一株堿蓬內(nèi)生真菌的鑒定及促生活性產(chǎn)物的初步研究

于飛 谷玥 張奇 卜寧

（沈陽師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，沈陽 110034）

一株堿蓬內(nèi)生真菌的鑒定及促生活性產(chǎn)物的初步研究

于飛 谷玥 張奇 卜寧

（沈陽師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，沈陽 110034）

對遼寧盤錦紅海灘的鹽生堿蓬內(nèi)生真菌JP4-1進(jìn)行鑒定并研究其促生活性產(chǎn)物成分。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征及18S rDNA序列分析對菌種進(jìn)行鑒定，運(yùn)用過濾離心、超聲破碎、萃取、旋蒸等技術(shù)提取活性成分，并采用水培法研究該菌株發(fā)酵液對水稻幼苗的促生長活性。結(jié)果顯示，經(jīng)鑒定，JP4-1菌株為小叢殼屬（Glomerella sp.），菌絲分枝，有隔，產(chǎn)孢；以正丁醇處理的JP4-1菌株胞外發(fā)酵液的小分子萃取物可使水稻幼苗的株高和葉片干重分別提高10.84%和14.67%，葉綠素含量提高44.22%，促生長效果明顯。堿蓬內(nèi)生真菌JP4-1的胞外發(fā)酵產(chǎn)物對水稻幼苗具有明顯的促生長作用，其中以正丁醇萃取得到的小分子活性產(chǎn)物促生效果最為顯著。

堿蓬內(nèi)生菌；鑒定；促生活性

植物內(nèi)生菌是指一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官內(nèi)部而不使植物患病的真菌或細(xì)菌［1］。植物內(nèi)生菌與其宿主植物互惠共生，協(xié)同進(jìn)化，可以產(chǎn)生具有多種生物學(xué)功能的活性代謝產(chǎn)物［2］。1993年，Stierle等［3］從短葉紅豆杉Taxus brevifolia的韌皮部分離到一株產(chǎn)抗癌物質(zhì)紫杉醇的內(nèi)生真菌。從此掀起了對植物內(nèi)生菌研究的熱潮。植物內(nèi)生真菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物具有豐富的生物學(xué)功能多樣性和化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣性，這些次生代謝產(chǎn)物從功能作用上可分為抑菌物質(zhì)類、殺蟲物質(zhì)類、植物生長調(diào)節(jié)劑類、抗腫瘤活性物質(zhì)類及其他類型的活性產(chǎn)物［4］。目前，大多數(shù)研究認(rèn)為，植物內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物生物學(xué)活性作用機(jī)制在于其存在著與宿主植物相似的基因結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)宿主基因的表達(dá)，調(diào)節(jié)宿主植物體內(nèi)的代謝途徑，從而實(shí)現(xiàn)對宿主植物的促生作用［5］。

堿蓬（Suaeda salsa）是生長于高鹽堿土壤中的一種特殊植物，具有抗鹽堿、耐貧瘠，抗病蟲害同時(shí)可以適應(yīng)高濕度環(huán)境等特點(diǎn)。堿蓬可以降低土壤含鹽量，增加土壤有機(jī)質(zhì)含量［6］，加速潮灘土壤化過程，被譽(yù)為鹽堿地改造的“先鋒植物”［7］。對堿蓬的蛋白質(zhì)組學(xué)分析表明，相關(guān)蛋白質(zhì)點(diǎn)的表達(dá)使堿蓬可通過光合作用，能量代謝，離子運(yùn)輸，脅迫防御等多種途徑的協(xié)同作用耐受一定程度的鹽堿脅迫［8］；從堿蓬中分離得到的植物內(nèi)生菌具有豐富的多樣性且多為可以生存于鹽堿環(huán)境的極端微生物。這種極端微生物一般具有與其生長環(huán)境相適應(yīng)的特殊的代謝機(jī)制，能產(chǎn)生特殊的代謝產(chǎn)物，并對宿主產(chǎn)生一定的影響［9］。Khan等［10］認(rèn)為，植物內(nèi)生菌可以產(chǎn)生與植物激素相類似的生物活性成分，從而實(shí)現(xiàn)對植物的促生長作用。但是微生物代謝產(chǎn)物對植物促生機(jī)制的研究仍然較少。

