白術(shù)和蒼術(shù)的鑒定研究

高 巖王曉羽（ 盤錦檢驗(yàn)檢測中心理化科，遼寧 盤錦 400； 遼寧漢草堂中藥有限公司質(zhì)量授權(quán)人，遼寧 營口 5004）

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白術(shù)和蒼術(shù)的鑒定研究

高 巖1王曉羽2
（1 盤錦檢驗(yàn)檢測中心理化科，遼寧 盤錦 124010；2 遼寧漢草堂中藥有限公司質(zhì)量授權(quán)人，遼寧 營口 115004）

【摘要】目的 探討白術(shù)和蒼術(shù)的鑒定。方法 本研究采用ITS2序列對藥材白術(shù)與蒼術(shù)進(jìn)行DNA條形碼鑒定。結(jié)果 白術(shù)與蒼術(shù)的3個(gè)基原物種（蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)和朝鮮蒼術(shù)）ITS2序列均為229 bp。13條白術(shù)的序列僅在98 bp處有C-G變異，平均CG含量為69.42%；3條蒼術(shù)序列無變異位點(diǎn)；關(guān)蒼術(shù)與朝鮮蒼術(shù)的種內(nèi)最大K2P距離均為0.013。白術(shù)、朝鮮蒼術(shù)序列能各自聚為一支，關(guān)蒼術(shù)與蒼術(shù)聚為一支。結(jié)論 ITS2序列在藥材白術(shù)與蒼術(shù)鑒定方具有很好的鑒別效果。

【關(guān)鍵詞】白術(shù)；蒼術(shù)；鑒定

蒼術(shù)、白術(shù)是臨床上重要的常用中藥。蒼術(shù)、白術(shù)均為菊科蒼術(shù)屬Atractylodes DC.植物，二者的名稱、功效、臨床應(yīng)用均較相似，極易混淆。白術(shù)、蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)的來源較多，且較復(fù)雜。2010年版《中國藥典》規(guī)定，白術(shù)、蒼術(shù)的藥用植物均為菊科植物，其中蒼術(shù)又包含茅蒼術(shù)或北蒼術(shù)，北蒼術(shù)又包括了關(guān)蒼術(shù)和朝鮮蒼術(shù)。四種藥材的藥用部位均是其干燥根莖［1］。

DNA條形碼鑒定技術(shù)一提出因其通用、快捷等優(yōu)勢得到了廣泛的關(guān)注。藥材羌活、冬蟲夏草、黨參等藥材及其混偽品的鑒定中DNA條形碼鑒定技術(shù)發(fā)揮了很大作用。此外DNA條形碼鑒定技術(shù)應(yīng)用在植物的檢驗(yàn)檢疫、藥材市場監(jiān)督以及法醫(yī)鑒定等諸多方面。為了確保白術(shù)與蒼術(shù)的用藥質(zhì)量，運(yùn)用DNA條形碼技術(shù)鑒定白術(shù)與蒼術(shù)，更好的服務(wù)于臨床。

1 材料與方法

1.1 材料：本研究收集大量的基原植物及藥材包括白術(shù)、蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)。所有樣本鑒定均由權(quán)威部門中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院的藥用植物研究所執(zhí)行。白術(shù)Atractylodes macrocephala，樣本數(shù)13，樣本編號YC0059MT01～YC0059MT13，產(chǎn)地為河北省安國；蒼術(shù)A. Lancea，樣本數(shù)5，樣品編號YC0161MT01～YC0161MT05，產(chǎn)地河南省洛陽；關(guān)蒼術(shù)A. Japonica，樣本數(shù)4，樣品編號YC0062MT01～YC0062MT04，產(chǎn)地吉林省長白山；朝鮮蒼術(shù)A. Coreana，樣本數(shù)7，樣品編號YC0061MU01～YC0061MU09，產(chǎn)地遼寧省沈陽。

1.2 方法：將藥材去掉表皮留取中間部分為藥材樣本，取樣本約40～60 mg。然后用高通量組織球磨儀研磨組織2 min，頻率為50 Hz，核分離液洗滌，800微升/次，洗滌3次后，留取沉淀，采用植物組織DNA提取試劑盒提取樣本藥材的DNA。

PCR擴(kuò)增：ITS2正向引物ITS2F （5'AT-GCGATACTTGGTGTGAAT-3'），反向引物ITS3R （5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'），反應(yīng)體系25 μL，正反向引物各1 μL，DNA模板2～3 μL，其余體積以ddH2O補(bǔ)充［2］。

2 結(jié) 果

2.1 DNA提取及PCR擴(kuò)增效率：本實(shí)驗(yàn)提取DNA采用的是核分離液洗

組8例有效，2例死于腎功能衰竭，l例死于肝性腦病，l例死于上消化道出血。

滌技術(shù)，在試驗(yàn)過程中存在在細(xì)胞核中的多酚、多糖可以被除去，提高DNA純度。29份樣本均成功提取DNA。結(jié)果發(fā)現(xiàn)引物ITS2F/3 R對本研究中白術(shù)、蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)4種藥材及基原植物均有較高的擴(kuò)增效率，通過試驗(yàn)得到質(zhì)量較高的ITS2序列。

