汪漢成，薛娟娟，黃艷飛，王茂勝，張長(zhǎng)青

（1.貴州省煙草科學(xué)研究院，貴陽(yáng) 550081；2.長(zhǎng)江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

煙草赤星病菌嘧菌酯抗性突變體的誘導(dǎo)及其生物學(xué)特性

汪漢成1，薛娟娟2，黃艷飛2，王茂勝1，張長(zhǎng)青2

（1.貴州省煙草科學(xué)研究院，貴陽(yáng) 550081；2.長(zhǎng)江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

為探究煙草赤星病菌對(duì)嘧菌酯的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)水平，通過(guò)對(duì)煙草赤星病菌在室內(nèi)含藥平板上的菌絲藥劑馴服和分生孢子紫外誘變，進(jìn)行突變體的生物學(xué)特性的研究，并對(duì)突變體靶標(biāo)基因細(xì)胞色素b進(jìn)行了測(cè)序分析。獲得了4株嘧菌酯抗藥性突變體。其中，菌絲藥劑馴服未獲得突變體；孢子紫外誘變獲得4株突變體，突變率約為0.004%，突變體抗性倍數(shù)分別為42.50、282.50、515和107.50。4株突變體均降低了對(duì)嘧菌酯的敏感性。適合度研究表明，抗藥性突變體具有同敏感菌株同樣的分生孢子萌發(fā)能力和致病能力；菌絲生長(zhǎng)速率較敏感菌株有所降低，3株突變體的分生孢子產(chǎn)量較敏感菌株增強(qiáng)，1株突變體較敏感菌株減弱。抗藥性靶基因細(xì)胞色素b基因部分序列分析表明，突變體在129位和143位的堿基與敏感菌株完全相同，未發(fā)生任何突變。初步認(rèn)為煙草赤星病菌對(duì)嘧菌酯的抗性風(fēng)險(xiǎn)水平較低。

嘧菌酯；抗藥性；煙草赤星病菌；甲氧基丙烯酸酯；突變體

烤煙（Nicotiana tabacum L.）是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物，其在我國(guó)的產(chǎn)量和消費(fèi)量均占全球約40% 左右[1-2]。由Alternaria alternata（Frises）Keissler引起的煙草赤星病是煙草生長(zhǎng)中后期發(fā)生最為嚴(yán)重的葉部病害之一，導(dǎo)致煙葉品質(zhì)下降，烘烤價(jià)值降低[3-5]。該病害具有間歇性和爆發(fā)性的特點(diǎn)，嚴(yán)重時(shí)煙葉發(fā)病率可高達(dá)90%，重病區(qū)減產(chǎn)、減收達(dá)50%以上[6-7]。長(zhǎng)期以來(lái)，煙草赤星病嚴(yán)重威脅我國(guó)煙草的生產(chǎn)。目前，我國(guó)主要采用菌核凈（dimetachlone）來(lái)防治煙草赤星病，長(zhǎng)期高頻率的應(yīng)用已使病原菌群體出現(xiàn)了嚴(yán)重的抗藥性[8]，亟待尋找新的替代防治藥劑，并對(duì)新藥劑的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估。近年來(lái)，甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑陸續(xù)在我國(guó)登記，用于多種鏈格孢屬真菌病害的防治[9-12]。

嘧菌酯（azoxystrobin）是甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑的典型代表。它由瑞士先正達(dá)公司研制開(kāi)發(fā)，并于2001開(kāi)始在中國(guó)登記。它通過(guò)與細(xì)胞色素bcl復(fù)合物中Qo位點(diǎn)結(jié)合，切斷呼吸鏈中的電子傳遞，抑制真菌細(xì)胞能量產(chǎn)生，干擾呼吸，從而抑制菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)[13-15]。嘧菌酯在開(kāi)發(fā)和研究早期，被認(rèn)為具有中等抗藥性風(fēng)險(xiǎn)[16]；但實(shí)際上，在它應(yīng)用2年后，就出現(xiàn)了防治效果下降的現(xiàn)象。目前，被報(bào)道對(duì)甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性的鏈格孢屬病原菌有鏈格孢菌（A.alternata），極細(xì)鏈格孢菌（Alternaria tenuissima），茄鏈格孢（Alternaria solani）和蘋(píng)果褐斑病菌（Alternaria mali）[9,11,17]。嘧菌酯在歐美被用于赤星病的防治，目前還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)煙草赤星病菌對(duì)它產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道。煙草赤星病菌是否對(duì)嘧菌酯存在抗藥性風(fēng)險(xiǎn)目前仍不清楚。

