HIV/HCV共感染者T淋巴細(xì)胞亞群CD28、CD38分子表達(dá)特征的分析

楊國(guó)強(qiáng)

（鄭州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000）

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HIV/HCV共感染者T淋巴細(xì)胞亞群CD28、CD38分子表達(dá)特征的分析

楊國(guó)強(qiáng)

（鄭州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000）

【摘要】目的 通過(guò)觀察HIV/HCV共感染者外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD28、CD38分子的表達(dá)規(guī)律，探討其與疾病進(jìn)展的相關(guān)性。方法 本研究選擇本院2012年8月至2014年10月門(mén)診HIV感染者40例、HIV/HCV共感染患者40例及體檢中心2014年9～10月體檢健康人群20例，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HIV/HCV共感染患者（40例）、HIV感染者（40例）和健康人（20例）外周血CD8+T淋巴細(xì)胞表面CD28、CD38分子的表達(dá)，分析HIV/HCV共感染者CD28、CD38分子在T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)特征；按照CD4+T數(shù)值對(duì)HIV/HCV共感染者進(jìn)行分組，分析不同CD4+T水平CD8+CD28+、CD8+CD38+的表達(dá)差異，探討CD8+T淋巴細(xì)胞CD28、CD38分子與疾病進(jìn)展的相關(guān)性。結(jié)果 與健康人群及HIV感染者比較，HIV/HCV共感染者CD8+CD38+T細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)與百分比明顯升高，CD8+CD28+T細(xì)胞百分比明顯降低；隨著CD4+T水平的降低，CD8+CD28+T有逐漸降低趨勢(shì)，CD8+CD38+T有逐漸升高趨勢(shì)。結(jié)論 HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細(xì)胞表面CD28分子表達(dá)降低，CD38分子表達(dá)升高，且這種變化與患者CD4+T水平密切相關(guān)，可作為判斷疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】HIV/HCV；T淋巴亞群；CD8+CD28+；CD8+CD38+；疾病進(jìn)展

丙型肝炎病毒（HCV）/人類免疫缺陷病毒（HIV）共感染不僅能增加血液和肝細(xì)胞中HCV載量水平，影響丙型肝炎的疾病進(jìn)展，而且也能使患者進(jìn)入艾滋病期的速度加快，但其機(jī)制尚不明確[1]。共刺激分子（CD28）、T淋巴細(xì)胞激活分子（CD38）在淋巴細(xì)胞上的表達(dá)水平可反映病毒感染后機(jī)體免疫細(xì)胞的異常激活程度，同時(shí)與抗病毒治療的時(shí)間和療效密切相關(guān)[2-3]。本研究選擇本院2012年8月至2014年10月門(mén)診HIV感染者40例、HIV/HCV共感染患者40例及體檢中心2014年9～10月體檢健康人群20例，通過(guò)觀察并比較健康人群、HIV感染者及HIV/HCV共感染者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞表面CD28、CD38分子表達(dá)情況，探討HIV/HCV共感染對(duì)機(jī)體CD8+T細(xì)胞CD28、CD38分子表達(dá)的影響，進(jìn)一步揭示CD8+CD28+、CD8+CD38+與疾病進(jìn)展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：40例HIV/HCV共感染患者和40例HIV感染者均為本院2012年8月至2014年10月門(mén)診患者，HIV感染的診斷參照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年版）》要求確診；HCV感染的診斷參照2010版《丙型肝炎防治指南》。40例HIV/HCV共感染患者中男性23例，女性17例，年齡21～59歲，平均年齡（32.6±6.9）歲；40例HIV感染者中男性25例，女性15例，年齡19～58歲，平均年齡（34.7± 7.3）歲。所有患者均為初次發(fā)現(xiàn)并未經(jīng)抗病毒治療，且1年內(nèi)無(wú)應(yīng)用免疫制劑史。20例健康人對(duì)照來(lái)自本院體檢中心2014年9～10月體檢人群，男11例，女9例，年齡23～60歲，平均年齡為（31.5±5.5）歲，所有人肝、腎功能正常，血清抗-HBsAg、抗-HCV、抗-HIV均為陰性，且無(wú)其他自身免疫性疾病。三組人群性別、年齡等一般資料比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑：FITC-CD3/PE-CD4/PerCP-CD45/APC-CD8混合抗體，F(xiàn)ITC-CD8單克隆抗體，PerCP-CD28單克隆抗體，APC-CD38單克隆抗體，所有抗體均購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)：各組人群均于清晨空腹采集外周血，EDTA2K抗凝，2 h內(nèi)流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.3.1 CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)：將20 μL FITC-CD3/PE-CD4/PerCPCD45/APC-CD8混合抗體加入Trucount管中，然后在管中加入50 μL抗凝全血，振蕩混勻，室溫避光孵育30 min。然后加入450 μL FACS裂解液，振蕩混勻，室溫避光孵育15 min。流式細(xì)胞儀（BDFACSCalibur）上機(jī)檢測(cè)，計(jì)算CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)。