本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)從盤錦紅海灘鹽生堿蓬中共分離得到122株堿蓬內(nèi)生真菌，證實(shí)了堿蓬內(nèi)生真菌具有豐富的多樣性［11］。本研究以從122株堿蓬內(nèi)生真菌中篩選的JP4-1為實(shí)驗(yàn)菌株，對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)鑒 定及生物學(xué)特性研究。利用超聲破碎、萃取等技術(shù)手段，通過水培試驗(yàn)及測量水稻幼苗株高、葉片干重及葉綠素含量等生理指標(biāo)等評價(jià)其代謝產(chǎn)物的促生長作用及具有促生活性的物質(zhì)成分。旨在探究極端內(nèi)生真菌與植物互作的作用機(jī)理，為植物內(nèi)生菌（資源）活性產(chǎn)物的研究與開發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 堿蓬內(nèi)生真菌JP4-1菌株，由沈陽師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 水稻種子 常規(guī)水稻遼星1號，由遼寧省稻作研究所提供。

1.1.3 主要試劑 乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、真菌基因組快速提取試劑盒購自生工生物（上海）股份有限公司、Hoagland營養(yǎng)液：含0.5 mol/L Ca（NO3）2、0.5 mol/L KNO3、0.25 mol/L MgSO4、0.2 mol/L KH2PO4；50 mmol/L H3BO3、0.6 mmol/L MnSO4、0.3 mmol/L CuSO4·5H2O、0.7 mmol/L ZnSO4·7H2O、0.6 mmol/L H2MoO4、0.6 mmol/L Na2MoO4、20 mmol/L Na-EDTA、20 mmol/L FeSO4·7H2O。

1.1.4 培養(yǎng)基 馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PSA）：含20%馬鈴薯、2%蔗糖、2%瓊脂，120℃滅菌20min。馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（PSB）：含20%馬鈴薯、2%蔗糖，120℃滅菌20 min。

1.2 方法

1.2.1 JP4-1菌株的鑒定

1.2.1.1 JP4-1菌株的形態(tài)學(xué)特征觀察

（1）菌株活化：挑取保存于4℃冰箱中的JP4-1菌株接種于PSA斜面培養(yǎng)基，于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至長滿菌落以活化菌種，備用。

（2）菌落形態(tài)觀察：接種活化后的JP4-1菌絲于PSA平板上，25℃倒置培養(yǎng)數(shù)天。期間每24 h觀察并記錄菌落直徑、菌落形態(tài)，有無色素生成等菌絲生長狀態(tài)。

（3）菌絲形態(tài)觀察：利用小室培養(yǎng)法對JP4-1菌株的菌絲形態(tài)進(jìn)行觀察。用無菌玻璃棒沾取少量液體狀態(tài)下的PSA培養(yǎng)基，滴于無菌蓋玻片。待培養(yǎng)基凝固后，用無菌牙簽挑取少量活化的JP4-1菌絲接種于培養(yǎng)基表面，將蓋玻片倒扣于單凹玻片上，用凡士林封片；25℃培養(yǎng)數(shù)天。于顯微攝影系統(tǒng)下觀察菌絲形態(tài)。

1.2.1.2 JP4-1菌株的18SDNA序列分析 用真菌基因組快速提取試劑盒提取JP4-1的DNA。以菌株JP4-1基因組DNA為模板，以18S-ITS1：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'和18S-ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。采用20 μL PCR反應(yīng)體系，反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3 min；95℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min；4℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物由生工生物（上海）股份有限公司進(jìn)行純化與測序，將獲得的18S rDNA序列在GenBank中通過BLAST進(jìn)行同源性序列比對，使用MEGA6.0構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.2.2 JP4-1菌株促生活性產(chǎn)物的分離

1.2.2.1 JP4-1菌株胞內(nèi)、胞外產(chǎn)物的分離 將對數(shù)期生長（培養(yǎng)120 h）的JP4-1菌液用過濾器過濾，分別收集菌絲和發(fā)酵液。超聲破碎菌絲體細(xì)胞，溶于無菌水制成胞內(nèi)產(chǎn)物溶液，而過濾后的發(fā)酵液為胞外產(chǎn)物溶液。

