生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配對(duì)桃枝枯病菌的毒力

尤春梅，高汝佳，黃沈鑫，汪孝璊，紀(jì)兆林*，董京萍，童蘊(yùn)慧，宋宏峰，徐敬友

(1.揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009；2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所/江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京 210014)

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生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配對(duì)桃枝枯病菌的毒力

尤春梅1，高汝佳1，黃沈鑫1，汪孝璊1，紀(jì)兆林1*，董京萍1，童蘊(yùn)慧1，宋宏峰2，徐敬友1

(1.揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009；2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所/江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京 210014)

摘要[目的]明確生物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配對(duì)桃枝枯病菌的抑制效果。[方法]采用菌絲生長(zhǎng)抑制法，測(cè)定10種生物藥劑對(duì)桃枝枯病菌的毒力，將毒力強(qiáng)的生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥咪鮮胺、多菌靈和烯唑醇進(jìn)行復(fù)配，探討復(fù)配劑對(duì)桃枝枯病菌的聯(lián)合毒力效果。[結(jié)果]毒力作用最強(qiáng)的生物農(nóng)藥是中生菌素，其次是申嗪霉素和梧寧霉素，其抑制中濃度(EC50)分別為0.041 9、0.231 4和0.655 4 μg/mL，與3種化學(xué)藥劑復(fù)配，發(fā)現(xiàn)申嗪霉素與3種化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配均達(dá)到增效作用，而中生菌素和梧寧霉素與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配大多配比具有增效作用或相加作用。[結(jié)論]生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配能增加對(duì)桃枝枯病菌的毒力。

關(guān)鍵詞桃枝枯病菌；生物農(nóng)藥；殺菌劑；毒力測(cè)定；復(fù)配

桃枝枯病，又名縊縮性潰瘍病，由桃擬莖點(diǎn)霉(Phomopsisamygdali)引起，是近幾年我國(guó)南方桃產(chǎn)區(qū)(如江蘇無(wú)錫、常州和浙江嘉興等)新出現(xiàn)并發(fā)生嚴(yán)重的病害[1-4]。該病曾在美國(guó)東部沿海地區(qū)發(fā)生和流行[5-6]。該病主要侵染新梢，通常在新梢基部出現(xiàn)褐斑，后環(huán)狀縊縮擴(kuò)展，致使葉片枯黃、脫落和新枝枯死或折梢枯死，直接影響桃樹(shù)生長(zhǎng)和果實(shí)產(chǎn)量[3-4]。

目前，生產(chǎn)上對(duì)桃枝枯病的防治以化學(xué)防治為主，缺乏生物防治?；瘜W(xué)農(nóng)藥防治桃枝枯病一般采用多菌靈、甲基硫菌靈、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑等殺菌劑[7-8]，如果這些殺菌劑在果園常年使用及用藥量不斷增加，會(huì)使病菌產(chǎn)生抗藥性，導(dǎo)致的環(huán)境污染也日益嚴(yán)重。生物防治具有對(duì)人畜安全、環(huán)境兼容性好、病菌不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，因而日益引起人們的關(guān)注，但是生物防治也存在田間藥效慢、防效不穩(wěn)定等問(wèn)題。而生物與化學(xué)相結(jié)合的病蟲(chóng)害防治策略受到各國(guó)植物保護(hù)專家的重視，因其既能有效控制病蟲(chóng)害，又能降低化學(xué)農(nóng)藥使用量，符合我國(guó)農(nóng)藥減量化政策。目前，利用生物性藥劑及其與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配防治桃枝枯病的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。鑒于此，筆者通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定方法對(duì)有效抑制桃枝枯病菌的生物性農(nóng)藥進(jìn)行了篩選，并探討了其與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配對(duì)病菌的毒力效果，旨在為桃枝枯病的防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌株。桃枝枯病菌為實(shí)驗(yàn)室保存菌株ZN32。試驗(yàn)前于PDA平板上活化。

1.1.2供試藥劑。選擇10 種生物農(nóng)藥進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，其中包括微生物源農(nóng)藥8種：2%武夷霉素水劑(山東省濰坊萬(wàn)勝生物農(nóng)藥有限公司)，2%寧南霉素水劑(黑龍江強(qiáng)爾生化技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)，10%多抗霉素可濕性粉劑(住商農(nóng)資廣州有限公司)，2%春雷霉素水劑(廣東省江門市植保有限公司)，0.3%梧寧霉素水劑(遼寧微克生物工程有限公司)，3%中生菌素可濕性粉劑(廣東省深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司)，1%申嗪霉素懸浮劑(上海農(nóng)樂(lè)生物物品股份有限公司)，10%井岡霉素水劑(福建凱立生物制品有限公司)；植物源農(nóng)藥2種：0.5%小檗堿水劑(浙江華京生物科技開(kāi)放有限公司)，1%蛇床子素水乳劑(江蘇省科農(nóng)化有限責(zé)任公司)。與生物農(nóng)藥復(fù)配的化學(xué)農(nóng)藥有96%咪鮮胺原藥(江蘇輝豐農(nóng)化有限公司)、98%多菌靈原藥(江蘇省太倉(cāng)市農(nóng)藥廠有限公司)、92%烯唑醇原藥(江蘇建農(nóng)農(nóng)藥化工有限公司)。