藥劑高選擇壓下病原菌突變體的誘導(dǎo)和其生物學(xué)習(xí)性的研究是評(píng)價(jià)病原菌抗藥性風(fēng)險(xiǎn)的重要方法。為了更好地防治病害，就必須進(jìn)行病原菌對(duì)其防治藥劑產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。本文以煙草赤星病菌敏感性菌株為對(duì)象，進(jìn)行嘧菌酯抗藥性突變體的誘導(dǎo)及突變體的生物學(xué)習(xí)性的研究，旨在評(píng)價(jià)煙草赤星病菌對(duì)嘧菌酯產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)水平。

1 材料與方法

1.1 病原菌及培養(yǎng)條件

野生敏感煙草赤星病菌菌株C2-1，由貴州省煙草科學(xué)研究院微生物實(shí)驗(yàn)室分離和鑒定，用于嘧菌酯抗藥性突變體誘導(dǎo)。馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）用于病原菌的培養(yǎng)及保存。AEA培養(yǎng)基：5 g酵母、6 g NaNO3、6 g KH2PO4、0.5 g KCl、0.25 g MgSO4、20 mL甘油及15 g瓊脂，加去離子水定容至1 L，滅菌，用于敏感性測(cè)定及分生孢子的誘導(dǎo)。

1.2 供試藥劑

93%嘧菌酯由先正達(dá)（中國(guó)）有限公司提供，溶于甲醇配成10 000 mg/L的母液。旁路氧化途徑抑制劑水楊肟酸（SHAM，99%）由美國(guó)Acros Organics公司生產(chǎn)，溶于甲醇配成1.0×105mg/L的母液。用無(wú)菌水將上述母液稀釋成系列濃度的藥液，于4 ℃黑暗條件下保存、備用。藥液中甲醇的含量小于待測(cè)溶液體積的0.5%，此濃度的甲醇不影響煙草赤星病菌分生孢子的萌發(fā)（數(shù)據(jù)略）。以加入相同體積的甲醇處理作為空白對(duì)照。

1.3 抗藥性突變體的誘導(dǎo)

紫外誘變：將敏感菌株C2-1于PDA平板上預(yù)培養(yǎng)4 d，在菌落邊緣制備菌碟（5 mm），將菌碟置于AEA平板上，25 ℃培養(yǎng)7 d后，無(wú)菌水洗滌孢子，獲得分生孢子懸液，并將孢子濃度調(diào)至1.0×105個(gè)/mL，備用。制備嘧菌酯100 mg/L的含藥平板，吸取100 μL的分生孢子懸液涂布于平板上，預(yù)培養(yǎng)2 h后，將平板置于紫外燈下（40 W，垂直距離15 cm）照射20 min，照射后的平板置于25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7 d。從長(zhǎng)出的菌落邊緣挑取少量菌絲繼續(xù)培養(yǎng)，直至產(chǎn)孢，收集分生孢子并將其涂布于嘧菌酯100 mg/L的含藥平板進(jìn)行驗(yàn)證，能夠正常生長(zhǎng)的即為抗藥性突變體。

藥劑馴服誘導(dǎo)：在預(yù)培養(yǎng)菌落邊緣用打孔器制備直徑5 mm的菌餅，將菌餅接種于含嘧菌酯500 mg/L的AEA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)，直至扇形突變菌落出現(xiàn)。共處理200個(gè)菌餅，將獲得的突變體在含嘧菌酯500 mg/L的平板上進(jìn)行再次生長(zhǎng)驗(yàn)證。

