扶芳藤醇提液對(duì)小鼠凝血四項(xiàng)的影響

蔣力群霍 宇楊 捷（ 中國人民解放軍第303醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530000； 廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 530；3 中國人民解放軍第303醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530000）

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扶芳藤醇提液對(duì)小鼠凝血四項(xiàng)的影響

蔣力群1霍 宇2楊 捷3*
（1 中國人民解放軍第303醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530000；2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 530222；3 中國人民解放軍第303醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530000）

【摘要】目的 研究中藥扶芳藤的凝血作用。方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組、扶芳藤醇提液高、中、低劑量組，測定扶芳藤醇提液對(duì)對(duì)小鼠凝血酶時(shí)間（TT）、凝血酶原時(shí)間（PT），活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）和纖維蛋白原（FIB）的影響。結(jié)果 扶芳藤醇提液能明顯縮短小鼠TT、PT、APTT，增加FIB含量。結(jié)論 扶芳藤醇提液具有顯著的凝血作用。

【關(guān)鍵詞】扶芳藤；凝血時(shí)間；凝血四項(xiàng)

扶芳藤（Enonymus fortunei （Ture.）Hand-Mazz）系衛(wèi)矛科衛(wèi)矛屬植物，屬民間草藥。《中藥大辭典》記載“扶芳藤治腰肌勞損，關(guān)節(jié)酸痛、補(bǔ)腎強(qiáng)筋，安胎，止血消癖”［1-2］。本實(shí)驗(yàn)在前期研究工作基礎(chǔ)上以云南白藥為陽性對(duì)照藥物，驗(yàn)證中藥扶芳藤的凝血作用，探討其作用機(jī)制，為中藥扶芳藤下一步開發(fā)利用應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物及試劑：扶芳藤原藥材由廣西中醫(yī)學(xué)院制藥廠科研所提供，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院苑敏教授鑒定，藥材用12倍量60%乙醇，提取2次，每次1 h，3.8 g生藥/g；實(shí)驗(yàn)時(shí)以蒸餾水配成所需濃度；云南白藥（批號(hào)：20080629），云南白藥集團(tuán)股份有限公司；109 mmol/L枸櫞酸鈉溶液（批號(hào)：20060323），廣東達(dá)濠精細(xì)化學(xué)品公司；凝血酶原時(shí)間（PT）試劑盒（批號(hào)：105090），北京萊博生物實(shí)驗(yàn)材料研究所；活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）試劑盒（批號(hào)：111021），北京萊博生物實(shí)驗(yàn)材料研究所；凝血酶時(shí)間（TT）試劑盒（批號(hào)：111027），北京萊博生物實(shí)驗(yàn)材料研究所；纖維蛋白原（FIB）試劑盒（批號(hào)：1110131），北京萊博生物實(shí)驗(yàn)材料研究所。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，雌雄兼用，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào)：SCXK桂2009-0002，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由攝食，自由飲水。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)（桂）醫(yī)動(dòng)字第12006號(hào)，使用許可證號(hào)SYXK（桂）2003-0001。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器：Sysn ECA-150型全自動(dòng)血凝儀，日本東亞醫(yī)用電子儀器有限公司；TU-1901型紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法［3］：取健康昆明種小鼠60只，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄兼用，隨機(jī)分成5組，12只/組。即空白對(duì)照組（生理鹽水，NS）、陽性藥對(duì)照組、扶芳藤醇提液高、中、低三個(gè)劑量組?？瞻讓?duì)照組給予等容積NS，陽性對(duì)照組給予云南白藥1 g/kg，用藥組高劑量組（18 g生藥/kg），中劑量組（9 g生藥/kg），低劑量組（4.5 g生藥/kg），灌胃給藥（ig），給藥容量為20 mL/kg。每天給1次，連續(xù)7 d。末次給藥后1 h，拔眼球取血1.5 mL，緩慢注入含0.5 mL 109 mmol/L枸櫞酸納溶液的塑料試管中，充分混勻。以3000 rpm離心15 min去除血小板，分離血漿，采用Sysn ECA-150型全自動(dòng)血凝儀，測定凝血四項(xiàng)：凝血酶原時(shí)間（PT）、激活部分凝血酶原時(shí)間（APTT）、凝血酶時(shí)間（TT）、纖維蛋白原含量（FIB）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析，以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