1.2.2.2 JP4-1菌株大分子胞外產(chǎn)物與小分子胞外產(chǎn)物的分離 收集培養(yǎng)對數(shù)期生長的JP4-1菌株發(fā)酵液600 mL，加入3倍體積的95%乙醇，攪拌并離心，分別收集上清和多糖等大分子物質(zhì)沉淀，沉淀用60℃烘干至恒重。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除盡上清中的乙醇，所得粘稠液體為小分子活性產(chǎn)物。

1.2.2.3 小分子活性產(chǎn)物的萃取 根據(jù)相似相溶的原理，用3種不同極性（乙酸乙酯、正丁醇和石油醚）的有機(jī)溶劑對上述JP4-1菌株發(fā)酵液中小分子胞外活性產(chǎn)物部分進(jìn)行萃?。盒》肿踊钚援a(chǎn)物與乙酸乙酯等體積混合于分液漏斗，劇烈震蕩10 min后靜置分層，分離有機(jī)相，水相反復(fù)用乙酸乙酯萃取3次，合并3次萃取所得有機(jī)相。上一步中所得水相改用正丁醇重復(fù)萃取3次，合并有機(jī)相。剩余水相用石油醚以同樣的方法萃取3次，合并有機(jī)相。旋蒸除盡上述所得各有機(jī)相中的有機(jī)溶劑。

1.2.3 JP4-1菌株促生活性產(chǎn)物作用的測定

1.2.3.1 水稻幼苗的培育和處理 取飽滿健康的水稻種子，加水沒過水稻種子并于28℃黑暗處24 h，將水稻種子平鋪于濕潤的濾紙上并用濕潤的6層紗布覆蓋，置于30℃，催芽48 h，期間保持紗布濕潤。取發(fā)芽的水稻種子10 g平鋪于覆蓋紗網(wǎng)并裝滿Hoagland營養(yǎng)液的塑料燒杯（容積600 mL）中央。于人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)發(fā)芽的水稻種子至兩葉期。培養(yǎng)條件：第一階段：16 h，濕度80%，溫度28℃，光照100%；第二階段：8 h，濕度80%，溫度26℃，光照0%。培養(yǎng)過程中，每天補(bǔ)充營養(yǎng)液。水稻幼苗培養(yǎng)5-7 d后，除去其中長勢較弱的幼苗，棄盡原有的營養(yǎng)液，盡量使每盆的水稻幼苗的長勢、數(shù)量相同。用容器總?cè)莘e5%的菌株活性產(chǎn)物不同部分的溶液作用于水稻幼苗，剩余液體用Hoagland營養(yǎng)液補(bǔ)齊。實(shí)驗(yàn)組分組為：A組：胞外產(chǎn)物與胞內(nèi)產(chǎn)物；B組：胞外小分子產(chǎn)物與大分子產(chǎn)物；C組：乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、石油醚萃取物。分別用以上液體處理兩葉期水稻幼苗。以容器總?cè)莘e5%的去離子無菌水處理的水稻幼苗做對照組（CK）。隨機(jī)擺放于人工培養(yǎng)箱按上述條件繼續(xù)培養(yǎng)5-7 d，期間每天補(bǔ)充營養(yǎng)液并不斷變換每盆幼苗的位置，盡量使其受光均勻。

1.2.3.2 JP4-1菌株促生活性產(chǎn)物作用的測定 （1）水稻幼苗生長指標(biāo)的測定：隨機(jī)抽取處理后培養(yǎng)7 d的水稻幼苗，測量其株高、根長。分離地上部分與地下部分，80℃烘干至恒重，分別測量水稻幼苗地上部分干重。記錄原始數(shù)據(jù)。（2）水稻幼苗葉綠素含量的測定：取新鮮水稻幼苗葉片0.1 g，剪碎置于10 mL離心管，加入乙醇丙酮（V/V =1∶1）混合液5 mL，黑暗處浸泡24 h后搖勻，為提取液。吸取提取液1 mL加入2 mL乙醇丙酮混合液，混勻。以3 mL乙醇丙酮混合液為空白調(diào)零，用分光光度計(jì)分別測量470 nm，645 nm，663 nm處的OD值。按如下公式計(jì)算水稻幼苗葉綠素的含量：