1.4 室內(nèi)敏感性測(cè)定

采用孢子萌發(fā)法[18]測(cè)定煙草赤星病菌敏感和抗性菌株對(duì)嘧菌酯的敏感性。分別將0.50 mL各濃度藥液與0.50 mL孢子懸浮液混合均勻，取100 μL該混合液滴于載玻片上，置于保濕培養(yǎng)皿中，28 ℃黑暗條件下培養(yǎng)12 h。嘧菌酯單獨(dú)作用時(shí)的最終供試濃度為0、0.5、1、10和40 mg/L；在100 mg/L水楊肟酸協(xié)同下，嘧菌酯最終供試濃度為0、0.5、1、10和40 mg/L。當(dāng)空白對(duì)照孢子萌發(fā)率達(dá)到90%以上時(shí)，檢查各處理孢子萌發(fā)情況。以孢子芽管長(zhǎng)度大于孢子的短半徑時(shí)視為萌發(fā)。每處理重復(fù)3次，隨機(jī)觀察3個(gè)視野，調(diào)查孢子總數(shù)不少于200個(gè)，記錄孢子萌發(fā)數(shù)及孢子總數(shù)，計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率。

1.5 適合度的測(cè)定

以敏感菌株為對(duì)照，測(cè)定抗性突變體的菌絲生長(zhǎng)、離體平板上的分生孢子產(chǎn)量、分子孢子的萌發(fā)及煙草葉片上的致病力。

1.5.1 菌絲生長(zhǎng) 將從預(yù)培養(yǎng)菌落邊緣制取的5 mm菌餅置于無(wú)藥AEA平板中央，25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)，6天后“十字交叉法”量取菌落直徑。每個(gè)菌株3次重復(fù)。

1.5.2 分生孢子產(chǎn)量與萌發(fā) 參照Caten等[19]孢子產(chǎn)量的測(cè)定方法，測(cè)定各抗性突變體平板上分生孢子的產(chǎn)量。在同一平板內(nèi)，用5 mm直徑打孔器分別在距菌落邊緣2 mm的地方和距接菌餅2 mm的地方制取菌餅；從兩處各隨機(jī)挑取3個(gè)菌餅，共6個(gè)于2 mL離心管中。向離心管中加入1 mL無(wú)菌水，在渦旋儀上渦旋20秒洗下分生孢子，置于顯微鏡下檢查孢子的數(shù)量，計(jì)算單位面積上孢子的產(chǎn)量。各菌株3次重復(fù)。分子孢子的萌發(fā)在上述1.4敏感性測(cè)定的過(guò)程中進(jìn)行檢測(cè)。

1.5.3 致病力 在煙草葉片上測(cè)定各抗藥性突變體的致病力。每菌株選取3片無(wú)病成熟煙草葉片，用無(wú)菌水沖洗干凈，吸干葉片上的水分。每葉片同一部位刺上相同的傷口，在傷口處接種直徑5 mm的菌餅（菌絲面朝上）。然后置于28 ℃、空氣相對(duì)濕度RH＞80%、每天12 h光照/12 h黑暗的條件下培養(yǎng)，9 d后觀察各抗藥性突變體的致病情況。

1.6 抗藥性突變體cyt b基因的測(cè)序與分析

將敏感菌株和突變體于PDA平板上活化，挑取少量菌絲于裝有50 μL Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR[寶生物工程（大連有限公司），TaKaRa貨號(hào)D304]的無(wú)菌PCR中，80 ℃水浴15 min后，低速離心，取上清液作為PCR反應(yīng)的模板。采用特異性引物對(duì)敏感菌株和突變體的部分細(xì)胞色素b基因（cyt b）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。利用特異性引物cytb-3 (5′-CAGAGCACCTAGAACTCT AGTATGAA-3′)和cytb-4(5′-AACAACTCAAGT AAACTCCTCC-3′)對(duì)細(xì)胞色素b基因129位和143位附近的序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增[12]。擴(kuò)增條件為：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72℃ 延伸1 min，共40個(gè)循環(huán)；最終72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后，參照質(zhì)粒pMD19-T（TaKaRa：D102A）的方法將其連接至載體上，將驗(yàn)證后的轉(zhuǎn)化子送生工生物工程上海（股份）有限公司測(cè)序，分析突變體cyt b的堿基變化情況。

