食蟹猴群體B病毒流行病學(xué)調(diào)查

田朝陽，馮國勝，王開敏，洪傳緒，楊穎珊，馬原野

(1.海南金港生物技術(shù)股份有限公司，海南?？?571100；2.中國科學(xué)院生物物理研究所，北京 100101)

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食蟹猴群體B病毒流行病學(xué)調(diào)查

田朝陽1，馮國勝1，王開敏1，洪傳緒1，楊穎珊1，馬原野2

(1.海南金港生物技術(shù)股份有限公司，海南?？?571100；2.中國科學(xué)院生物物理研究所，北京 100101)

摘要對2012～2015年食蟹猴群體BV感染情況進行檢測，并提出綜合控制措施，旨在為制訂規(guī)范化、標準化和科學(xué)化的食蟹猴群體標準化生產(chǎn)管理技術(shù)體系提供參考。

關(guān)鍵詞食蟹猴；B病毒；控制措施

B病毒(B virus，BV)是一種人畜共患病原，是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能感染人的動物源性α皰疹病毒，因此它是非人靈長類動物質(zhì)量控制的必檢項目。該病毒具有感染率高、隱性感染和病毒在機體內(nèi)長期潛伏、猴一旦感染B病毒將在機體內(nèi)終身潛伏、不定期活化等特點[1]，主要以恒河猴和食蟹猴等為自然宿主。感染動物黏液、皮膚、口腔、生殖道分泌物均可傳染給其他動物[2]。B病毒感染的臨床癥狀不明顯，不易發(fā)現(xiàn)，且試驗猴一般采用欄舍群養(yǎng)，這就為規(guī)?；囼灪镳B(yǎng)殖場帶來了極大的質(zhì)量與安全風險，極易導(dǎo)致群體內(nèi)部的傳染，也容易導(dǎo)致實驗動物從業(yè)人員的感染。如何做好試驗猴群B病毒感染的防控工作，提高動物產(chǎn)品的質(zhì)量和保障從業(yè)人員的健康與安全已成為亟待解決的問題。筆者對2012～2015年試驗食蟹猴群體BV的感染情況進行檢測，并提出了綜合防控措施，以期為制定規(guī)范化、標準化和科學(xué)化的食蟹猴群體標準化生產(chǎn)管理技術(shù)體系提供參考。

1材料與方法

1.1試驗動物海南金港生物技術(shù)股份有限公司的存欄商品食蟹猴陰性群，且已在斷奶離乳階段做過B病毒檢測，結(jié)果均為陰性。所有動物均建有完整的系譜檔案資料，每年定期進行健康檢查，檢查內(nèi)容包括猴ID號的核對、頸圈更換、TB和BV檢測等。

1.2血清的制備在商品猴群年度健康檢查中，動物逐只腹股溝靜脈采血約1 mL，3 500 r/min離心5 min后取血清，樣本做好標記后可置于4 ℃下短暫保存，若超過3 d，應(yīng)放置于-20 ℃凍存待測。

1.3測定方法猴BV抗體檢測試劑盒購自蘇州西山生物技術(shù)有限公司(VRL China)，儲存于4 ℃冰箱中備用。此試劑盒的檢測方法為斑點免疫(Dot immunoassay，DIA)，檢測實驗猴血清中抗B病毒抗體IgG，按照檢測試劑盒說明書進行BV的血清學(xué)抗體檢測與結(jié)果判定。

2結(jié)果與分析

由表1可知，2012～2014年食蟹猴群體BV檢測樣本量分別為1 925、4 906和3 210份，BV陰性率分別為95.4%、96.8%和96.0%，BV轉(zhuǎn)陽率(包括陽性率和可疑率)分別為4.6%、3.2%和4.0%，總體轉(zhuǎn)陽率較為穩(wěn)定，約為4%。

表12012～2014年食蟹猴群體BV篩查結(jié)果

Table 1Results of BV screening test on cynomolgus monkeys in 2012-2014

年份Year樣本量SamplequantityBV檢測結(jié)果ResultofBVtest陽性(+)Positive可疑(±)Indeterminate陰性(-)Negative2012192520(1.0%)69(3.6%)1836(95.4%)20134906116(2.4%)40(0.8%)4750(96.8%)2014321074(2.3%)54(1.7%)3082(96.0%)

由表2可知，2013～2015年送檢蘇州西山生物技術(shù)有限公司(VRL China)的BV檢測樣本量依次為1 324、2 423和3 105份，BV陰性率分別為97.6%、98.4%和96.1%，轉(zhuǎn)陽率(包括陽性率和可疑率)分別為2.4%、1.6%和3.9%，總體轉(zhuǎn)陽率較為穩(wěn)定，均在4%以下。

表2　2013～2015年食蟹猴群體BV送檢結(jié)果(蘇州VRL實驗室檢測)

