楊干瘤潰瘍病原菌生物學(xué)測(cè)試及林間防病藥品篩選

孫玉梅

摘要：為控制病害提供數(shù)據(jù)支持，做了病原菌生物學(xué)測(cè)試及林間防病藥品的篩選。結(jié)果，pH值2.5～8.5間茵體都能存活生長(zhǎng)，pH值5.5茵體生長(zhǎng)最旺盛；攝氏溫度25℃恒溫條件下茵體生長(zhǎng)旺盛，5～35℃都能生長(zhǎng)，40℃不生長(zhǎng)。林間防病藥品篩選70%甲基托布津和2：2：100波爾多液2種藥品治愈病瘤傷口效果較好。

關(guān)鍵詞：楊干瘤潰瘍；病原菌生物學(xué)；林間防病藥品

楊干瘤潰瘍是近幾年在遼寧省朝陽(yáng)地區(qū)出現(xiàn)較多對(duì)林木損害嚴(yán)重的楊樹(shù)樹(shù)干病害。經(jīng)檢測(cè)鑒定，認(rèn)為病原菌是鞠國(guó)柱教授提出的東北球腔菌（Mycosphaerella mandshurica），無(wú)性孢子時(shí)代屬于半知菌類(lèi)的楊棒盤(pán)孢（Coryneum populinum Bresad.）。病瘤潰瘍是楊樹(shù)灰斑病疫苗的黑脖子病灶部位在林間的表現(xiàn)癥狀。筆者做了不同pH值、不同溫度對(duì)病菌生長(zhǎng)影響測(cè)試和林間防病藥品篩選的探討。

1試驗(yàn)材料

1.1病菌材料采集

2013年5月，在遼寧省朝陽(yáng)縣廿家子林場(chǎng)5年生楊樹(shù)樹(shù)干上取瘤狀病灶，取樣部位在病瘤與健康部位的交界處。用解剖刀將樹(shù)皮和木質(zhì)淺層割下帶回室內(nèi)，在70%酒精中浸泡1min，再放人1/4漂白粉溶液中浸泡3min，取出用蒸餾水洗3遍，放入4℃的冰箱中備用。

1.2農(nóng)藥品種

①50%多菌靈WP呵濕粉），江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；②70%甲基托布津WP，江蘇龍燈化學(xué)有限公司；③2：2：100波爾多液WP，美國(guó)仙農(nóng)有限公司，④20%腐必清乳油，遼寧省微生物研究所（遼寧朝陽(yáng)）。

2試驗(yàn)方法

2.1 pH值對(duì)病菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)

將病菌接種到pH值2.5～9.5的PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂）試管斜面培養(yǎng)基上觀察生長(zhǎng)狀況。操作分3步：（1）將試驗(yàn)病菌材切碎，用紗布過(guò)濾，使病菌入無(wú)菌水中形成菌液，放在PDA平板培養(yǎng)基上，在25℃恒溫箱中懸滴培養(yǎng)。（2）用HCL（鹽酸）和NaOH（氫氧化鈉）將PDA培養(yǎng)基原料在pH計(jì)的監(jiān)測(cè)下調(diào)釋成2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5、8.5、9.5的8種pH值培養(yǎng)基料，然后各自裝入22cm試管中形成200mm²斜面培養(yǎng)基。（3）將平板培養(yǎng)基上的病菌切成直徑5mm²菌塊分別接入各pH值試管斜面培養(yǎng)基上。每pH值5個(gè)重復(fù)，在25℃恒溫下懸滴培養(yǎng)150 h觀察菌落生長(zhǎng)狀況。

2.2溫度對(duì)病菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)

將直徑5mm2個(gè)菌塊接種在PDA試管斜面200mm²培養(yǎng)基上，置于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃的恒溫箱中懸滴培養(yǎng)150 h觀察菌落生長(zhǎng)狀況。每溫度處理3個(gè)重復(fù)。