1.7 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行處理，以藥劑的濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以對(duì)病菌分生孢子萌發(fā)抑制率的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，建立線形回歸方程，并進(jìn)行相關(guān)性分析。根據(jù)方程計(jì)算嘧菌酯抑制孢子萌發(fā)的EC50值。通過(guò)DPS（7.05）軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。根據(jù)下列公式計(jì)算抗藥性突變體的抗性倍數(shù)：RF=EC50X/EC50WT，其中EC50X為被測(cè)菌株X的EC50值，EC50WT為敏感菌株的EC50值。

2 結(jié) 果

2.1 煙草赤星病菌嘧菌酯抗性突變體的誘導(dǎo)

室內(nèi)平板上藥劑馴服未獲得煙草赤星病菌嘧菌酯抗藥性突變體；而含藥平板上的紫外誘導(dǎo)獲得了煙草赤星病菌嘧菌酯抗藥性突變體4株，分別命名為CX-y1、CX-y2、CX-y3、CX-y4，誘導(dǎo)率為0.004%。表明該病菌具有在田間產(chǎn)生嘧菌酯抗藥性的遺傳和生化基礎(chǔ)，但在室內(nèi)通過(guò)紫外誘變來(lái)獲得煙草赤星病菌嘧菌酯抗性突變體的幾率很低。

2.2 室內(nèi)敏感性測(cè)定

由表1看出，在嘧菌酯0～40 mg/L測(cè)試范圍內(nèi)，隨著處理濃度的增加，所測(cè)菌株分生孢子萌發(fā)的抑制均逐漸增強(qiáng)。嘧菌酯1 mg/L單獨(dú)作用時(shí)，敏感菌株C2-1不能萌發(fā)；而突變體CX-y1、CX-y2、CX-y3和CX-y4在最高測(cè)試濃度40 mg/L時(shí)仍均有萌發(fā)，其萌發(fā)率分別為80%、72.80%、70.80%和68.31%。在100 mg/L水楊肟酸協(xié)同下，敏感菌株C2在0.5 mg/L嘧菌酯作用下不能萌發(fā)；而突變體CX-y1、CX-y2、CX-y3和CX-y4在最高測(cè)試濃度40 mg/L時(shí)的萌發(fā)率分別為9.70%、9.80%、7.60%和9.60%。

所有抗藥性突變體均降低了對(duì)嘧菌酯的敏感性。嘧菌酯單獨(dú)作用下，敏感菌株孢子萌發(fā)的EC50值為0.05 mg/L，突變體的EC50值均＞10 mg/L；在100 mg/L的水楊肟酸協(xié)同下，敏感菌株孢子萌發(fā)的EC50值為0.004 mg/L，突變體CX-y1、CX-y2、CX-y3及CX-y4的EC50值分別為0.17、1.13、2.06及0.43 mg/L，突變體的抗性倍數(shù)分別為42.50、282.50、515和107.50（表2）。

2.3 適合度

以敏感菌株為對(duì)照，測(cè)定了煙草赤星病菌嘧菌酯抗藥性菌株4個(gè)方面的適合度。結(jié)果表明，在適合度的4個(gè)方面，各突變體間存在著較大的差異。

在菌絲生長(zhǎng)速率上，4株突變體的菌絲生長(zhǎng)速度均較敏感菌株慢，其中最快的為CX-y2，其次為CX-y3和CX-y4，CX-y1最慢；在產(chǎn)孢量上，突變體CX-y1和CX-y2的產(chǎn)孢量較敏感菌株多，CX-y3與敏感菌株相當(dāng)，CX-y4產(chǎn)孢量最少，低于敏感菌株；在分生孢子萌發(fā)率上，所有突變體的萌發(fā)率與敏感菌株相當(dāng)；在致病力上，所有突變體均能順利侵染煙草葉片，并使其發(fā)?。ū?）。

