2 513例抗核抗體與抗核抗體譜檢測結果對比分析

蒲澤晏，胥國強，李祥坤，李　鳳，黃雪梅

(遂寧市中心醫(yī)院檢驗科，四川遂寧 629000)

·論著·

2 513例抗核抗體與抗核抗體譜檢測結果對比分析

蒲澤晏，胥國強，李祥坤，李鳳，黃雪梅

(遂寧市中心醫(yī)院檢驗科，四川遂寧 629000)

摘要:目的分析本實驗室抗核抗體(ANA)與抗核抗體譜(ANAs)15項聯(lián)合檢測的結果，并探討兩者之間的關系。方法分別用間接免疫熒光法(IIF)和免疫印跡法(IBT)檢測患者ANA和ANAs，判斷其ANA滴度、熒光模型和ANAs結果，并對ANA和ANAs檢測結果進行對比分析。結果471例ANA陽性患者標本中，顆粒型161例，均質型110例，胞質型96例、核仁型37例、著絲點型28例，其他型合計39例；滴度為1∶100者196例，占41.61%(196/471)，其中ANAs陽性53例，占27.04%(53/196)；滴度為1∶320者123例，占26.11%(123/471)，其中ANAs陽性67例，占54.47%(67/123)；滴度為1∶1 000者152例，占32.27%(152/471)，其中ANAs陽性132例，占86.84%(132/152)；2 042例ANA陰性標本中45例ANAs檢測陽性，陽性率為2.2%(45/2042)；高滴度ANA患者血清中ANAs的陽性率高于低滴度(χ2=123.132,P<0.05)。結論不同滴度的ANA與ANAs之間有一定的關系，如果以ANA進行過篩，陽性再做ANAs會漏檢部分患者，建議IIF和IBT聯(lián)合應用，防止風濕病的漏診。

關鍵詞:抗核抗體；抗核抗體譜；間接免疫熒光法；免疫印跡法

抗核抗體(ANA)是抗細胞核內(nèi)成分的抗體，因為細胞核包含多種成分，所以有抗核內(nèi)多種物質的抗體譜即抗核抗體譜(ANAs)，ANA屬于自身抗體。自身抗體的檢測對風濕病的診斷和鑒別診斷具有重要價值，尤其是結締組織病(CTD)的早期診斷至為重要[1]。目前國內(nèi)外檢測ANA的方法主要有間接免疫熒光法(IIF)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，廣泛用于風濕病的篩查[2-4]。國內(nèi)外很多實驗室為了節(jié)省檢測成本，只將ANA陽性的標本才做特異性ANAs檢測。還有一些實驗室僅用自動化儀器檢測特異性的ANAs、不作ANA的IIF或免疫印跡法(IBT)篩查。本文通過對2 513例ANA與15種抗體的對比分析，探討ANA與ANAs的關系，明確ANA與ANAs檢測的意義及能否相互代替。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2014年10月1日至2015年1月22日本院門診及住院患者2 513例，其中男849例，年齡1～94歲，平均48.94歲；女1 664例，年齡10個月至89歲，平均45.80歲。

1.2標本采集抽取清晨空腹靜脈血3 mL，靜置30 min后，離心分離血清(3 000 r/min離心10 min)。當日不能及時檢測的標本置于-20 ℃冰箱保存。

1.3檢測方法ANA采用IIF法檢測，試劑盒為歐蒙醫(yī)學實驗診斷有限公司生產(chǎn)，每次試驗均設陰、陽對照，操作嚴格按照試劑盒提供的說明書進行，熒光顯微鏡觀察結果，細胞或組織內(nèi)出現(xiàn)特異性熒光判為陽性。測定3個滴度，1∶100、1∶320、1∶1 000;抗體滴度大于等于1∶100為陽性。ANAs采用IBT法檢測，試劑盒為歐蒙醫(yī)學實驗診斷股份公司生產(chǎn)，可檢測抗-nRNP、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白和AMA M2等15種不同抗原IgG類抗體。嚴格按照試劑盒說明書進行操作及判定結果。

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1ANA陽性標本的核型分析2 513份血樣中ANA 陽性共471例，陽性率為18.74%(471/2 513)。熒光模式顆粒型占34.18%(161/471)，均質型占23.35%(110/471)，胞質型占20.38%(96/471)，核仁型占7.86%(37/471)，著絲點型5.94%(28/471)，其他核型占8.28%(39/471)，具有兩種或兩種以上核型的占6.16%(29/471)。見表1。

表1　　471例ANA陽性標本中不同熒光核型的比例

2.2不同熒光滴度ANA標本中ANAs的陽性率比較471例ANA陽性，滴度為1∶100者占41.61%(196/471)，其中ANAs陽性53例，占27.04%；滴度為1∶320者占26.11%(123/471)，其中ANAs陽性67例，占54.47%；滴度為1∶1 000者占32.27%(152/471)，其中ANAs陽性132例，占86.84%(132/152)。高滴度ANA患者血清中ANAs的陽性率高于低滴度，且差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=123.132,P<0.05)。

