美國貝克曼庫爾特IMMAGE800特種蛋白儀性能評價

楊娟娟

(臨汾市人民醫(yī)院檢驗科，山西臨汾 041000)

·臨床研究·

美國貝克曼庫爾特IMMAGE800特種蛋白儀性能評價

楊娟娟

(臨汾市人民醫(yī)院檢驗科，山西臨汾 041000)

摘要:目的通過評價美國貝克曼庫爾特IMMAGE800特種蛋白儀的性能，提高實驗室的檢測能力和效率，為醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可提供可靠試驗數(shù)據(jù)。方法參照CLSI對IMMAGE800特種蛋白儀的精密度、準(zhǔn)確度、線性試驗、攜帶污染率及參考范圍進(jìn)行檢測。結(jié)果IMMAGE800特種蛋白儀8個項目的批內(nèi)精密度變異系數(shù)、總不精密度變異系數(shù)小于評判標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)確度驗證小于廠家聲明，抗鏈O(ASO)、類風(fēng)濕因子(RF)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、IgA、IgG、IgM呈線性而C3、C4呈非線性。各測定項目的攜帶污染率均小于0.05%，屬于可接受范圍，參考范圍驗證通過。結(jié)論IMMAGE800特種蛋白儀具有良好的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、攜帶污染率小，參考范圍符合本實驗室，完全可以滿足臨床實驗室要求。

關(guān)鍵詞:精密度；準(zhǔn)確性；線性試驗；攜帶污染率；參考范圍

IMMAGE800特種蛋白儀是一款自動化程度高、操作簡便且故障率較低的儀器，通過速率散射比濁法進(jìn)行測量,根據(jù)醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)，需進(jìn)行IMMAGE800的檢測系統(tǒng)進(jìn)行性能評價。檢測系統(tǒng)性能評價是醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可的重要內(nèi)容，檢測系統(tǒng)未經(jīng)評價和驗證直接應(yīng)用有可能會降低其性能的可靠性和有效性[1]。儀器的分析性能達(dá)到臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)后才可用于患者的檢測[2]。

1資料與方法

1.1儀器美國貝克曼庫爾特IMMAGE800特種蛋白儀。

1.2試劑IMMAGE800特種蛋白儀所用試劑為配套試劑，試劑批號為：抗鏈O(ASO)，M408008；類風(fēng)濕因子(RF)，M501021；C反應(yīng)蛋白(CRP)，M410280；IgA，M409246；IgG，M408071；IgM， M404011；C3，M309352；C4，M409210；血清學(xué)質(zhì)控品批號為M407012；蛋白質(zhì)控品批號為M407012；定標(biāo)液CAL1批號為M312002，定標(biāo)液CAL5 批號為M402019。

1.3標(biāo)本標(biāo)本為本院門診和住院患者的新鮮靜脈血清(無抗凝劑負(fù)壓管3～5 mL)，離心3 000 r/min離心5 min，標(biāo)本無溶血、黃疸和脂血，含相應(yīng)檢測項目高、中、低3個水平。BECKMAN原裝質(zhì)控及定標(biāo)液。對儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)保養(yǎng)，每日室內(nèi)質(zhì)控均在控。

1.4方法

1.4.1精密度驗證取新鮮患者血清包含高、中、低值的混合血清，每天重復(fù)測定4次，連續(xù)測定5 d，計算均值(M)、批內(nèi)和批間總不精密度[3]。按照衛(wèi)生部臨床檢驗中心全國室間質(zhì)量評價計劃特種蛋白項目25%的可接受范圍，結(jié)合實驗室的自身情況，以批內(nèi)和批間均小于1/4總可允許范圍為判斷標(biāo)準(zhǔn)，評價IMMAGE800特種蛋白儀8個項目的精密度[4-5]。

1.4.2準(zhǔn)確性驗證按照CLSI EP15-A2文件要求，使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確性驗證[6]。每天重復(fù)測定2次，連續(xù)測定5 d。根據(jù)10次測量值計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差及相對偏差的絕對值。與廠家聲明比較，校準(zhǔn)品測定均值與標(biāo)示值比較，相對偏差小于或等于10%，則認(rèn)為試驗數(shù)據(jù)可以證實準(zhǔn)確度，否則不能夠證實。