葉綠素a含量（Ca）（mg/g）=（12.7 × OD663-2.69 × OD645）× Vt × 稀釋倍數(shù) /FW

葉綠素b含量（Cb）（mg/g）=（22.9 × OD645-4.68 × OD663）× Vt ×稀釋倍數(shù)/FW

葉綠素總量 = Ca + Cb

其中，Vt表示提取液體積（mL），F(xiàn)W表示葉片鮮重（g）。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析 將所得數(shù)據(jù)用SPSS 20.0和Microsoft Excel 2007軟件進(jìn)行整理，統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 JP4-1菌株的鑒定

話語(4)盡管在結(jié)構(gòu)上是完整的，但是，即使我們搞清楚了指示詞this的所指，仍不能確定這種鋼材對做什么來說是不夠結(jié)實(shí)的。(4a)只表達(dá)了一個(gè)弱命題或命題基，不是(4)的確切隱意。要想弄清該句的準(zhǔn)確隱意，必須根據(jù)語境補(bǔ)充完善特定信息來實(shí)現(xiàn)話語的真值條件，從而得出該句的隱意(4b)。這個(gè)過程不僅受語義限定，也受語用制約。

2.1.1 JP4-1菌株的形態(tài)學(xué)特征 內(nèi)生真菌JP4在PSA培養(yǎng)基上平均生長速度為10 mm/d，菌落白色，致密，均勻，潮濕，邊緣整齊。菌落背面生長后期會(huì)出現(xiàn)紅色和黑色色素（圖1）。JP4-1的菌絲在光學(xué)顯微鏡下呈無色，菌絲分枝，有隔，產(chǎn)孢（圖2）。

2.1.2 JP4-1菌株的18SDNA序列系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析 菌株JP4-1的18S rDNA序列經(jīng)BLAST比對，可鑒定JP4-1菌株為小叢殼屬（Glomerella sp.），基因同源相似度達(dá)99%。MEGA6.0構(gòu)建菌株的系統(tǒng)進(jìn)化樹如圖3所示。

圖1 JP4-1的菌落形態(tài)

圖2 JP4-1的菌絲形態(tài)

2.2 JP4-1菌株對水稻幼苗的促生活性研究

2.2.1 JP4-1菌株胞內(nèi)、胞外產(chǎn)物的促生活性

2.2.1.1 水稻幼苗生長指標(biāo) 分別用胞外產(chǎn)物溶液和胞內(nèi)產(chǎn)物溶液處理兩葉期水稻幼苗5 d后，分別隨機(jī)測量10株水稻幼苗的株高和葉片干重。結(jié)果（表1）表明，用胞外產(chǎn)物處理的水稻幼苗株高比對照組提高了8%，干重增加了11.11%。用胞內(nèi)產(chǎn)物溶液處理的水稻幼苗株高相比對照組僅提高了2%，干重增加了3%，增加不顯著?？梢?，JP4菌株的胞外代謝產(chǎn)物對水稻幼苗的生長指標(biāo)有一定的促進(jìn)作用。

表1 JP4-1胞內(nèi)產(chǎn)物與胞外產(chǎn)物對水稻幼苗的促生長作用

圖3 基于18S rDNA序列構(gòu)建的JP4-1的系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.2.1.2 水稻幼苗葉綠素含量的測定 用胞外產(chǎn)物和胞內(nèi)產(chǎn)物溶液分別處理的水稻幼苗，隨機(jī)抽取10株幼苗測量470 nm、645 nm、663 nm處的OD值，計(jì)算葉綠素a、葉綠素b和葉綠素總量。結(jié)果（圖4）表明，胞外產(chǎn)物處理的水稻幼苗葉綠素a和葉綠素總量相對于用無菌去離子水處理的對照組相比提高了10.89%和11.48%，差異顯著，胞內(nèi)產(chǎn)物處理的實(shí)驗(yàn)組的葉綠素含量與對照組相比提高不顯著。

