. The IL-22，IL-18，TNF-α of the serum and synoviocytes were determined. Results The serum and synoviocytes IL-22，IL-18，TNF-α were increased，compared with blank group. The above index were ameliorated in treatment groups.Conclusion The mechanism of fagopyrum dibotrys medicinal liquor for rheumatoid arthritis maybe related to adjust IL-22，IL-18，TNF-α.

Key words:fagopyrum dibotrys medicinal liquor；collagen-induced arthritis；IL-22；IL-18；TNF-α