2.3林間防治藥品篩選

2.3.1標(biāo)準(zhǔn)地概況。2014年5月在遼寧省朝陽(yáng)縣尚志鄉(xiāng)7林班12小班4齡楊樹(shù)林，隨機(jī)選擇120株楊干瘤潰瘍樹(shù)做試驗(yàn)，另選30株病樹(shù)做對(duì)照組。該林分面積10hm²，宏觀遠(yuǎn)望林相整齊，樹(shù)勢(shì)旺盛。但是林內(nèi)樹(shù)干瘤狀潰瘍株率占95%，瘤體樹(shù)皮外翻開(kāi)裂，每個(gè)病瘤上面開(kāi)裂傷口1～10個(gè)不等，病瘤潰瘍液大量的流淌。

2.3.2施藥方法。用板刷沾藥涂于病瘤開(kāi)裂傷口處，連涂3次，間隔7天1次。4種供試藥品施用濃度分別為：50%多菌靈5倍液、70%甲基托布津5倍液、2：2：100波爾多液原劑、20%腐必清乳油5倍液。每種藥品各涂病樹(shù)30株。

2.3.3藥效調(diào)查和資料統(tǒng)計(jì)分析方法。第3次涂藥結(jié)束30天以后調(diào)查防治瘤體開(kāi)裂傷口癔合數(shù)量。每藥品防病效果按10株為1個(gè)單元組，3次重復(fù)做數(shù)據(jù)整理統(tǒng)計(jì)分析，多重比較用q檢驗(yàn)方法。

3結(jié)果分析

3.1 pH值對(duì)病原菌生長(zhǎng)影響分析

用PDA試管斜面培養(yǎng)基在25℃恒溫下懸滴培養(yǎng)150h觀察各pH值菌落生長(zhǎng)狀況各不相同，見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn)，菌落在pH值2.5～8.5之間都可存活生長(zhǎng)，最適宜為pH值5.5。當(dāng)pH值為2.5和8.5時(shí)菌落平面只增加3mm²，當(dāng)pH值9.5時(shí)菌株頻于死亡。說(shuō)明該菌耐酸性好于耐堿性，弱堿能影響菌的生長(zhǎng)，強(qiáng)堿可抑制菌的生命。

3.2溫度對(duì)病菌生長(zhǎng)影響分析

用PDA試管斜面培養(yǎng)基懸滴培養(yǎng)150 h，5℃、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%8個(gè)溫度處理菌落生長(zhǎng)狀況各不相同，結(jié)果見(jiàn)表2，病菌在25℃恒溫下生長(zhǎng)旺盛。5℃生長(zhǎng)量很小。40%不生長(zhǎng)，顏色焦暗。

3.3林間防治藥品篩選

4種藥品防治楊干瘤潰瘍都有不同程度的治癔傷口和抑制潰瘍的作用，愈合的病瘤全部停止流淌潰瘍液。各藥品處理單株傷口平均愈合率見(jiàn)表3。

因?yàn)閷?duì)照組病瘤傷口數(shù)量不減反增，計(jì)算傷口校對(duì)平均癔合率已經(jīng)無(wú)意義，因此直接用表3做百分?jǐn)?shù)反正弦換算，見(jiàn)表4。

用表4數(shù)據(jù)做方差分析，見(jiàn)表5。F檢驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)=5.41>F_0.053，8）=4.07，差異顯著。

用q檢驗(yàn)方法做各藥品間多重比較，見(jiàn)表6。通過(guò)q檢驗(yàn)70%甲基托布津與2：2：100波爾多液之間差異不顯著1.980.05（3.8）=4.04，甲基托布津與多菌靈或腐必清之間比較差異極顯著。

4結(jié)論

通過(guò)病原菌生物學(xué)測(cè)試和林間防病農(nóng)藥品種的篩選，明確了3項(xiàng)結(jié)果：

（1）楊干瘤潰瘍病原菌生長(zhǎng)最宜pH值是5.5，pH值2.5～8.5之間菌體可存活或生長(zhǎng)，pH值9.5菌體不生長(zhǎng)，頻于死亡。

（2）病菌在25℃恒溫條件下生長(zhǎng)旺盛。5～35%均可生長(zhǎng)。溫度低不如溫度高生長(zhǎng)快。當(dāng)恒溫40%時(shí)菌體不生長(zhǎng)。

（3）4種農(nóng)藥防治楊干瘤潰瘍都有治癔傷口抑制潰瘍作用。其中，70%甲基托布津和2：2：100波爾多液2種藥品防治楊干瘤潰瘍效果較好，可在生產(chǎn)中應(yīng)用。