文心蘭離體培養(yǎng)技術(shù)研究

李力

[摘 要]應(yīng)用植物離體培養(yǎng)技術(shù)研究文心蘭增殖技術(shù)。結(jié)果表明：文心蘭原球莖增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA4 mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+活性炭1.5g·L-1+蔗糖20.0g·L-1；最佳的幼苗分化培養(yǎng)基是1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg· L-1+蔗糖20.0g·L-1+瓊脂10.0g·L-1為佳；最佳的壯苗培養(yǎng)基以1/2MS+NAA1.0mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+活性炭2.0 g·L-1+黃瓜汁10%為佳。

[關(guān)鍵詞]文心蘭；原球莖；增殖；分化；壯苗

[中圖分類號]S682.31 [文獻標識碼]A

文心蘭（Oncidium）為蘭科文心蘭屬植物，又名跳舞蘭、舞女蘭或跳舞女郎（Dancing Lady Orchid）。近年來，作為重要的切花和盆花種，市場需求量急劇增加，成為洋蘭類的新寵之一。文心蘭同其它蘭科植物一樣，多采用傳統(tǒng)的分株或播種等方法進行繁殖，由于分株繁殖系數(shù)低，播種又存在后代性狀不一致等缺點，因而，利用現(xiàn)代生物組織培養(yǎng)技術(shù)進行種苗的快繁生產(chǎn)具有重要的意思。為此本實驗對文心蘭原球莖的增殖、分化及壯苗進行了探索性研究。

1 材料與方法

1.1 材料與主要儀器

1.1.1 供試材料

文心蘭莖尖誘導(dǎo)形成的原球莖（Protocorm Like Body以下簡稱PLB）。

1.1.2 主要儀器

塑料瓶、玻璃棒、量筒、移液管、酒精燈、PHS-2數(shù)顯酸度計、超凈工作臺、高壓蒸氣滅菌鍋、METTLERPM200電子天平

1.2 試驗方法

1.2.1 原球莖的增殖

先將文心蘭莖尖誘導(dǎo)形成的PLB在MS+6-BA 2+NAA 1的培養(yǎng)基上擴增30 d，培養(yǎng)溫度（28±1）℃、光強2000～1500 Lx、光照時間12 h/d。繼代增殖達到一定數(shù)量后進行以下探索性實驗。

1.2.1.1 不同濃度6-BA和NAA對文心蘭PLB增殖的影響試驗

以MS為基本培養(yǎng)基，具體設(shè)計方案見表1。每種處理接5瓶，每瓶接種15個PLB塊，PLB塊3mm，3次重復(fù)。培養(yǎng)溫度（28±1）℃、光強2000～1500 Lx、光照時間12 h/d，培養(yǎng)時間為30 d。

1.2.1.2 不同MS對文心蘭PLB增殖的影響

將文心蘭PLB分別接種在MS、1/2MS、1/3MS+6-BA2.0 mg·L-1 +NAA1.0mg·L-1 的培養(yǎng)基上，每種處理接5瓶，每瓶接種15個PLB，PLB塊3mm，3次重復(fù)。培養(yǎng)溫度（28±1）℃、光強2000～1500Lx、光照時間12h/d，培養(yǎng)時間為30 d。

1.2.2 分化與壯苗

1.2.2.1 不同濃度激素組合對幼苗分化的影響將增殖得到的原球莖切割后，以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過分別添加激素6-BA和NAA含量來探索最佳分化苗配方。每種處理接5瓶，每瓶接種15個PLB，PLB塊3mm，3次重復(fù)。培養(yǎng)溫度（28±1）℃、光強2000～1500Lx、光照時間12h/d，培養(yǎng)時間為30d。統(tǒng)計幼苗分化率。

1.2.2.2 不同添加物對壯苗生根的影響

為了提高后期移苗的成活率，本試驗設(shè)計了香添加蕉、黃瓜、馬鈴薯、椰乳汁、水幾種壯苗生根培養(yǎng)基，對壯苗生根的影響試驗，每種處理接5瓶，每瓶接10株2～3cm的文心蘭無根苗?；九囵B(yǎng)基采用1/2MS+蔗糖20 g·L-1+活性炭2.0 g·L-1+NAA1.0 mg·L-1。培養(yǎng)溫度（28±1）℃、光強2500 Lx、光照時間14 h/d，培養(yǎng)時間為60d。

2 結(jié)果與分析

2.1 6-BA和NAA對文心蘭PLB增殖的影響

根據(jù)表一的試驗結(jié)果，對不同6-BA和NAA對文心蘭PLB增殖的影響進行方差分析，其分析結(jié)果見表二。

表二的方差分析結(jié)果表明，NAA和6-BA對文心蘭PLB的增殖影響顯著（P<0.05），NAA與BA的交互作用不大（P>0.05）。

從表二可以看出，a因素3水平中a2與之間a1和a3差異顯著，說明6-BA 4.0 mg·L-1時，最有利于文心蘭PLB的增殖。

從表三可以看出，b2與b1和b3之間差異顯著，說明NAA0.4 mg·L-1時最有利于文心蘭PLB的增殖。故文心蘭PLB增殖的最優(yōu)激素組合為6-BA4 mg·L-1+NAA0.4 mg·L-1。

2.2 不同MS培養(yǎng)基對文心蘭PLB增殖的影響

由表四可知，大量元素對文心蘭PLB增殖有一定影響，大量元素太低不利于PLB增殖，1/3MS增殖系數(shù)只有1.5，MS和1/2MS增殖系數(shù)較高，沒有明顯差異，達到2.1以上。

2.3 不同添加物對壯苗生根的影響

從表五可以看出，在文心蘭壯苗生根實驗中，不同添加物對促進瓶苗生根存在一定的差異。處理2（添加黃瓜汁），生根率達100.0%，平均每株有6條根，植株高6.0 cm，且根系粗壯。從表五還可以看出添加香蕉、馬鈴署、椰乳汁對生根都有一定促進作用，生根率分別為85.0%、80%、67%，均比對照高。實驗結(jié)果表明，添加黃瓜汁對文心蘭壯苗生根最有利。

3 小結(jié)與討論

文心蘭作為漂亮的觀賞花卉，市場的需求量很大。NAA 能促進細胞分裂、誘導(dǎo)愈傷組織的形成，6-BA 可促進細胞分裂和生根等，培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素的比率合適與否是決定生芽和壯苗生根的關(guān)鍵。提高細胞分裂素的質(zhì)量濃度，有利于芽的形成；提高生長素質(zhì)量濃度，有利于根的形成。

通過實驗得出：心蘭PLB的最佳增殖培養(yǎng)基是MS+6-BA4mg· L-1+NAA0.4mg·L-1 +活性炭1.5g·L-1+蔗糖20.0g·L-1是。最佳的幼苗分化培養(yǎng)基是1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+蔗糖20.0。最佳的生根壯苗是1/2MS+NAA1.0mg·L-1+蔗糖20g·L-1+活性炭2.0g·L-1+黃瓜汁10%作為壯苗培養(yǎng)基最為理想，培養(yǎng)基中加入適當天然有機物有助生根壯苗。

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