圖4 JP4-1的胞外產(chǎn)物和胞內(nèi)產(chǎn)物對水稻幼苗葉綠素含量的影響

2.2.2 JP4-1菌株大分子胞外產(chǎn)物與小分子胞外產(chǎn)物的促生活性

2.2.2.1 水稻幼苗生長指標(biāo) 用醇沉法對菌株的胞外代謝產(chǎn)物進(jìn)一步分離，用分離得到的小分子上清和粗多糖沉淀分別處理水稻幼苗，隨機(jī)測量10株水稻幼苗的株高和葉片干重，所得結(jié)果如表2所示。其中，小分子產(chǎn)物處理的水稻幼苗與對照（水處理）相比，株高和干重分別提高了19.77%和19.51%；而粗多糖等大分子沉淀物質(zhì)處理的水稻幼苗株高僅提高了4.46%，葉片干重提高相對于對照組不顯著。

表2 JP4-1發(fā)酵液胞外小分子和胞外大分子對水稻幼苗生長指標(biāo)的影響

2.2.3 JP4-1菌株胞外發(fā)酵液的小分子萃取物的促生活性

2.2.3.1 水稻幼苗生長指標(biāo) 對JP4發(fā)酵液的小分子成分用乙酸乙酯、正丁醇和石油醚進(jìn)一步萃取分離，用所得3種萃取產(chǎn)物處理水稻幼苗后的結(jié)果（表3）表明，乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物處理的水稻幼苗的株高和葉片干重與對照組相比提高不顯著，正丁醇萃取物可使水稻幼苗的株高和干重分別提高10.84%和14.67%，促生長作用最為顯著。

圖5 JP4-1發(fā)酵液胞外小分子物質(zhì)和胞外大分子物質(zhì)對水稻幼苗葉綠素含量的影響

表3 JP4-1發(fā)酵液小分子上清不同萃取成分對水稻幼苗生長指標(biāo)的影響

圖6 JP4-1發(fā)酵液小分子上清不同萃取成分對水稻幼苗葉綠素含量的影響

2.2.3.2 水稻幼苗葉綠素含量 正丁醇萃取物處理后的水稻幼苗，葉綠素a、葉綠素b和葉綠素總含量相比于對照組分別顯著提高了43.18%、48.05%和44.22%（圖6），乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物處理后水稻幼苗的葉綠素含量與對照組相比沒有顯著差異。

3 討論

植物內(nèi)生真菌具有豐富的多樣性，廣泛分布于宿主植物的各大器官［12］。堿蓬內(nèi)生真菌JP4-1是從堿蓬葉部分離純化得到的一種菌群，其分子鑒定為小叢殼屬（Glomerella sp.）。團(tuán)隊(duì)以往的研究表明，在盤錦紅海灘堿蓬組織中，共分離到122株植物內(nèi)生真菌，共13屬；其中，小叢殼菌屬占12.9%，共分離到15株，屬于堿蓬內(nèi)生真菌中的主要菌群［13］。這與鈕旭光等［14］的調(diào)查結(jié)果是一致的。

近年來，微生物的活性代謝產(chǎn)物越來越受到廣泛的關(guān)注，已經(jīng)成為一種非常重要的微生物資源。利用微生物活性產(chǎn)物制成的微生物生長促進(jìn)劑，正成為農(nóng)業(yè)環(huán)境友好型且能夠促進(jìn)可持續(xù)發(fā)展的新興科技手段。目前，黑龍江等農(nóng)業(yè)大省正逐步將微生物菌劑應(yīng)用于固氮、解磷等農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐，取得了良好的經(jīng)濟(jì)效益［15］。但是植物與微生物互作的機(jī)制研究仍然較少，多集中于對微生物生長促進(jìn)劑作用機(jī)制的研究。其中，比較多的一種說法是植物內(nèi)生菌能夠分泌植物激素或類似物促進(jìn)植物生長［16］。王國基等［17］從玉米根際分離到的262株P(guān)GPR菌株中，有15株菌株具有分泌IAA的能力，對玉米具有良好的促生長作用。王維［18］分離到的5株半夏內(nèi)生真菌均可產(chǎn)生一定量的IAA，但是不同菌株間產(chǎn)生的量有一定的差異，并且對宿主植物的促生狀況也不相同。本試驗(yàn)以水稻幼苗植株的株高、葉片干重和葉綠素含量作為測量依據(jù)討論了堿蓬內(nèi)生真菌JP4-1代謝產(chǎn)物的促生活性，測量這些生長參數(shù)能夠直觀反應(yīng)水稻幼苗的生長狀況，葉綠素含量還能反應(yīng)植物的營養(yǎng)狀況和健康狀況［19］，具有一定的研究意義。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過菌株JP4-1胞外發(fā)酵產(chǎn)物處理的水稻幼苗生長狀況明顯優(yōu)于對照組，葉綠素含量顯著提高。說明JP4-1菌株對水稻幼苗具有一定的促生長作用。

