卵巢癌患者血清腫瘤干細胞標志物CD133和miR-145的臨床價值

王　丹，王　莉，王治潔

(1.同濟大學醫(yī)學院，上海 200092；2.上海市第八人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 200235；3.撫順市中心醫(yī)院婦科，遼寧 撫順 116300)

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卵巢癌患者血清腫瘤干細胞標志物CD133和miR-145的臨床價值

王丹1,2，王莉3，王治潔2

(1.同濟大學醫(yī)學院，上海 200092；2.上海市第八人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 200235；3.撫順市中心醫(yī)院婦科，遼寧 撫順 116300)

[摘要]目的觀察卵巢癌患者血清CD133和miR-145的表達及其對預(yù)后的影響。方法選擇2010年1月至2014年6月在同濟大學醫(yī)學院、上海市第八人民醫(yī)院和撫順中心醫(yī)院手術(shù)的卵巢癌患者84例為卵巢癌組；良性腫瘤手術(shù)的患者30例為對照組。用qRT-PCP的方法測定血清CD133和miR-145相對表達量，分析CD133和miR-145表達量與年齡、腫瘤直徑、病理類型、分化程度、CA125水平和是否轉(zhuǎn)移分期的關(guān)系。結(jié)果卵巢癌患者的血清CD133相對表達明顯高于對照組(t=5.34，P<0.01)，治療后明顯降低(t=8.25，P<0.01)；而miR-145相對表達量明顯低于對照組(t=5.06，P<0.01)，治療后明顯升高(t=10.96，P<0.01)。卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達量與年齡、腫瘤直徑和病理類型無明顯的相關(guān)性(t/F值為0.03～0.93，均P>0.05)，血清CD133和miR-145表達量與腫瘤分化程度、CA125水平、淋巴轉(zhuǎn)移和FIGO分期呈明顯的相關(guān)性(t/F值為2.01～28.96，均P<0.05)。術(shù)后隨訪發(fā)現(xiàn)CD133高表達組的1年復(fù)發(fā)率為76.79%，明顯高于低表達組的42.86%(χ2=8.06，P<0.05)。miR-145高表達組的1年復(fù)發(fā)率為43.59%，明顯低于低表達組的84.44%(χ2=13.67，P<0.05)。結(jié)論CD133在卵巢癌患者的血清呈高表達，而miR-145呈低表達，兩者參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程，兩者聯(lián)合檢測對于診斷和評估預(yù)后具有重要的臨床價值。

[關(guān)鍵詞]卵巢癌；CD133；miR-145；診斷；預(yù)后

卵巢癌是婦科的常見腫瘤，其死亡率為婦科腫瘤的首位，由于其位置較深，起病較為隱匿，缺乏特異性的診斷，5年生存率較低[1]。近年來研究表明腫瘤干細胞是腫瘤發(fā)生發(fā)展的根源。CD133是腫瘤干細胞的常用標記物，與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系[2]。另一類標記物微小RNA(micro RNA，miRNA)參與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展，檢測miRNA對腫瘤診斷和預(yù)后具有重要意義[3]。miR-145與卵巢癌的診斷和預(yù)后是否具有聯(lián)系尚無定論。本組研究對卵巢癌患者血清CD133和miR-145的檢測，探討兩者與卵巢癌的相關(guān)性，為卵巢癌的早期診斷和治療提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1臨床資料

選擇2010年1月至2014年6月在同濟大學醫(yī)學院、上海市第八人民醫(yī)院和撫順中心醫(yī)院手術(shù)的卵巢癌患者84例，為卵巢癌組。所有患者均被病理所證實，平均年齡61.45±9.56(45～80)歲，≥60歲51例，<60歲33例，病理類型：漿液性腺癌37例，黏液性腺癌29例，內(nèi)膜樣腺癌15例和其他類型3例。CA125≥200(IU/mL)30例和<200(IU/mL)54例。按照國際婦科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期分為Ⅰ期18例，Ⅱ期11例，Ⅲ期46例和Ⅳ期9例。根據(jù)所有的患者均獲得完全隨訪資料，且在術(shù)后30d內(nèi)未出現(xiàn)患者死亡；腫瘤的最大直徑不超過10cm；無遠處轉(zhuǎn)移；術(shù)中經(jīng)病理冰凍切片證實未見腫瘤殘留。選擇同期在上海市第八人民醫(yī)院因良性腫瘤手術(shù)的患者約30例，為對照組，平均年齡60.94±10.32(45～80)歲。兩組患者入組時均獲得患者同意，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會通過。兩組的年齡等一般資料差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1血液標本的保存