1.4.3線性試驗分別取ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4測定接近預(yù)期上限的高值血清各一份，分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例進(jìn)行稀釋，每個稀釋度重復(fù)測定4次，將實測與理論值比較(偏離小于10%)，實測值作為Y值，理論值作為X值，作X-Y坐標(biāo)圖，對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行多項式回歸分析處理，利用擬合的二次多項式系數(shù)b2，和3次多項式模型系數(shù)b2、b3與0比較，P>0.05時，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明線性良好，P<0.05時，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，屬于非線性。

1.4.4攜帶污染率試驗高值標(biāo)本對低值標(biāo)本的污染，取RF為1 180 U/mL的高濃度標(biāo)本，及低濃度標(biāo)本RF為24 U/mL，制備成5份標(biāo)本。按照低高交叉的順序重復(fù)測定3次(H1、L1、H2、L2、H3、L3、H4、L4、H5、L5)，按下面公式計算污染率：Ki=(CiL-C0)/3×CH，標(biāo)本針攜帶污染率為K1到K5的平均值，C0為低值標(biāo)本測定5次的均值，CH為高值標(biāo)本測定5次的均值，CiL為低濃度標(biāo)本序號。以低于0.05%為符合要求。

1.4.5參考范圍驗證參照CLSI C28-A2文件中提供的方法，選擇20例正常健康成人標(biāo)本，在保證儀器運行良好的情況下隨機測量ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4[7]，對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計算r值(落在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本數(shù)/總的試驗標(biāo)本數(shù))，要求r>0.9，若r<0.9，重新選擇20例參考人體，計算r值，r>0.9則可以接受，若r<0.9重新檢查操作系統(tǒng)，如果操作沒有問題，則認(rèn)為該參考區(qū)間不適合于本實驗室，需要重新建立參考區(qū)間。

2結(jié)果

2.1精密度驗證ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4批內(nèi)精密度與總不精密度均小于1/4總可允許范圍，按照衛(wèi)生部臨床檢驗中心全國室間質(zhì)量評價計劃特種蛋白項目25%的可接受范圍(即實驗室的判斷標(biāo)準(zhǔn)為1/4×25%=6.25%)，8個項目均符合要求。見表1。

表1　　不同標(biāo)本精密度驗證結(jié)果

2.2準(zhǔn)確性驗證校準(zhǔn)品CAL1測定的IgM、IgA、IgG、C3、C4的相對偏差分別為1.03%、1.14%、1.89%、1.50%、1.03%，小于廠家聲明(小于10%)，校準(zhǔn)品CAL5測定ASO、RF、CRP的相對偏差分別為1.58%、1.00%、2.87%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于廠家聲明。所以準(zhǔn)確度通過驗證。見表2。

2.3線性范圍驗證患者高值血清ASO 為5 420 U/mL，進(jìn)行100%、80%、60%、40%、20%稀釋，重復(fù)測定四次，測定值(Y)與計算值(X)作圖，計算r2值為0.9 943，b2為-0.198，三次多項式模型系數(shù)b2、b3分別為0.034、-0.018，與0比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；方法同上，患者高值血清RF為3 312 U/mL ，r2值為0.9 938；患者高值血清CRP為204 mg/L，r2值為0.991 2；IgA高值29.40 g/L，r2值為0.990 9；IgG高值為68.7 g/L，r2值為0.991 8 ；IgM高值為6.77 g/Lr2值為0.979；二次多項式系數(shù)b2，三次多項式模型系數(shù)b2，b3與0比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；判斷以上項目檢測系統(tǒng)均呈線性。C3高值為2.54 g/L，r2值為0.930 9；C4高值為0.87 g/L，r2值為0.879；C3、C4項目r2<0.95，呈非線性。見表3。

表2　　各標(biāo)本準(zhǔn)確度驗證結(jié)果

表3　　各標(biāo)本線性范圍驗證結(jié)果

2.4攜帶污染驗證取高濃度標(biāo)本及低濃度標(biāo)本進(jìn)行測定，計算高濃度標(biāo)本對低濃度標(biāo)本的污染率。高濃度標(biāo)本濃度為1 180 U/mL，低濃度標(biāo)本的濃度為24 U/mL，按照低高交叉的順序進(jìn)行測定，計算攜帶污染率。高值測定的平均值為1 208 U/mL，低值測定的平均值為24 U/mL。按照公式計算污染率：Ki=(CiL-C0)/3×CH。加樣針的攜帶污染率為0.025%，小于0.05%為符合要求。