1.2方法

1.2.1單劑的毒力測(cè)定。在無(wú)菌條件下，將供試藥劑溶解后以滅菌水適當(dāng)稀釋，配制成1×104mg/L母液。將各藥劑用無(wú)菌水稀釋配制成不同濃度的含藥PDA平板。病菌在PDA上25 ℃培養(yǎng)5 d后，用打孔器在菌落邊緣打直徑6 mm的菌餅，用接種針移至含藥 PDA 平板中央。每處理4次重復(fù)，另設(shè)不含藥PDA為對(duì)照。移菌后將PDA平板置于25 ℃下培養(yǎng)，5 d后測(cè)量菌落直徑，并減去接菌餅直徑 6 mm，獲得菌落增長(zhǎng)直徑。計(jì)算出各藥劑濃度的菌絲生長(zhǎng)抑制率[菌絲生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑-處理菌落增長(zhǎng)直徑)/對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑×100%]。對(duì)藥劑濃度對(duì)數(shù)(橫坐標(biāo))及對(duì)應(yīng)的菌絲生長(zhǎng)抑制率幾率值(縱坐標(biāo))進(jìn)行回歸分析，求出毒力回歸方程：y=a+bx，并計(jì)算出藥劑的EC50和相關(guān)系數(shù)。

1.2.2復(fù)配藥劑的毒力測(cè)定。選用對(duì)桃枝枯病菌抑菌作用強(qiáng)的生物農(nóng)藥(以A表示)分別和化學(xué)農(nóng)藥咪鮮胺、多菌靈、烯唑醇(以B表示)按有效成分1∶1、1∶3和3∶1比例進(jìn)行兩兩復(fù)配，制成混劑。移接桃枝枯病菌菌餅(直徑6 mm)分別至含不同濃度配比混劑的PDA平板中央，每處理3次重復(fù)。25 ℃培養(yǎng)5 d后測(cè)量菌落直徑，計(jì)算各配比混劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率。按藥劑濃度對(duì)數(shù)—菌絲生長(zhǎng)抑制率幾率值建立菌株不同配比混劑的毒力回歸方程，計(jì)算EC50。根據(jù)Wadley法評(píng)價(jià)A與B混合后的聯(lián)合毒力作用，計(jì)算SR(增效比)[9]。

EC50(th)=(a+b)/[a/EC(A)50+b/EC(B)50]

SR=EC50(th)/EC50(ob)

式中，a、b分別為單劑在混劑中的比例；EC(A)50、EC(B)50分別為a、b單劑的EC50實(shí)測(cè)值；EC50(th)為混劑的EC50理論值；EC50(ob)為混劑的EC50實(shí)測(cè)值；SR表示a、b單劑混合后的相互作用，當(dāng)SR<0.5時(shí)為拮抗作用，當(dāng)SR=0.5～1.5時(shí)為相加作用，當(dāng)SR>1.5時(shí)為增效作用。

2結(jié)果與分析

2.1不同單劑對(duì)桃枝枯病病菌的毒力由表1可知，毒力最強(qiáng)的生物農(nóng)藥是中生菌素，EC50為0.041 9 μg/mL；其次是申嗪霉素、梧寧霉素和春雷霉素，EC50分別為0.231 4、0.655 4和2.254 5 μg/mL。而寧南霉素、小檗堿和井岡霉素等抑菌作用較差，EC50均值超過(guò)100 μg/mL，特別是井岡霉素的EC50達(dá)14 742.038 3 μg/mL(表1)。因此，可選用中生菌素、申嗪霉素和梧寧霉素與化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行復(fù)配。

表1　不同生物農(nóng)藥對(duì)桃枝枯病菌的毒力

2.2復(fù)配藥劑對(duì)桃枝枯病菌的毒力由表2可知，中生菌素與咪鮮胺在1∶1和1∶3配比的SR值均大于1.5，表現(xiàn)為增效作用，在配比為3∶1時(shí)表現(xiàn)為相加作用；中生菌素與多菌靈的3種配比的SR值均大于1.5，均表現(xiàn)為增效作用；中生菌素與烯唑醇在1∶1復(fù)配時(shí)表現(xiàn)為增效作用，1∶3和3∶1比例復(fù)配時(shí)SR值分別為1.05和 0.83，均表現(xiàn)為相加作用。