所有患者術(shù)前2～3天和術(shù)后1個月，采集外周靜脈血約3mL，離心收集血清放置在-80℃的冰箱中待測。

1.2.2CD133和miR-145的測定

抽提細胞總RNA。根據(jù)目標基因的mRNA序列，按照引物設(shè)計的原則，用設(shè)計軟件primer express 3.0設(shè)計并合成qPCR檢測引物及探針。以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，在實時定量PCR儀上進行擴增。采用相對定量的方法對miRNA進行相對量表達進行計算，以2-△△CT法，分析基因相對表達量。所有的操作均嚴格按照試劑盒操作。

1.2.3觀察指標

觀察卵巢癌組和對照組血清CD133和miR-145相對表達量，與年齡、腫瘤直徑、病理類型、分化程度、CA125水平、是否轉(zhuǎn)移及與FIGO分期的關(guān)系；卵巢癌患者術(shù)前術(shù)后血清CD133和miR-145相對表達量的變化及與預(yù)后的關(guān)系。

1.3統(tǒng)計學方法

2結(jié)果

2.1卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達的變化

卵巢癌患者的血清CD133相對表達為8.26±2.73，明顯高于對照組的5.38±1.88，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=5.34，P<0.01)；而miR-145相對表達量為4.39±1.66，明顯低于對照組的6.18±1.67，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=5.06，P<0.01)。

2.2卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達量與臨床病理特征的關(guān)系

卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達量與年齡，腫瘤直徑和病理類型無明顯的相關(guān)性(均P>0.05)，血清CD133和miR-145表達量與腫瘤分化程度、CA125水平、淋巴轉(zhuǎn)移和FIGO分期呈明顯的相關(guān)性(均P<0.05)，見表1。

臨床病理特征例數(shù)(n)血清CD133表達量t/FP血清miR-145表達量t/FP年齡0.170.860.310.76 ≥60歲518.22±2.814.35±1.81 <60歲338.32±2.194.46±1.25腫瘤直徑0.540.590.930.36 ≥3cm478.38±2.494.25±1.57 <3cm378.11±1.924.58±1.68病理類型0.031.020.230.88 漿液性腺癌378.18±2.564.54±1.34 黏液性腺癌298.32±2.084.26±1.78 內(nèi)膜樣腺癌158.34±1.974.31±1.45 其他類型38.28±2.184.28±1.67腫瘤分化程度12.270.0022.390.00 高136.25±2.186.43±1.28 中277.71±2.764.82±1.76 低449.19±1.873.53±1.58CA125(IU/mL)4.260.002.010.04 ≥200309.74±1.763.87±1.56 <200547.44±2.654.68±1.87是否轉(zhuǎn)移6.090.002.4500.02 是3710.72±2.173.72±1.46 否477.44±2.654.62±1.82FIGO分期10.190.0028.960.00 Ⅰ185.89±2.872.27±1.28 Ⅱ117.34±1.813.72±1.67 Ⅲ468.82±2.654.68±1.56 Ⅳ911.26±2.188.00±1.73

2.3卵巢癌除術(shù)前后血清CD133和miR-145表達水平的變化

卵巢癌患者的血清術(shù)前CD133和miR-145相對表達為8.90±2.46和4.39±1.66，治療后CD133的相對表達量為5.76±2.18較治療前明顯降低(t=8.25，P<0.01)，而miR-145相對表達為6.86±1.23，較治療前出現(xiàn)明顯的升高(t=10.96，P<0.01)。