2.32 513例標本中ANAs陽性結果分析2 513份血樣ANAs 檢測陽性297例，陽性率為11.82%(297/2 513)。2 042例ANA陰性標本中45例ANAs檢測陽性，陽性率為2.20%，其中44例為單項陽性，1例為2項陽性。

3討論

ANA是CTD 重要的血清學標志，IIF是檢測ANA的金標準[5],是篩查自身抗體的主要方法[6-7]，是目前應用最廣泛的自身抗體篩查試驗。本組資料IIF法檢測的 2 513 份血樣中ANA陽性471例，陽性率為18.74%(471/2 513)，低于郭大文等[6]報道的52.00%，但高于高仕萍等[4]報道的6.25%，可能與受檢查人群、地區(qū)、醫(yī)生對風濕病的認知度有關。ANA 熒光模式本組以顆粒型占34.18%(161/471)，均質型占23.35%(110/471)，胞質型占20.38%(96/471)，這3型占77.91%，與郭大文等[6]和陳燚瓊等[8]報道存在一定的差異，郭大文等[6]報道顆粒型占43.48%，陳燚瓊等[8]報道顆粒型占62.94%，ANA 熒光模式的差異可能與ANA成分復雜、檢查對象差異、人為分型誤差等因素有關。本研究471例陽性中ANA滴度與ANAs的陽性率有一定的關系，本組ANAs/ANA 的比值隨ANA 滴度的升高而增大，與郭大文等[6]報道的“ANAs 的陽性率隨ANA 滴度增大而升高”一致。

本組資料顯示ANA陽性率高于ANAs,與相關報道一致[2-4,8]。ANA陰性標本中ANAs 檢測陽性率為2.20%，低于胡朝軍等[3]報道的10.17%,高于郭大文等[6]報道的0.50%。高仕萍等[4]報道2 207份血樣中ANAs陽性、ANA陰性者僅3例。賴永才等[9]報道132例抗ENA抗體陽性病例ANA的陽性率為93.90%，有6.10%的ANA陰性患者抗ENA抗體陽性。從文獻上看各家報道結果差異較大，分析原因可能與選取病例的數(shù)量和診斷的可靠程度、醫(yī)院的?？铺厣⑨t(yī)生和檢驗人員的技術水平、使用儀器試劑的廠家等的差異有關。由于ANA檢測的IIF方法是手工實驗，檢測過程中影響因素較多，檢測結果最顯著的問題是重復性差[10]，這可能也是各實驗室報道差異較大的原因，因此，人員教育、素質提高和質量控制是保障質量工作的核心[11-12]。

筆者認為ANA與ANAs的檢測各家報道結果差異較大，目前尚缺乏多中心大樣本的研究，沒有形成“專家共識”，期望今后有“專家共識”或其他相關規(guī)范性文件或操作出臺。根據(jù)作者對2 513份血樣的對比分析認為：由于ANA與ANAs敏感性、特異性有差異,如果ANA陰性標本不做ANAs會導致部分患者漏診,兩者聯(lián)合檢測在CTD 診斷中具有一定互補性，可減少漏診或誤診。

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Comparative analysis of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum for 2 513 samples

PuZeyan,XuGuoqiang,LiXiangkun,LiFeng,HuangXuemei

(DepartmentofClinicalLaboratory,SuiningCentralHospital,Suining,Sichuan629000，China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the results of combined detection of the 15 indexes of antinuclear antibodies (ANA) and antinuclear antibody spectrum (ANAs) in our laboratory and to investigate the correlation between them.MethodsThe ANA fluorescence pattern and the ANA titer were detected by the indirect immunofluorescence(IIF) and the ANAs was detected by immunoblotting(IBT).The results of the ANA and ANAs were analyzed.ResultsAmong the 471 samples of ANA positive,161 cases were speckled pattern,110 cases were homogeneous pattern,96 cases were cytoplasmic pattern,37 cases were nucleolar pattern,28 cases were centromere pattern,and 39 cases were the other pattern.The positive rate of ANA titer of 1∶100 was 41.61%(196/471) and positive rate of ANAs was 27.04%(53/196).The positive rate of ANA titer of 1∶320 was 26.11%(123/471) and positive rate of ANAs was 54.47%(67/123).The positive rate of ANA titer of 1∶1 000 was 32.27%(152/471) and positive rate of ANAs was 86.84%(132/152).45 cases were detected with the ANAs positive of in 2 042 ANA negative samples,the positive rate were 2.2%(45/2 042).The positive rate of ANAs in high ANA titer samples was higher than that in low ANA titer samples(χ2=123.132,P<0.05).ConclusionThe ANA titer and ANAs has certain relationship.If ANA is regarded as positive to test ANAs,a small proportion of patients will miss detection.Thus,the combination detection of IIF and IBT is suggested to avoid the misdiagnosis of rheumatic.

Key words:antinuclear antibody;antinuclear antibodies spectrum;indirect immunofluorescence;immunoblotting

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.018

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)10-1346-02

(收稿日期：2015-11-15)

作者簡介：劉藝，男，檢驗技師，主要從事臨床檢驗方向的研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail：zxm18@sohu.com。