通過超聲破碎，萃取等手段對JP4的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離、分析，發(fā)現(xiàn)有效的促生長物質(zhì)為正丁醇的萃取產(chǎn)物，其在株高、干重以及葉綠素總量方面有明顯的促進(jìn)作用。將萃取產(chǎn)物的具體成分利用液相色譜法進(jìn)行分析，并與植物激素標(biāo)準(zhǔn)樣進(jìn)行比對，目前初步確定含有植物生長素類物質(zhì)，如細(xì)胞分裂素、赤霉素、生長素、脫落酸等植物生長激素成分。這與袁志林［20］的研究結(jié)果基本一致。但具體的成分與含量需在后續(xù)試驗(yàn)中利用液相色譜、質(zhì)譜分析和核磁共振技術(shù)予以進(jìn)一步探究。以探討其具體成分及是否有新型促生物質(zhì)的存在，從而進(jìn)行其促生長機(jī)制的研究。在本研究水培水稻幼苗過程中發(fā)現(xiàn)，利用上清液的各萃取成分分別處理的水稻幼苗長勢明顯弱于用上清液各種成分混合處理的水稻幼苗，即上清中各成分聯(lián)合作用的促生效果優(yōu)于上清萃取后各單一成分的作用效果，其機(jī)制如何，有待進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

堿蓬內(nèi)生真菌JP4-1，經(jīng)rDNA-ITS序列分析鑒定為小叢殼屬（Glomerella sp.），其胞外代謝產(chǎn)物作用于水稻幼苗可使幼苗的生長指標(biāo)和葉綠素含量顯著提高，有助于水稻幼苗的生長和有機(jī)物的合成。胞外代謝產(chǎn)物中正丁醇的萃取成分為水稻幼苗促生長最有效的活性成分。

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（責(zé)任編輯 李楠）

The Identification of a Fungal Endophyte of Suaeda salsa and Preliminarily Research on Active Products of Promoting Growth

YU Fei GU Yue ZHANG Qi BU Ning
（College of Chemistry and Life Sciences，Shenyang Normal University，Shenyang 110034）

The purposes of this work are to identify the endophyte fungus JP4-1 of Suaeda salsa in Red Beach of Panjin，Liaoning Province，and to research the growth promotion activity of its metabolites. Endophytic fungus JP4-1 was identified using its morphological features and 18S rDNA，and several technical means such as filtering centrifuge，ultrasonic crushing，extraction，and rotary evaporateion were used to extract its active components，and hydroponic experiments were taken to test the growth promotion activity of its fermentation broth to rice seedlings. The JP4-1 was identified as Glomerella sp. with hyphae branched，septate，and producing spores. The result of hydroponic experiment revealed that the micromolecular products extracted from fermented liquid with n-butanol promoted the plant height 10.84%，dry weight of leaves 14.67%，and chlorophyll content 44.22% of the rice seedlings，i.e.，the growth promotion effects were remarkable. In conclusion，the extracellular fermentation products by the endophyte fungus JP4-1 of S. salsa significantly promoted the growth of rice seedlings，and the micromolecular active products extracted by n-butanol had the most significant promotion effects.

fungal endophyte；identification；growth promotion activity

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.05.020

2015-09-09

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31270369），沈陽師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心主任基金資助項(xiàng)目（SY201102）

于飛，女，碩士研究生，研究方向：資源與應(yīng)用微生物；E-mail：qq-yf@126.com

卜寧，女，碩士生導(dǎo)師，研究方向：資源與應(yīng)用微生物；E-mail：309226126@qq.com