40種苦苣苔科植物毛蕊花糖苷與總黃酮含量的測定

陳 朋，謝銳星，邱志敬

（深圳市中國科學院仙湖植物園，南亞熱帶植物多樣性重點實驗室，廣東深圳518004）

40種苦苣苔科植物毛蕊花糖苷與總黃酮含量的測定

陳 朋，謝銳星，邱志敬＊

（深圳市中國科學院仙湖植物園，南亞熱帶植物多樣性重點實驗室，廣東深圳518004）

為給苦苣苔科植物的藥用研究提供依據(jù)，采用反相高效液相色譜法和紫外分光光度法測定苦苣苔科4屬40種植物的毛蕊花糖苷與總黃酮含量。結(jié)果表明：40種苦苣苔科植物中有30種含有毛蕊花糖苷，其中只有半蒴苣苔屬11種植物全部含有，吊石苣苔屬不含有毛蕊花糖苷，且半蒴苣苔屬在4個屬間分布含量較高，平均含量為0.078%；吊石苣苔屬分布含量最低，平均含量為0.004 4%。40種苦苣苔科植物中均含有豐富的黃酮類化合物，其含量為0.31%～7.84%。報春苣苔屬、半蒴苣苔屬、吊石苣苔屬和芒毛苣苔屬的黃酮含量分布均無明確規(guī)律，含量高低差異較大。其中，半蒴苣苔屬植物毛蕊花糖苷和總黃酮平均含量均最高，分別為0.078%和4.53%。

苦苣苔科；毛蕊花糖苷；總黃酮

苦苣苔科隸屬于玄參目，傳統(tǒng)上分為苦苣苔亞科和大巖桐亞科，我國苦苣苔科植物分布有54個屬，自西藏南部、云南、華南至河北及遼寧西南部廣泛分布，多數(shù)屬、種分布于云南、廣西、貴州等省區(qū)的熱帶及亞熱帶丘陵地帶，全部屬于苦苣苔亞科，部分種類屬于瀕危植物［1］。其中，100多種苦苣苔科植物是我國傳統(tǒng)民間草藥，在廣西［2－4］、貴州［5］和云南等省區(qū)廣泛用于治療各種炎癥、咳喘、瘡癤、風濕、骨折、燙傷、蛇蟲咬傷及婦科等疾病，療效顯著［6］。

苦苣苔科植物作為民間傳統(tǒng)藥材其化學成分的研究報道很少。到目前為止，該科植物化學成分研究主要集中在吊石苣苔屬石吊蘭素和其他屬黃酮類化合物和苯丙素類化合物。毛蕊花糖苷又名阿克苷屬于苯丙素類化合物，是一種天然多酚類化合物［7］。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，毛蕊花糖苷具有很好的抗氧化、淬滅自由基作用，諸多生物學作用表現(xiàn)為抗腫瘤、神經(jīng)保護、肝臟保護、抗炎癥、抗病毒和DNA氧化損傷修復(fù)等［8－9］。黃酮類化合物同樣也表現(xiàn)出良好的抗氧化、淬滅自由基和抗癌等作用［10－12，16］。為闡述苦苣苔的植物藥用藥效機理，對報春苣苔屬、吊石苣苔屬、半蒴苣苔屬、芒毛苣苔屬中40種植物所含總黃酮含量和毛蕊花糖苷含量進行測定，以期為苦苣苔科植物的基礎(chǔ)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

苦苣苔科植物全株4屬40種，分別為報春苣苔屬11種，半蒴苣苔屬11種，吊石苣苔屬11種，芒毛苣苔屬7種，引種栽培于深圳市仙湖植物園，均為2年栽培苗。參照文獻［13］，于2015年5月對采集的藥材進行干燥。

儀器：日本島津高效液相色譜儀，TB－215D分析天平（十萬分之一精度，DENVER INSTRUMENT），TU－1810紫外分光光度計（北京普析通用）。

試劑：毛蕊花糖苷標準品（98%HPLC用，中國藥品檢定所），色譜乙腈（Fisher色譜純），甲酸（色譜純），水（超純水），所有流動相用前過0.45μm微孔濾膜。蘆丁標準品（中檢所100080－201408ID：G5TE－8VP5）、甲醇、氫氧化鈉、硝酸鋁和亞硝酸鈉均為分析純。

1.2 毛蕊花糖苷的測定

1.2.1 色譜條件［14－15］色譜柱：InertsilR ODS－SP C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈∶0.5%甲酸水溶液＝20∶80（體積比），流速1.00mL／min，檢測波長331nm，柱溫30℃，進樣體積10μL。

1.2.2 對照品溶液制備 精密稱定毛蕊花糖苷標準品0.001 47g，加甲醇定容至25mL，即得。

1.2.3 標準曲線繪制 分別取對照品溶液0μL、200μL、400μL、600μL、800μL和1 000μL，加甲醇定容至1mL，依次取10μL注入高效液相色譜儀，測定，即得標準曲線。

1.2.4 供試品溶液的制備 供試樣品粉碎過60目篩，取樣品約0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲20min，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

1.2.5 樣品含量測定 取供試品溶液按照1.2.1項下色譜條件下測定，按照外標法以峰面積計算毛蕊花糖苷含量。

1.3 總黃酮含量的測定

1.3.1 標準曲線的繪制 精密稱定蘆丁標準品0.005 52g，甲醇溶解定容至25mL，備用。依次量取蘆丁對照品溶液0mL、0.5mL、1.5mL、2.5mL、3.5mL和4.5mL，用70%乙醇補足溶液至5mL，加入5%亞硝酸鈉溶液1mL，混合均勻后放置6min，加入10%硝酸鋁溶液1mL，混合均勻后放置6min，然后加入4%氫氧化鈉溶液3mL用70%乙醇補足定容至總體積10mL，搖勻后放置15min，紫外分光光度計510nm波長下測定吸光度，繪制標準曲線。得線性回歸方程y＝0.249 1x－0.020 1，R＝0.998 7。