2.5參考范圍驗證隨機抽取健康成人20例，進(jìn)行ASO、RF、CRP、IgA、IgG、IgM、C3、C4測定，測定結(jié)果與成人參考范圍進(jìn)行對比，計算R值(R值為落在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本數(shù)/總的試驗標(biāo)本數(shù))ASO、RF、CRP、IgA、IgG、IgM測定的20組數(shù)據(jù)均落在參考值范圍內(nèi)R值均為1.0；而C3有2組數(shù)據(jù)低于參考值范圍，R值為0.9；C4有1組數(shù)據(jù)低于參考值范圍，R值為0.95，所有結(jié)果均符合要求。見表4。

表4　　成人參考范圍結(jié)果驗證

3討論

隨著檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展、項目的不斷增加、儀器及試劑品種繁多，檢驗質(zhì)量的控制變得越來越重要。目前，國內(nèi)外對于醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量管理要求主要是以美國臨床實驗室改進(jìn)法案修正案(CLIA′88)、美國病理學(xué)家協(xié)會(CAP)的實驗室認(rèn)可計劃以及國際標(biāo)準(zhǔn)化組織制定的標(biāo)準(zhǔn)ISO15189醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可為主[8]。醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可管理強調(diào)臨床實驗室必須有計劃地定期對實驗室內(nèi)的檢測系統(tǒng)參數(shù)進(jìn)行驗證[9]。本實驗按照國際標(biāo)準(zhǔn)化組織ISO15189質(zhì)量體系認(rèn)可要求，通過實驗設(shè)計，對已使用8年的IMMAGE800特種蛋白儀進(jìn)行驗證。

檢測系統(tǒng)中最主要、最基礎(chǔ)的分析性是精密度和準(zhǔn)確度。精密度是首先完成的評價，在重復(fù)性良好的情況下完成其他試驗，否則評價缺乏基本保證[10]。CLIS為檢測系統(tǒng)的不同分析性能提供了各種評價驗證方案，EP15主要用于評價與驗證臨床實驗室定量分析方法的精密度和準(zhǔn)確度，方法簡單、方便，適用于日常和單個醫(yī)學(xué)實驗室的驗證評價[11]。參照CLIS EP15-A2文件，對IMMAGE800特種蛋白儀測試的8個項目進(jìn)行精密度性能分析，結(jié)合試驗室自身條件，將評判標(biāo)準(zhǔn)按照衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價特種蛋白項目的可接受范圍1/4標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。試驗結(jié)果，8個項目的批內(nèi)精密度和總不精密度均小于評判標(biāo)準(zhǔn)，精密度符合臨床要求。

準(zhǔn)確度是檢測系統(tǒng)中另一項非常重要的性能評價指標(biāo)，是其他性能評估試驗的基礎(chǔ)。按照CLSI EP15-A2文件要求，使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確性驗證。結(jié)果顯示，IMMAGE800特種蛋白儀上的8個項目的相對偏差遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于廠家聲明，準(zhǔn)確度性能完全符合臨床要求。

按照EP6-A方案，采用多項式回歸方法評價儀器的線性，結(jié)果顯示ASO、RF、CRP、IgG、IgM、IgA 6個項目在給定的范圍內(nèi)呈線性。而C3、C4呈非線性，原因可能為：C3、C4的檢測范圍較小，稀釋增加了基質(zhì)效應(yīng)，故在日常工作中，C3、C4稀釋后的結(jié)果是不可靠的。

在臨床工作中，高值標(biāo)本對低值標(biāo)本的攜帶污染不容小覷，IMMAGE800特種蛋白儀標(biāo)本針攜帶污染率為0.025%，小于0.05%，可滿足臨床需求，不影響加樣順序。

由于種族不同、區(qū)域不同、人群分布不同、人群生活習(xí)慣不同，故應(yīng)建立適合本實驗室的參考值范圍；首先根據(jù)說明書的健康成人參考值范圍進(jìn)行驗證，隨機選擇20位健康成人，驗證參考值范圍；經(jīng)驗證，參考值符合要求。故認(rèn)為可以使用廠家的參考值范圍。

通常一個檢測系統(tǒng)應(yīng)用到臨床之前，實驗室必須對其進(jìn)行性能驗證，最主要的性能指標(biāo)包括精密度、準(zhǔn)確度、檢測線性范圍以及參考范圍是否符合當(dāng)?shù)厝巳篬12]。IMMAGE800雖然不屬于新的檢測系統(tǒng)，但因為使用年限長達(dá)8年，故也需要進(jìn)行性能驗證。根據(jù)驗證結(jié)果，證明該儀器在按時按需進(jìn)行保養(yǎng)情況下，可保持良好的工作狀態(tài)。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.044

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)10-1402-03

(收稿日期：2016-01-27)