表1 嘧菌酯及其協(xié)同SHAM對(duì)煙草赤星病菌敏感和抗藥性突變體孢子萌發(fā)的影響Table 1 Conidia germination sensitivity of Alternaria alternata to azoxystrobin among sensitive and resistant isolates with the synergism of salicylhydroxamic acid

表2 嘧菌酯及其協(xié)同SHAM對(duì)煙草赤星病菌敏感菌和抗藥性突變體的毒力Table 2 Toxicity of azoxystrobin with salicylhydroxamic acid to Alternaria alternata among the sensitive and resistant isolates

表3 煙草赤星病菌嘧菌酯抗性突變體的適合度Table 3 Fitness components of the resistant and sensitive isolates of Alternaria alternata to azoxystrobin

2.4 抗藥性突變體cyt b基因的測(cè)序與分析

cyt b基因129位和143位堿基發(fā)生的點(diǎn)突變是病原菌對(duì)嘧菌酯產(chǎn)生抗藥性的主要分子機(jī)理。以敏感菌株和突變體的DNA作為模版，利用特異性引物cytb-3/cytb-4對(duì)各菌株的cyt b基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其擴(kuò)增片段長(zhǎng)度均在150 bp左右。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化、鏈接pMD19-T載體及測(cè)序，成功獲得了敏感菌株和突變體的cyt b基因的部分序列。測(cè)序結(jié)果與GenBank中的已有序列DQ209283.1進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果表明4種突變菌株所測(cè)cyt b部分基因與敏感菌株的相同，基因的129位和143位堿基均未發(fā)生突變（圖1）。

圖1 煙草赤星病菌嘧菌酯敏感菌株和抗藥性突變體 cyt b基因部分序列比對(duì)結(jié)果Fig. 1 Sequence comparison of partial cyt b gene from both the azoxystrobin resistant mutants and the sensitive isolate of Alternaria alternate

3 討 論

煙草赤星病菌在一個(gè)生產(chǎn)季節(jié)可以造成多次再侵染，同時(shí)產(chǎn)生大量的分生孢子，這些孢子可以通過(guò)風(fēng)、雨水等很容易地結(jié)合而進(jìn)行遺傳物質(zhì)的交換與重組。因此，可以初步將它劃分為“中-高”等風(fēng)險(xiǎn)的病原菌。目前，殺菌劑抗性委員會(huì)還未對(duì)煙草赤星病菌進(jìn)行抗藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)。本文誘導(dǎo)了煙草赤星病菌嘧菌酯抗藥性的突變體，研究了突變體的生物學(xué)性狀，并對(duì)突變體突變潛在的分子機(jī)理進(jìn)行了探索。研究結(jié)果對(duì)評(píng)價(jià)煙草赤星病菌對(duì)嘧菌酯的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)具有重要的意義。

對(duì)病原菌進(jìn)行殺菌劑抗藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法有很多，如：室內(nèi)對(duì)病原菌孢子的紫外線誘變、對(duì)孢子的N-亞硝基甲脲誘變、以及在田間高劑量的藥劑馴服等。然而，不同方法獲得的抗藥性突變體會(huì)表現(xiàn)出不同的適合度。病原菌抗藥性菌株適合度的強(qiáng)弱對(duì)指導(dǎo)病害的防治具有重要的指導(dǎo)意義。同煙草赤星病菌敏感菌株相比，嘧菌酯抗性突變體或菌絲生長(zhǎng)速率減小而產(chǎn)孢量變大，或菌絲生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量均減小。因此本文室內(nèi)誘得的煙草赤星病菌嘧菌酯抗性菌株的田間適合能力可能比較弱；其在田間環(huán)境條件下的適應(yīng)能力及其與敏感菌株在田間的競(jìng)爭(zhēng)能力還有待于進(jìn)一步研究。據(jù)報(bào)道，甲氧基丙烯酸酯類(lèi)藥劑抗性是由細(xì)胞色素b的基因發(fā)生點(diǎn)突變引起的，包括氨基酸143位的丙氨酸突變?yōu)楦拾彼幔碐143A）[12]，氨基酸129位的亮氨酸突變?yōu)楸奖彼幔‵129L）[20]，及氨基酸137位的精氨酸突變?yōu)楦拾彼幔℅137R）[21]。G143A突變的抗性倍數(shù)一般在100倍以上，F(xiàn)129L和G137R突變的抗性倍數(shù)一般在5～15倍之間，少數(shù)會(huì)大于50倍[22]。本文通過(guò)紫外誘變獲得了4株煙草赤星病菌嘧菌酯抗性突變體，突變幾率低，抗藥性倍數(shù)＞100的3株、＜100的1株，突變體的適合度均低于敏感菌株。低頻率突變體的獲得可能與誘變所采用的方法和材料有關(guān)，同時(shí)紫外誘變具有很大的隨機(jī)性，以致可能出現(xiàn)cyt b基因靶位點(diǎn)以外的突變體。本文檢測(cè)突變體的cyt b基因潛在位點(diǎn)均未有發(fā)生突變，說(shuō)明煙草赤星病菌對(duì)嘧菌酯可能存在其他的潛在突變基因或者突變位點(diǎn)，有必要進(jìn)一步深入研究以探尋其產(chǎn)生抗藥性的分子機(jī)理。