3討論

由于大多數(shù)實驗猴養(yǎng)殖場采用BV陽性母猴繁殖BV抗體陰性仔猴的養(yǎng)殖模式[3]，即使在離乳階段進行了BV篩查與分群飼養(yǎng)，仍難以維持BV陰性的狀態(tài)，群體內(nèi)依然會出現(xiàn)不同程度的轉(zhuǎn)陽情況，從而給公司帶來嚴重的經(jīng)濟損失，因為BV抗體陽性動物基本無市場銷售價值，只能留做種用或淘汰。該研究結(jié)果表明食蟹猴群體內(nèi)BV轉(zhuǎn)陽率約為4%，略低于黃騰飛等[4]報道的食蟹猴生長猴BV陽性率(6.16%)，遠低于王吉等[5]用ELISA方法檢測2003～2008年試驗猴血清BV抗體陽性率(32.46%～48.29%)。究其原因，首先，這是因為BV在其自然宿主體內(nèi)幾乎不會導(dǎo)致嚴重的疾病，通常不表現(xiàn)出任何明顯的臨床癥狀[6]，有時在舌背面和口腔黏膜與皮膚交界的口唇部及口腔內(nèi)其他部位出現(xiàn)充滿液體的小皰疹，這些皰疹最終破裂形成潰瘍，表面覆蓋著纖維素性壞死性痂皮，常在7～14 d自愈，不留瘢痕[7]，致使不易察覺和發(fā)現(xiàn)。其次，目前采用的BV抗體檢測方法盡管已經(jīng)十分完善，但沒有檢測方法是十全十美的。有些動物抗體的產(chǎn)生是一個動態(tài)變化的過程，這使得BV抗體檢測方法進一步受挫，導(dǎo)致BV陰性群體中存在一些假陰性的個體。因此，建立真正的無BV食蟹猴群體是非常困難的。

為有效控制食蟹猴群體的BV轉(zhuǎn)陽率，應(yīng)做好以下綜合控制措施：①提高防控食蟹猴群體BV重要性的認識，建立貫穿其一生(從離乳至銷售)的BV篩查制度，包括從離乳猴開始的BV定期篩查制度，每年至少開展1次病毒抗體篩查，及時從陰性群體中調(diào)出陽性猴，控制BV感染源。只有持之以恒地嚴格貫徹上述篩查制度，才能收獲食蟹猴群體低BV轉(zhuǎn)陽率的成果。②只有充分維護和保障動物福利，如降低群養(yǎng)密度，增加娛樂玩具，保持欄舍衛(wèi)生和滿足營養(yǎng)需求等，滿足動物的五大自由要求，才能確保其“身心健康”[8]，減少應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，降低BV在食蟹猴群體內(nèi)的傳染。研究表明，感染BV的獼猴在打斗、運輸、免疫抑制或一個新的居住環(huán)境有關(guān)的壓力下可以激活并釋放BV[6]，導(dǎo)致猴群內(nèi)BV感染與傳播。海南省與食蟹猴的原產(chǎn)地氣候環(huán)境條件極為相似，均為熱帶海洋性氣候，動物不易受環(huán)境的影響，尤其是低溫嚴寒等極端天氣的影響；海南島盛產(chǎn)熱帶水果(如木瓜、西瓜、香蕉、番石榴、哈密瓜等)，這些水果作為食蟹猴日常所需青綠飼料的來源，既能滿足動物的營養(yǎng)需要，又能增加動物的適口性和采食娛樂性。海南金港生物技術(shù)股份有限公司熱帶植物豐富，綠化率非常高，優(yōu)美宜人的清新環(huán)境，加上欄舍內(nèi)設(shè)置了秋千、棲息架和不銹鋼球等娛樂裝置，這些都有利于減緩動物的壓力和維護動物身心健康，保障動物的健康成長。③重視生產(chǎn)管理制度建設(shè)，善于總結(jié)生產(chǎn)實踐過程中的成功經(jīng)驗，定期進行管理制度的修訂與完善。海南金港生物技術(shù)股份有限公司已完成5版生產(chǎn)管理制度的修訂工作，并將工作中總結(jié)的經(jīng)驗申請并授權(quán)發(fā)明專利2項和實用新型專利1項。④重視從業(yè)人員的培養(yǎng)與再教育，教育培訓(xùn)方式包括專題教育、崗前培訓(xùn)、繼續(xù)教育課程、情景模擬法等[9]，提高實驗動物管理技能水平，做好人畜共患病的防控工作，更好地做好實驗動物的標準化生產(chǎn)管理工作。實驗動物從業(yè)人員普遍學(xué)歷層次較低，接受能力較差，需要采取“傳幫帶”的培養(yǎng)模式，讓其熟悉崗位職責與要求，并做好相關(guān)標準操作規(guī)程的培訓(xùn)與考核工作，只有這樣才能勝任實驗動物管理的工作要求。

總之，做好群體動物BV定期篩查與陽性動物隔離工作，重視動物福利和加強實驗動物日常管理就是食蟹猴群體B病毒感染的控制措施，這些成功的實踐經(jīng)驗值得在同行間推廣，進而提高整個非人靈長類實驗動物行業(yè)的管理水平。

參考文獻

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基金項目海南省重點科技計劃項目(ZDXM20110035)。

作者簡介田朝陽(1981- )，男，河南南陽人，助理研究員，碩士，從事靈長類實驗動物質(zhì)量控制管理工作。

收稿日期2016-04-13

中圖分類號S 865.1+6;Q 95-331

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)14-118-02

Epidemiological Investigation on B Virus in Cynomolgus Monkeys

TIAN Chao-yang, FENG Guo-sheng, WANG Kai-min et al

(1. Hainan Jingang Biotech Co., Ltd., Haikou, Hainan 571100; 2.The Institute of Biophysics of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101)

AbstractThe BV (B virus) infection situation in the cynomolgus monkeys was detected in 2012-2015. Comprehensive control measures were put forward, aiming at providing references for the establishment of standardized and scientific management system of cynomolgus monkeys.

Key wordsCynomolgus monkeys; B virus; Prevention methods