2.4術(shù)前卵巢癌患者血清miR-224和miR-145表達量與卵巢癌患者預(yù)后的關(guān)系

術(shù)后隨訪平均時間為26.83±7.92(6～48)月，按照術(shù)前的卵巢癌患者血清CD133和miR-145相對表達量的平均值，將卵巢癌患者分為高表達組和低表達組。血清CD133高表達組為56例，其1年復(fù)發(fā)率為76.79%(43/56)，低水平表達組為28例，其1年復(fù)發(fā)率為42.86%(12/28)，高表達的復(fù)發(fā)率明顯高于低表達組(χ2=8.06，P<0.05)。血清miR-145高表達39例，其1年復(fù)發(fā)率為43.59%(17/39)，低表達為45例，1年復(fù)發(fā)率為84.44%(38/45)，低表達組的1年復(fù)發(fā)率明顯高于高表達組(χ2=13.67，P<0.05)。

3討論

3.1血清CD133的表達在卵巢癌患者中的臨床價值

本組研究結(jié)果表明，卵巢癌組的血清CD133相對表達量明顯高于對照組(P<0.05)，同時發(fā)現(xiàn)CD133血清相對表達量與腫瘤的分化程度具有明顯相關(guān)性(P<0.05)，腫瘤的分化程度越低，血清的CD133水平表達越高；同時還發(fā)現(xiàn)與卵巢癌患者的淋巴轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性(P<0.05)，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者，血清的CD133表達水平也就越高；與腫瘤分期也具有明顯的相關(guān)性(P<0.05)，腫瘤的分期越高，患者血清表達量也就越高。說明CD133是卵巢癌患者評價腫瘤惡性程度和預(yù)后的重要指標，對于早發(fā)現(xiàn)卵巢癌，評估卵巢癌的病情具有重要意義。本研究實驗還發(fā)現(xiàn)，CD133陽性的患者其1年復(fù)發(fā)率明顯高于陰性的患者(P<0.05)，說明CD133是卵巢癌重要的預(yù)后指標。與CD133陽性卵巢癌的功能特性具有內(nèi)在聯(lián)系，現(xiàn)已知CD133陽性的細胞有利于脈管系統(tǒng)的形成，參與新生血管的生成，對卵巢癌細胞的生長，增殖，浸潤，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的過程中具有重要的意義，越來越多的實驗表明CD133可能成為腫瘤干細胞的特異性標記物，CD133表達的卵巢癌更具有增殖和可能形成能力，并且與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)[4]。本組研究還發(fā)現(xiàn)CD133表達量與血清CA125水平具有明顯的正相關(guān)性(P<0.05)，大量的研究結(jié)果證實CA125與卵巢癌的早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)后監(jiān)測中具有重要意義，而本組發(fā)現(xiàn)血清CD133的檢測與CA125具有明顯的聯(lián)系(P<0.05)，CD133可能成為早期發(fā)現(xiàn)卵巢癌的腫瘤標記物，并成為評估病情和估計預(yù)后的重要指標，其確切的相關(guān)性需要進一步的實驗研究。