煙草赤星病通常在煙草采烤期發(fā)生，危害時(shí)間約2個(gè)月。雖然條件適宜時(shí)病原菌能夠迅速流行與傳播；但同蔬菜灰霉病、白粉病等相比，赤星病菌的再侵染次數(shù)較少，病原菌群體在藥劑壓力下的接觸時(shí)間相對(duì)較少。因而，可把煙草赤星病菌初步視為低等風(fēng)險(xiǎn)病原菌。本文通過(guò)藥劑馴服和紫外誘變均沒(méi)有獲得嘧菌酯靶基因的突變體。結(jié)合煙草赤星病菌的生物學(xué)特性，該病原菌對(duì)嘧菌酯的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)該屬于低等水平。

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Induction and Characterization of Laboratory Mutants of Alternaria alternata Resistant to Azoxystrobin

WANG Hancheng1, XUE Juanjuan2, HUANG Yanfei2, WANG Maosheng1, ZHANG Changqing2

（1. Guizhou Academy of Tobacco Science, Guiyang 550081, China; 2. College of Agriculture, Yangtze University, Jingzhou, Hubei 434025, China）

This study was conducted to analyze the risk of resistance of Alternaria alternata to azoxystrobin. Resistant mutants were induced by incubating mycelial plugs and mutating conidia on poisoned agar plates. Mutant characterization and mechanism of resistance were also studied and the target gene cyt b was analyzed using partial sequence analysis. Four mutants of A. alternata with resistance to azoxystrobin were isolated. No mutant was obtained through mycelial plug incubation while four mutants were isolated through conidia mutation, with a frequency of around 0.004%. The resistance factors for the four mutants were 42.50, 282.50, 515 and 107.50, respectively. All resistant strains displayed a highly reduced sensitivity to azoxystrobin. Studies of fitness parameters in the wild-type and mutant strains of A. alternata showed that all resistant isolates had equal abilities on conidia germination and virulence, and less ability in mycelial growth. Three mutants showed enhanced ability of conidia production, while the other one decreased its’ conidia production. Sequence analysis of the target gene cyt b showed that there was no point mutation at position 129 or 143 on neither the four mutants or the sensitive isolate of A. alternata. This is believed to be the first report of different levels of azoxystrobin resistance in A. alternata. These studies suggested that the risk of resistance development in A. alternata was low for azoxystrobin.

azoxystrobin; fungicide resistance; Alternaria alternata; strobilurin fungicide; mutant

S435.72

1007-5119（2016）06-0066-06

10.13496/j.issn.1007-5119.2016.06.012

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“基于表型組學(xué)的嘧菌酯對(duì)煙草赤星病菌的作用機(jī)理及其抗性機(jī)理研究”（31360448）

汪漢成，男，博士，研究員，主要從事植物保護(hù)及煙草微生物研究。E-mail：xiaobaiyang126@hotmail.com

2016-05-10

2016-09-13