1.3.2 供試品溶液的制備 供試品粉碎過40目篩混合均勻，精密稱取樣品約0.5g，70%乙醇超聲波提取3次，減壓蒸干，用70%乙醇定容至25mL，備用［17］。

1.3.3 總黃酮含量的測定 按照1.3.1的方法，精確量取樣品1mL，70%乙醇溶液補足至5mL，依次加入亞硝酸鈉溶液、硝酸鋁溶液、氫氧化鈉溶液定容放置后測定吸光度。

2 結(jié)果與分析

由表中可知，40種苦苣苔科植物中有30種含有毛蕊花糖苷。按照屬劃分，只有半蒴苣苔屬11種植物全部含有，吊石苣苔屬不含有毛蕊花糖苷的種最多，達60%。40種苦苣苔中毛蕊花糖苷最高為纖細半蒴苣苔，達0.34%，超過0.1%的有4種，半蒴苣苔屬在4個屬間分布含量較高，吊石苣苔屬分布含量最低。

表40 種苦苣苔科植物總黃酮含量及毛蕊花糖苷的含量Table Contents of total flavonoids and verbascoside in 40Gesneriaceae plants

續(xù)表

40種苦苣苔科植物中均含有豐富的黃酮類化合物，其含量為0.31%～7.84%。報春苣苔屬、半蒴苣苔屬、吊石苣苔屬和芒毛苣苔屬的植物黃酮含量分布均無明確規(guī)律，含量高低差異較大。其中半蒴苣苔屬和芒毛苣苔屬總黃酮含量的整體水平偏高。

3 結(jié)論與討論

對苦苣苔科植物中總黃酮含量和毛蕊花糖苷含量進行檢測發(fā)現(xiàn)，4個屬植物毛蕊花糖苷平均含量依次為半蒴苣苔屬0.078%、報春苣苔屬0.025%、芒毛苣苔屬0.017%和吊石苣苔屬0.004 4%；總黃酮平均含量低依次為半蒴苣苔屬4.53%、芒毛苣苔屬3.60%、報春苣苔屬2.38%和吊石苣苔屬1.85%。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，諸多生理病理的發(fā)生、發(fā)展過程都與自由基和氧化損傷有著密切的關(guān)系。毛蕊花糖苷的神經(jīng)保護作用、抗腫瘤、肝臟功能保護、抗炎癥和抗病毒等作用與其較強的抗氧化和淬滅自由基的作用有直接關(guān)系［18－19］。試驗結(jié)果表明，半蒴苣苔屬植物含有較高的毛蕊花糖苷和總黃酮，毛蕊花糖苷的神經(jīng)保護作用和抗炎作用與半數(shù)苣苔屬植物在瑤族、景頗族和苗族等少數(shù)民族中用于神經(jīng)衰弱和炎癥的治療應(yīng)用一致，黃酮類化合物良好的淬滅自由基和抗氧化作用與民族用藥中的抗炎、清熱等應(yīng)用一致，該類藥材有望在抗老年癡呆藥物方向做出突出貢獻；而吊石苣苔屬在毛蕊花糖苷和總黃酮含量上并不突出，但是由于其獨特的石吊蘭素成分已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于宣肺止咳和平喘等方面［20］。

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（責任編輯：孫小嵐）

Measurement of Acteoside and Total Flavonoids Contents in 40 Kinds of Gesneriaceae Plants

CHEN Peng，XIE Ruixing，QIU Zhijing＊
（Key Laboratory of Southern Subtropical Plant Diversity，F(xiàn)airylake Botanical Garden，Shenzhen ＆Chinese Academy of Sciences，Shenzhen，Guangdong518004，China）

To provide references for studying on Gesneriaceae plants，the acteoside and total flavonoids contents in 40kinds（four genera）of Gesneriaceae plants were measured by reversed phase high performance liquid chromatography and UV spectrophotometry determination separately.Results：Acteoside contained in 30kinds of Gesneriaceae plants，all the 11plant species of the genus Hemiboea contained acteoside while Aeschynanthus contained no acteoside.And the content in Hemiboea was higher among the four genera，0.078%on average，while that in Aeschynanthuswas the lowest，merely 0.004 4%on average.All the 40Gesneriaceae plants contained abundant flavonoids（0.31%～7.84%）.Flavonoids contents in Primulina，Hemiboea，Lysionotus and Aeschynanthus varied greatly and had no obvious regulation.Acteoside and total flavonoids contents were all the highest in Hemiboea plants，0.078%and 4.53%respectively.

Gesneriaceae；acteoside；total flavonoids

S－3

A

1001－3601（2016）08－0348－0094－03

2016－01－04；2016－07－31修回

國家自然科學基金資助項目“石蝴蝶屬的分類學修訂”（31200159）；廣東省省級科技計劃項目“觀賞苦苣苔科植物在園林配置中的應(yīng)用和評價”（2013B060400008）；深圳市城市管理局科技項目“苦苣苔科植物的藥用功能研究和開發(fā)”（201412）；深圳市城市管理局科技項目基金“苦苣苔科植物種質(zhì)創(chuàng)新和開發(fā)利用”（201312）

陳 朋（1981－），男，工程師，執(zhí)業(yè)藥師，碩士，從事中藥學及植物化學研究。E－mail：chenpeng1003＠163.com

＊通訊作者：邱志敬（1981－），男，高級工程師，博士，從事苦苣苔科植物的分類與應(yīng)用研究。E－mail：qiuzhijing＠foxmail.com