1.3.2 CD8+CD28+、CD8+CD38+T細(xì)胞檢測(cè)：流式管中加入100 μL抗凝全血，然后加入10 μL FITC-CD8、10μL PerCP-CD28和2.5 μL APCCD38，混勻，室溫避光孵育15 min。加入溶血素2 mL，振蕩混勻，室溫避光孵育10 min。離心1500 rpm 10 min，棄上清，用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞1次，然后用300 μLPBS重懸細(xì)胞。流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)，用Flowjo軟件分析計(jì)算CD8+CD28+、CD8+CD38+T細(xì)胞百分比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson或Spearman秩相關(guān)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組人群外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群比較：結(jié)果表明，與健康人群比較，HIV感染者及HIV/HCV共感染者CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分比（CD4+T/CD3+T）明顯降低，CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分比（CD8+T/ CD3+T）明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與健康人群比較，HIV感染者及HIV/HCV共感染者CD4+/CD8+比值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與HIV感染者比較，HIV/HCV共感染者CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分比明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組人群CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群比較（±s）

表1 各組人群CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群比較（±s）

組別　CD4+T細(xì)胞　CD8+T細(xì)胞　CD4+/CD8+絕對(duì)值（cells/μL）　　百分比（%）　　絕對(duì)值（cells/μL）　　百分比（%）健康人群（n=20）　722±273　42.33±10.37　565±237　27.38±10.25　1.52±0.67 HIV感染者（n=40）　426±178*　25.36±6.08*　782±381*　52.36±13.61*　0.47±0.23* HIV/HCV共感染者（n=40）　328±128*#　17.58±4.24*#　735±414*　48.07±12.47*　0.41±0.17*

2.2 各組人群CD8+T淋巴細(xì)胞CD28、CD38分子表達(dá)比較：結(jié)果顯示，與健康人群及HIV感染者相比，HIV/HCV共感染者CD8+CD28+T細(xì)胞百分比（CD28+/CD8+）明顯降低，CD8+CD38+T細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)與百分比（CD38+/CD8+）明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。這提示HCV合并感染能明顯改變HIV感染者CD8+T淋巴細(xì)胞表面CD28、CD38分子的表達(dá)水平，促進(jìn)HIV/AIDS患者免疫激活的發(fā)。見(jiàn)表2。

表2 健康人群與HIV/AIDS各組人群CD8+T淋巴細(xì)胞CD28及CD38分子表達(dá)比較（±s）

表2 健康人群與HIV/AIDS各組人群CD8+T淋巴細(xì)胞CD28及CD38分子表達(dá)比較（±s）

組別　CD8+CD28+T細(xì)胞　CD8+CD38+T細(xì)胞絕對(duì)值（cells/μL）　　百分比（%）　　絕對(duì)值（cells/μL）　　百分比（%）健康人群（n=20）　273±134　47.94±15.27　312±109　51.37±18.83 HIV感染者（n=20）　295±141　45.68±16.48　458±194*　56.65±17.46 HIV/HCV共感染者（n=40）　261±137　31.72±12.52*#　586±255*#　75.02±25.18*#

2.3 HIV/HCV共感染者CD4+T計(jì)數(shù)與CD8+T淋巴細(xì)胞CD28、CD38分子表達(dá)的相關(guān)性分析：將40例HIV/HCV共感染者按照CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分為四組，各組病例數(shù)見(jiàn)表3。結(jié)果顯示，不同CD4+T分組CD8+T淋巴細(xì)胞CD28、CD38分子表達(dá)差異明顯，且CD28表達(dá)水平與CD4+T計(jì)數(shù)成正相關(guān)（r=0.875，P＜0.001），而CD38表達(dá)水平與CD4+T計(jì)數(shù)成負(fù)相關(guān)（r=-0723，P＜0.001）。這提示CD8+T淋巴細(xì)胞CD28、CD38分子表達(dá)與疾病進(jìn)展密切相關(guān)。見(jiàn)表3。

表3 HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細(xì)胞CD28、CD38分子表達(dá)與CD4+T計(jì)數(shù)的相關(guān)性分析（±s）

表3 HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細(xì)胞CD28、CD38分子表達(dá)與CD4+T計(jì)數(shù)的相關(guān)性分析（±s）

組別　CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)　CD8+CD28+T細(xì)胞百分比（%）　CD8+CD38+T細(xì)胞百分比（%）CD4<200（n=6）　145±48　20.95±10.74　84.79±18.62 200≤CD4<350（n=16）　285±57　29.37±9.66　71.49±23.26 350≤CD4<500（n=13）　429±51　38.48±14.70　68.85±14.71 CD4>500（n=5）　653±117　46.73±16.38　61.45±20.82 r 0.875　-0.723 P 0.000　0.000