2.2 種內(nèi)、種間變異分析：13條白術(shù)的序列中，ITS2序列長度為229 bp，僅在98 bp處有C-G變異，平均CG含量在4個(gè)物種中最高，為69.42%，種內(nèi)最大K2P距離為0。藥材蒼術(shù)的3個(gè)基原物種中，CG含量分別為。4條蒼術(shù)序69.00%、68.27%、68.67%。4條蒼術(shù)序列在本試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)變異，種內(nèi)最大K2P距離為0。見表1。

3 討 論

白術(shù)、蒼術(shù)是常用的藥材，具有悠久的應(yīng)用歷史。白、蒼二術(shù)，《神農(nóng)本草經(jīng)》稱“術(shù)”，列為上品，但未有白術(shù)和蒼術(shù)之分。張建逵等［3］查閱大量本草文獻(xiàn)、充分考證后認(rèn)為：唐代藺道人明確區(qū)別蒼術(shù)、白術(shù)。找到白術(shù)與蒼術(shù)的鑒別，更好的控制兩藥的質(zhì)量。北蒼術(shù)是一種較為混雜的物種，在《中國植物志》中就有著明確的記載，其中主要包括蒼術(shù)本種，以及一些生長在北方地區(qū)的蒼術(shù)種類。如：關(guān)蒼術(shù)組要生長在遼寧以及山東地區(qū)，其中朝鮮蒼術(shù)也被包括在其中。本研究中關(guān)蒼術(shù)與蒼術(shù)的最小種間K2P距離為0.10，小于關(guān)蒼術(shù)最大種內(nèi)K2P距離0.013，該結(jié)果與《Flora of China》中的分類一致。通過對蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)的ITS2序列特征及種間遺傳距離的比較，表明ITS2序列在蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)鑒別中較好。白術(shù)與蒼術(shù)有多種鑒定方式，近年來隨著薄層色譜的方法的快速發(fā)展，傳統(tǒng)的通過觀察二者的性狀、粉末顯微特征的方法逐漸被取代［4］。本研究采用的是近年來新興的方法DNA條形碼鑒定技術(shù)。本研究樣本藥材白術(shù)和蒼術(shù)的鑒定序列均為223～229 bp，ITS2序列較短。本實(shí)驗(yàn)研究的13條白術(shù)序列中，所有峰圖在98 bp飾處均為CG套峰狀況，由此推斷，98 bp飾處為白術(shù)ITS2序列中的一個(gè)SNP位點(diǎn)。綜上所述，ITS2序列在藥材白術(shù)、蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)鑒定中取得了較好的效果，充分說明DNA條形碼分子鑒定技術(shù)在藥物鑒定中的有效應(yīng)用。研究藥材的鑒定有助于辨別藥材真?zhèn)危瑫r(shí)也可指導(dǎo)臨床精確用藥。

表1 白術(shù)、蒼術(shù)ITS2序列特征及種間遺傳距離

參考文獻(xiàn)

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3 討 論

肝腎綜合征（HRS）是肝硬化功能性腎損害，腎臟并無解剖和組織學(xué)方面的病變［2］。具體發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，與腎臟神經(jīng)、體液調(diào)節(jié)異常、血液循環(huán)功能障礙、心臟病變和肝功能損害、門靜脈高壓等多種因素相關(guān)［3］，以動(dòng)脈循環(huán)和內(nèi)源性血管活性系統(tǒng)顯著異常為主要特征的臨床綜合征。腎臟病變主要是腎血管顯著收縮導(dǎo)致的腎小球?yàn)V過率低下。

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Study Identification of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Atractylodes Lancea

GAO Yan1， WANG Xiao-yu2
（1 Department of Physical and Chemical， Panjin Inspection and Testing Center， Panjin 124010， China；2 Quality Authorized Person， Liaoning Hancaotang Chinese Medicine Co. Ltd.， Yingkou 115004， China）

［Abstract］Objective To explore the identifcation of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Rhizoma atractylodis. Methods This study used ITS2 sequence DNA barcode identifcation of medicinal materials and Atractylodes macrocephala. Results The 3 base Atractylodes Atractylodes and original species （Atractylodes rhizome， Atractylodes lancea and North Korea） ITS2 sequence was 229 bp. 13 Baizhu sequence only in 98 BP with C-G variation，average CG content was 69.42%； 3 Atractylodes rhizome sequences without ectopic； Guan Atractylodes rhizome and Korea Atractylodes in maximum K2P distance were 0.013. Korea Atractylodes Atractylodes， sequence together， Atractylodes Atractylodes lancea and a poly. Conclusion ITS2 sequence has a good effect on the identifcation of medicinal materials and identifcation of Rhizoma Atractylodis macrocephala.

［Key words］Atractylodes； Herb； Appraisal

中圖分類號：R282.710.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號：1671-8194（2016）17-0030-02