HPLC法測定逍遙散中芍藥苷的含量

梁萍 彭建彪 龍凱

【摘 要】 目的：建立逍遙散中芍藥苷的測定方法。方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（Durashell C18柱；250×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84）；檢測波長：230nm；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃。結(jié)果：芍藥苷在0.0423～0.4234μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r=0.9996，平均回收率為99.95%（RSD=1.73%，n=6）。結(jié)論：本方法專屬性強，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性良好，可用于逍遙散的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 逍遙散；含量測定；芍藥苷；HPLC

【中圖分類號】R286.0 【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）11-0017-02

Abstract：Objective To establish a method for determination of paeoniflorin in Xiaoyao Powder. Method Eighteen using C18 column chromatography （Durashell C18 column；250×4.6mm，5μm）；The mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric acid solution （16∶84）；Detection wavelength： 230nm；Flow rate： 1.0ml/min；column temperature：30℃.Result Paeoniflorin in 0.0423μg ～ 0.4234μg range showed a good linear relationship（r=0.9996），The average recovery was 99.95% （RSD=1.73%， n=6）.Conclusion The method has strong specificity and high accuracy，Good reproducibility， can be used for the quality control of Xiaoyao Powder.

Keywords：Xiaoyao Powder；Determination； Paeoniflorin； HPLC

逍遙散為云南省個舊市中醫(yī)院制劑，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為滇ZJGF/2005-721.逍遙散由柴胡、當(dāng)歸、白芍、薄荷等七味藥制備而成，具有疏肝解郁、健脾和胃的功效。處方中白芍為方中主藥，白芍的主要活性成分為芍藥苷，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未測定芍藥苷不夠全面，為保證該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，研究采用高效液相色譜法（HPLC）對處方中白芍主要活性成分芍藥苷進行定量研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1260型高效液相色譜儀；Sartorius BP211D電子天平，奧豪斯AR224CN電子天平。

1.2 試藥 芍藥苷對照品（批號：110736-201438，中國食品藥品檢定研究院）；逍遙散（批號：20150814、20151013、20151108、20151215，云南省個舊市中醫(yī)院）。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純；

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Durashell C18 （4.6×250mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84）；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長[1]：230nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加甲醇制成每1ml含芍藥苷40μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備[1] 取本品約0.3g，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml，超聲處理（功率240W，頻率45KHz）30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備 取缺白芍的陰性樣品0.3g，按“2.3”項供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.5 專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果供試品色譜中呈現(xiàn)與對照品保留時間一致的色譜峰，陰性樣品在與芍藥苷對照品相同的保留時間處未顯色譜峰，可見其他原輔料對主成分無干擾。（見圖1）。

2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取2.2中對照品溶液（每1ml含芍藥苷42.3389μg）1、2、4、8、10μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以芍藥苷峰面積為縱坐標(biāo)，進樣量為橫坐標(biāo)作線性回歸，結(jié)果峰面積Y與其進樣量X（μg）之間呈良好的線性關(guān)系，芍藥苷的線性范圍為：0.0423～0.4234μg，回歸方程為：Y=1265.48236X-8.172520，r=9996。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一逍遙散供試品溶液按上述色譜條件分別在0、1、2、4、8、12h時進樣測定，測得芍藥苷峰面積分別為472.49792、476.46701、476.68494、476.56143、475.38214、477.20706，RSD為0.37%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗 精密吸取對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測定5次，測得芍藥苷峰面積分別為：537.34906、537.89551、538.09821、538.14862、538.51733、527.16009，RSD為0.83%，結(jié)果表明精密度良好。

2.9 重復(fù)性試驗 取同一批號（批號20150814）樣品，按供試品溶液制備項下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測定，芍藥苷的平均含量為6.2130mg/g，RSD為0.76%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗 精密稱取6份供試品（批號：20150814，已測芍藥苷含量為6.2130mg/g），每份約0.15g，按1∶[KG-*2]1比例加入芍藥苷對照品，即加入芍藥苷對照品溶液（芍藥苷濃度0.2117mg/ml）4.5ml，揮去溶劑。然后按供試品溶液處理方法同法處理，將處理好的供試品溶液按含量測定方法同法測定，計算回收率，芍藥苷的平均回收率為99.95%，RSD為1.73%。結(jié)果見表1。

2.11 樣品含量測定 取4批逍遙散樣品，按供試品溶液的制備方法操作，按“2.1”項下色譜條件測定芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 芍藥苷[2] 具有擴張血管、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗炎抗?jié)?、解熱解痙、利尿的作用。芍藥苷是處方中主藥白芍的主要活性成分，且其含量也相對較高，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未測定芍藥苷不夠全面，通過試驗用HPLC法測定逍遙散中芍藥苷的含量。

3.2 方中白芍直接粉碎入藥，參照2015年版《中國藥典》一部白芍含量測定項 下的提取方法，用稀乙醇超聲30min提取白芍中芍藥苷較為完全 。

3.3 經(jīng)試驗，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84），流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：230nm，測得結(jié)果比較理想。本法專屬性強，操作方便，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性良好，可以用于逍遙散的質(zhì)量控制。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：105.

[2]吳春福.芍藥及其化學(xué)成分的藥理學(xué)研究概況[J].中藥通報，1985，10（6）：43-46.

（收稿日期：2016.04.08）