3 討 論

HIV、HCV等病毒感染機(jī)體后，正常情況下機(jī)體免疫系統(tǒng)可通過(guò)體液免疫或細(xì)胞免疫對(duì)病毒或病毒感染的細(xì)胞進(jìn)行清除。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的主要組成部分，CD4+T和CD8+T與病毒感染和疾病密切相關(guān)。本研究對(duì)健康人群、HIV感染者及HIV/HCV共感染者三類人群的T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行比較和分析，結(jié)果顯示，HIV感染者及HIV/HCV共感染者CD4+T和CD8+T計(jì)數(shù)及百分比與健康人群相比均發(fā)生明顯變化，且出現(xiàn)明顯的CD4+/CD8+比例倒置現(xiàn)象。與HIV感染者相比，HIV/HCV共感染者CD4+T細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)及百分比均明顯下降，這提示，相對(duì)于HIV單獨(dú)感染，HCV共感染能加速CD4+T的破壞，使艾滋病疾病進(jìn)程加快。CD8+T是人體內(nèi)具有直接殺傷病毒作用的主要免疫細(xì)胞，能特異性地識(shí)別病毒感染的靶細(xì)胞，并對(duì)其產(chǎn)生殺傷作用[4]。CD28和CD38分子對(duì)于CD8+T的激活和殺傷功能的發(fā)揮有著重要的作用。CD28屬于共刺激分子，其主要的生物學(xué)作用是在T細(xì)胞的激活過(guò)程中發(fā)揮共刺激作用，相關(guān)研究表明，大約95%的CD4+T細(xì)胞和50%的CD8+T細(xì)胞表面可表達(dá)CD28[5]。CD28與抗原遞呈細(xì)胞表面的B7分子結(jié)合形成第二信號(hào)，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖活化。如果缺少CD28共刺激信號(hào)，抗原呈遞細(xì)胞即使能與TCR CD3復(fù)合物及HLAⅡ類分子作用，也不能有效的激活T細(xì)胞[6]。CD38分子與細(xì)胞分化和活化狀態(tài)相關(guān)，在NK細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等細(xì)胞表面均有表達(dá)。相關(guān)研究表明，HIV感染可導(dǎo)致CD38表達(dá)升高，CD38不僅能反映CD8+T細(xì)胞的激活狀態(tài)，而且與HIV病毒載量正相關(guān)，CD38分子可間接反映體內(nèi)的HIV載量水平[7-8]。本研究結(jié)果顯示，與健康人群及HIV感染者相比，HIV/HCV共感染者CD8+CD28+T細(xì)胞百分比（CD28+/CD8+）明顯降低，CD8+CD38+T細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)與百分比（CD38+/CD8+）明顯升高，這提示合并HCV感染能明顯改變HIV感染者CD8+T淋巴細(xì)胞表面CD28、CD38分子的表達(dá)水平，促進(jìn)患者CD8+T細(xì)胞免疫激活的發(fā)生。

綜上所述，通過(guò)不同人群T淋巴細(xì)胞亞群及其表面標(biāo)記分子CD28、CD38的表達(dá)進(jìn)行研究和分析，我們發(fā)現(xiàn)與健康人群和HIV單純感染人群相比，HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細(xì)胞表面CD28分子表達(dá)降低，CD38分子表達(dá)升高，且這種變化與患者CD4+T水平密切相關(guān)，可作為判斷疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)。

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中圖分類號(hào)：R512.6+3；R512.91

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1671-8194（2016）07-0005-03

T he Expressyon C haracterystycs of C D28， C D38M olecular on C D8+T Lym phocytes of H IV /H C V C o-Infected Patyents

YANG Guo-qiang
（Department of Clinical Laboratory， Zhengzhou People's Hospital， Zhengzhou 450000， China）

[Abstract]Objective To study the expression of CD28， CD38molecular on CD8+T cell of peripheral blood of HIV/HCV co-infected patients， and explore its correlation with disease progression. Methods 40 cases of HIV infection and 40 cases of HIV/HCV coinfection come from Outpatient service of our hospital from October 2012 to August 2012， while 20 cases of healthy people were chosen from medical examination center from September 2014 to October check-up 20， the CD28， CD38molecule expression on CD8+T lymphocytes of 40 HIV/HCV co-infected patients， 40 HIV patients and 20 healthy people were detected by flow cytometry instrument， analyzed the expression characteristics of CD， CD molecular on CD+28388T lymphocytes of HIV/HCV co-infected patients； grouped the HIV/HCV co-infected patients according to the CD4+T value， through comparing the different expression of CD8+CD28+， CD8+CD38+among different CD4+T groups， discuss the correlation between CD28， CD38molecules on CD8+T lymphocytes and disease progression. Results Compared with healthy people and HIV patients， the percentage of CD8+CD28+T cells of HIV/HCV coinfected patients reduced significantly， while the CD8+CD38+T cell absolute counting and percentage increased significantly； followed the the reduction of the CD4+T ，the CD8+CD28+T reduced gradually ，while the CD8+CD38+T has a trend of increasing gradually. Conclusion The CD8+CD28+in peripheral blood of HIV/HCV co-infected patients reduces gradually， while CD8+CD38+increased gradually， both of which are closely associated with disease progression， and they can be used as judgement index of disease progression.

[Key words］HIV/HCV co-infected； T lymphocyte； CD8+CD28+； CD8+CD38+； Disease progression