3.2血清miR-145的表達在卵巢癌患者中的臨床價值

本組研究結(jié)果表明，卵巢癌患者血清表達miR-145水平明顯低于對照組(P<0.05)。miR-145最早在結(jié)腸癌中發(fā)現(xiàn)低表達，隨后在其他組織中也發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)明顯的下調(diào)如卵巢癌，前列腺癌，肺癌和乳腺癌等[5-6]。本組研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-145表達與腫瘤的分化程度，腫瘤分期和腫瘤是否有淋巴轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性(P<0.05)，腫瘤的分化程度越高，分期越早和淋巴結(jié)未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者血清表達miR-145相對水平較高，故miR-145表達是卵巢癌的保護因素，與文獻報道類似[7]。本研究還發(fā)現(xiàn)miR-145表達水平與CA125水平呈明顯負相關(guān)，而CA125為卵巢癌非特異性的腫瘤指標，故 miR-145有可能同樣成為卵巢癌的腫瘤指標?，F(xiàn)已知miRNA是一類高度保守的非編碼單鏈小分子RNA，廣泛存在大多數(shù)的真核細胞中。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，對腫瘤發(fā)生發(fā)展多個環(huán)節(jié)進行調(diào)節(jié)，參與細胞增殖，分化，侵襲和轉(zhuǎn)移等過程[8-9]。因此推測miR-145作為一種抑癌基因，在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，可能作為新的治療靶點在卵巢癌的治療中發(fā)揮重要作用。本組研究發(fā)現(xiàn)miR-145表達低的卵巢癌患者的1年復(fù)發(fā)率明顯高于表達高的患者，說明miR-145的表達與卵巢癌具有明顯的相關(guān)性。故miR-145調(diào)控著卵巢癌細胞的生長和侵襲，并影響卵巢癌的預(yù)后，推測miR-145可能作為卵巢癌新的標記物作為卵巢癌早期診斷和預(yù)后的評估。

總之，CD133在卵巢癌患者的血清呈高表達，而miR-145呈低表達，兩者參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程，兩者聯(lián)合檢測對于診斷和評估預(yù)后具有重要的臨床價值。

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[專業(yè)責任編輯：張忠明]

[收稿日期]2015-09-24

[基金項目]上海市徐匯區(qū)衛(wèi)生局醫(yī)學科研課題青年資助項目(編號：SHXp01207)

[作者簡介]王丹(1980-)，女，主治醫(yī)師，主要從事卵巢癌的基礎(chǔ)和臨床研究。

[通訊作者]王治潔，主任醫(yī)師。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.015

[中圖分類號]R711.7

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5293(2016)04-0460-03

Clinical significance of serum tumor stem cell marker CD133 and miR-145 in patients with ovarian cancer

WANG Dan1,2, WANG Li3, WANG Zhi-jie2

(1.Medical College of Tongji University, Shanghai 200092, China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology,Shanghai Eighth People’s Hospital, Shanghai 200235, China; 3.Department of Gynecology,Liaoning Fushun Central Hospital, Liaoning Fushun 116300, China)

[Abstract]Objective To observe the expressions of serum CD133 and miR-145 in patients with ovarian cancer and their impact on prognosis. Methods From January 2010 to June 2014 totally 84 cases of ovarian cancer undergoing surgery in Medical College of Tongji University, Shanghai Eighth People’s Hospital or Fushun Central Hospital were selected in ovarian cancer group. Thirty cases of benign tumor were selected in control group. The serum expressions of CD133 and miR-145 were detected by qRT-PCP method, and the relationship between them and age, tumor size, histological type, degree of differentiation, CA125 level as well as metastasis were analyzed. Results The serum CD133 expression level in ovarian cancer group was significantly higher than that in the control group (t=5.34, P<0.01) and significantly lowered after surgery compared with that before surgery (t=8.25, P<0.01). The expression level of miR-145 was significantly lower than that in the control group (t=5.06,P<0.01) and significantly increased after surgery than that before surgery (t=10.96, P<0.01). CD133 and miR-145 expressions in ovarian cancer patients were not significantly correlated with age, tumor size and histological type (t/F value ranged 0.03-0.93, all P>0.05), but they were obviously correlated with tumor differentiation, CA125 level, lymph node metastasis and FIGO stage (t/F value ranged 2.01-28.96, all P<0.05). Postoperative follow-up revealed that the 1-year recurrence rate was 76.79% in patients with high expression of CD133, which was significantly higher than 42.86% in patients with low expression (χ2=8.06,P<0.05). In patients with high expression of miR-145 1-year recurrence rate was 43.59%, which was significantly lower than 84.44% in those with low expression (χ2=13.63,P<0.05).Conclusion The serum expression of CD133 is high but miR-145 is low in patients with ovarian cancer. They both involve in the development and progression of ovarian cancer, and combining detection of them is of great clinical significance in diagnosis and assessment of prognosis.

[Key words]ovarian cancer; CD133; miR-145; diagnosis; prognosis