表2　中生菌素與化學(xué)藥劑不同配比對(duì)桃枝枯病菌的聯(lián)合毒力

由表3可知，申嗪霉素與咪鮮胺、多菌靈、烯唑醇不同配比的SR值均大于1.5，均表現(xiàn)為增效作用，在配比為3∶1、3∶1和1∶1時(shí)的增效作用最明顯，SR值分別為4.02、2.09和8.19。

由表4可知，梧寧霉素與咪鮮胺配比為1∶3的SR值為5.73，表現(xiàn)為增效作用，而配比1∶1和3∶1的SR值分別為1.35和1.15，表現(xiàn)為相加作用；梧寧霉素與多菌靈配比1∶1為增效作用，1∶3時(shí)為相加作用，3∶1時(shí)表現(xiàn)為拮抗作用；梧寧霉素與烯唑醇復(fù)配除了3∶1配比表現(xiàn)為相加作用外，其他2個(gè)配比(1∶1和1∶3)的SR值分別為1.79、1.86，均為增效作用。

3結(jié)論與討論

室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，10種生物藥劑對(duì)桃枝枯病菌菌絲生長(zhǎng)都有不同程度的抑制作用。從EC50來(lái)看，抑菌能力最強(qiáng)的藥劑是中生菌素，其次是申嗪霉素、梧寧霉素等，而小檗堿、寧南霉素、井岡霉素等抑菌作用較差。與化學(xué)藥劑復(fù)配之后，申嗪霉素與3種化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配均達(dá)到增效作用；除了與咪鮮胺3∶1及烯唑醇1∶3和3∶1復(fù)配配比表現(xiàn)為相加作用，中生菌素與3種化學(xué)農(nóng)藥的其他配比均表現(xiàn)為增效作用；而梧寧霉素除了與多菌靈3∶1配比復(fù)配表現(xiàn)拮抗作用外，與多菌靈其他配比及與其他農(nóng)藥復(fù)配均表現(xiàn)為相加或增效作用。

表3　申嗪霉素與化學(xué)藥劑不同配比對(duì)桃枝枯病菌的聯(lián)合毒力

表4　梧寧霉素與化學(xué)藥劑不同配比對(duì)桃枝枯病菌的聯(lián)合毒力

該研究突破了桃枝枯病目前以化學(xué)農(nóng)藥為主的防治對(duì)策的局限性，利用生物農(nóng)藥與低毒化學(xué)農(nóng)藥的協(xié)同作用進(jìn)行防治研究，室內(nèi)毒力復(fù)配測(cè)定結(jié)果表明中生菌素、申嗪霉素與梧寧霉素與咪鮮胺、多菌靈和烯唑醇等化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配，均有對(duì)桃枝枯病菌有明顯抑制作用的復(fù)配配比，增效比大于1.5?？蛇x用生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥1∶1復(fù)配比進(jìn)一步進(jìn)行田間防病試驗(yàn)，以確定防病效果。另外，復(fù)配藥劑的田間使用方法和防治技術(shù)有待進(jìn)一步探索。

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基金項(xiàng)目揚(yáng)州大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(x2015652)；江蘇省無(wú)錫市農(nóng)業(yè)科技支撐項(xiàng)目(CLE01N1410)；江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項(xiàng)目[CX(14)2015，CX(15)1020]；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-31-2-02)。

作者簡(jiǎn)介尤春梅(1995- )，女，江蘇鹽城人，本科生，專業(yè)：植物保護(hù)。*通訊作者，副教授，博士，從事植物病害防治及分子植物病理學(xué)研究。

收稿日期2016-04-20

中圖分類號(hào)S 436.621.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)15-152-03

Virulence of Biopesticide and Fungicide Complexes on the Pathogen of Peach Shoot Blight

YOU Chun-mei, GAO Ru-jia, HUANG Shen-xin, JI Zhao-lin*et al

(College of Horticulture and Plant Protection, Yangzhou University, Yangzhou, Jiangsu 225009)

Abstract[Objective] To screen the effective biopesticides and their mixtures with fungicides against the pathogen Phomopsis amygdali of peach shoot blight. [Method] The virulence of 10 biopesticides against P. amygdali was tested in the laboratory by mycelial growth inhibition method, and then the mixtures of biopesticides with high virulence and prochloraz, carbendazim and diniconazole respectively, were detected for their laboratory toxicities. [Result] Zhongshengmycin had the strongest virulence, with EC50value of 0.041 9 μg/mL, and shenqinmycin and tetramycin had better antimicrobial effects, with EC50values of 0.231 4 and 0.655 4 μg/mL, respectively. When shenqinmycin was mixed with the three fungicides in different proportion, the synergistic ratio (SR) values were all greater than 1.5, having increased toxicity effect. When mixed with the three fungicides, zhongshengmycin and tetramycin had mixed ratios for additive and synergistic toxicity effects. [Conclusion] The study indicates that the biopesticides mixed with chemical fungicides can increase the toxicity to P. amygdali.

Key wordsPeach shoot blight; Biopesticides; Fungicides; Virulence; Synergism