云南白藥與扶芳藤醇提液高、中、低劑量組均能明顯縮短實(shí)驗(yàn)小鼠PT、APTT和TT，提高血漿FIB，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 扶芳藤醇提液對(duì)小鼠PT、APTT、TT、FIB的影響（±s）

表1 扶芳藤醇提液對(duì)小鼠PT、APTT、TT、FIB的影響（±s）

注：與空白對(duì)照組組比較*P＜0.05，**P＜0.01

組 別　　劑量（g/kg）　n　PT（sec）　APTT（sec）　TT（sec）　FIB（g/L）空白組　-　12　8.79±1.02　21.74±1.58　24.78±3.09　1.76±0.39云南白藥組　1　12　7.14±0.42**　17.24±1.23**　18.21±1.21**　2.94±0.63**高劑量組　18　12　7.26±0.48**　17.18±1.09**　18.56±2.09**　2.59±0.72**中劑量組　9　12　7.63±0.63*　17.46±1.35**　19.58±1.83**　2.51±0.54**低劑量組　4.5　12　7.26±0.66**　17.91±1.46**　16.69±1.72**　2.41±0.49*

3 討 論

止血過程是復(fù)雜的生理功能，包括血管收縮、血小板聚集和血液凝固三個(gè)因素。如外傷出血，則見局部血管收縮，血小板在血管破裂處凝集，破裂并釋放出血管收縮物質(zhì)及“凝血因子”，而組織液及血漿中的一些凝血因子（因子Ⅴ，Ⅶ，Ⅷ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ等）也受到激活而參與血凝過程，于是血塊形成，出血停止［4］。

凝血酶原時(shí)間（PT）測定，屬于檢測外源性凝血途徑的篩選性試驗(yàn)，主要用于篩選檢測外源凝血系統(tǒng)因子Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ和相關(guān)因子的抑制物的試驗(yàn)［5-7］；活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）測定，反映Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等內(nèi)源凝血途徑因子的活性，是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)較敏感和常用的篩選方法［8］；纖維蛋白原（FIB）由α、β、γ三對(duì)不同多肽鏈所組成，多肽鏈間以二硫鍵相連。在凝血酶作用下，α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽，生成纖維蛋白單體。在此過程中，由于釋放了酸性多肽，負(fù)電性降低，單體易于聚合成纖維蛋白多聚體。進(jìn)一步在Ca2+與活化的Ⅷ因子作用下，單體之間以共價(jià)鍵相連，則變成穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白凝塊，完成凝血過程［9］；凝血酶（TT）時(shí)間測定是檢測凝血、抗凝及纖維蛋白溶解系統(tǒng)功能的一個(gè)關(guān)鍵試驗(yàn)［10］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，扶芳藤醇提液各劑量組均可不同程度的縮短APPT及PT時(shí)間，表現(xiàn)為同時(shí)影響小鼠的內(nèi)源性和外源性凝血系統(tǒng)起而到促凝作用；本品使凝血時(shí)間時(shí)間縮短FIB含量增高，提示本品的止血作用可能與影響小鼠纖維蛋白溶解系統(tǒng)有關(guān)。扶芳藤藥用歷史悠久，歷代本草對(duì)它的功效均有論述。本實(shí)驗(yàn)通過初步的凝血研究，扶芳藤醇提液能明顯縮短小鼠血漿TT、PT、APTT，增加FIB含量，有較為顯著的凝血作用，但其成分復(fù)雜，要明確其凝血作用具體機(jī)制，尚待進(jìn)一步深入研究。

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中圖分類號(hào)：R284

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1671-8194（2016）10-0041-02

基金項(xiàng)目：2015年度廣西高?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（KY2015YB513）

*通訊作者：E-mail：huoyu_10@163.com