三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合應(yīng)用對高脂血癥大鼠血液流變學(xué)的影響

熊友誼(安徽科技學(xué)院　食品藥品學(xué)院，安徽　鳳陽　233100)

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三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合應(yīng)用對高脂血癥大鼠血液流變學(xué)的影響

熊友誼
(安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院，安徽鳳陽233100)

摘要:目的:研究三七總皂苷聯(lián)合氯吡格雷對高血脂癥血液流變學(xué)的作用。方法:大鼠隨機(jī)分為5組:正常對照組、模型組、三七總皂苷組、氯吡格雷組、三七總皂苷組聯(lián)合氯吡格雷組(PNSBGL)。除正常對照組外，其余各組喂飼高脂飼料，每日1次，連續(xù)給8周;自制模之日起，治療組分別給予三七總皂苷、氯吡格雷、三七總皂苷+氯吡格雷治療。8周后采血，測定各組小鼠全血粘度、血小板功能和血脂水平。結(jié)果:與模型組比較，三七總皂苷、PNSBGL治療組血粘度、血小板功能、血脂含量、纖維蛋白原含量、紅細(xì)胞壓積呈現(xiàn)顯著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，氯吡格雷組血粘度、血小板功能、紅細(xì)胞壓積呈現(xiàn)顯著性降低(P＜0.01或P＜0.001) ;與三七總皂苷組比較，PNSBGL治療組血粘度、血小板功能、紅細(xì)胞壓積呈現(xiàn)顯著性降低(P＜0.05或P＜0.01) ;與氯吡格雷組比較，PNSBGL治療組血粘度、血小板功能、血脂含量、纖維蛋白原含量、紅細(xì)胞壓積呈現(xiàn)顯著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。結(jié)論:三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合應(yīng)用對高脂血癥大鼠血液流變學(xué)改變具有協(xié)同改善作用。

關(guān)鍵詞:三七總皂苷;氯吡格雷;高脂血癥;血液流變學(xué)

高血脂引起的以高血粘稠度、血液流速減緩和血小板高聚集為特征的血液流變學(xué)改變是構(gòu)成高血壓、冠心病、糖尿病患者晚期心腦血管事件發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。而改善血管壁功能、抑制血小板聚集和黏附、降低血液粘稠度的藥物，以增加血液流速，防止血栓形成是預(yù)防心腦血管事件發(fā)生的重要措施［1］。三七總皂苷為三七根系的主要用藥用部分，亦是復(fù)方丹參滴丸的活性組成成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明三七總皂苷具有抑制血小板聚集，降低血脂和降低血粘度的作用，因療效確切而成為我國防治心腦血管事件發(fā)生的首選藥物之一［2］。氯吡格雷為抗血小板藥物，因其抗血小板作用強(qiáng)以及不引起嚴(yán)重的肝腎毒性和胃腸道反應(yīng)，被廣泛應(yīng)用于防治因血小板高聚集引起的心腦血管事件臨床治療中［3］。為此，本研究將三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合應(yīng)用于高脂血癥引起的血液流變學(xué)改變的治療中，觀察兩藥聯(lián)合應(yīng)用是否能夠增強(qiáng)對高血脂、高血液粘稠度、血小板高聚集的改善作用，為臨床心腦血管疾病的防治提供新的治療方案和參考依據(jù)。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物與材料

8周齡SPF級SD大鼠32只，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，由蚌埠醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供(許可證號: SYXK(皖2012－002) ; DL－5低速離心機(jī)，鄭州長城科工貿(mào)易有限公司; LBY－N6B型血液黏度儀，北京普利生儀器有限公司;扭力天平:型號JN－A，上海第二天平儀器廠;體外血栓形成和血小板粘附兩用儀:型號XSN－R1，無錫縣電子儀器二廠生產(chǎn);三七總皂苷，批號080628，廣西梧州制藥(集團(tuán))股份有限公司;膽固醇，批號: 010624，天津博迪化工股份有限公司;膽鹽，批號: 200904，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;甲硫咪唑，批號: 20110709，天津市博迪化工有限公司;低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)測定試劑盒，批號: 110451，南京建成科技有限公司;高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)測定試劑盒，批號: 110441，南京建成科技有限公司;甘油三酯(TG)測定試劑盒批號: 115351，南京建成科技有限公司;總膽固醇(TC)測定試劑盒，批號: 111361，南京建成科技有限公司;大鼠血漿纖維蛋白原試劑盒，批號: 201211，廈門慧嘉生物科技有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹苽浼敖o藥

32只SD大鼠經(jīng)普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為五組，即正常對照組、模型組、三七總皂苷組、氯吡格雷、三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合給藥組(PNSBGL)。取200 g豬油加熱融化，加入100 g膽固醇，加熱融化后再加入1.0 g甲硫咪唑和20 g膽酸鈉，不斷攪拌。隨后加入200 mL吐溫80、200 mL丙二醇及60 mL蒸餾水，充分?jǐn)噭?，并完全溶解。冷卻后加蒸餾水至1000 mL，充分混勻后冰箱保存，使用前40℃水浴融化。除正常組外，其余各組按體積10 mL/kg灌胃上述脂肪乳，每日1次，連續(xù)給8周;正常對照組灌胃10 mL/kg的上述溶媒(含20%吐溫80、20%丙二醇的水溶液)。自制模之日起，三七總皂苷組灌胃三七總皂苷100 mg/kg，每日1次;聯(lián)合給藥處理組每日灌胃100 mg/kg和氯吡格雷30 mg/kg的生理鹽水懸液;正常對照組及模型組灌胃同等體積的生理鹽水。各組給予普通飼料喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)期間自由采食飲水。

1.3血液流變學(xué)的測定

動物于最后一次造模及給藥后禁食12h，3%戊巴比妥鈉1 mL/kg麻醉，腹主動脈取血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝，取其0.8 mL全血采用LBY－N6B型血液黏度儀測定低切變率下全血粘度(ηL)、高切變率下全血粘度(ηH)及全血還原粘度(RV)。

1.4血小板功能的測定

腹主動脈取血，迅速注入長25 cm、直徑2 mm的硅膠管中，約占硅膠管長度的1/2。將硅膠管置于體外血栓形成和血小板粘附兩用儀中，勻速旋轉(zhuǎn)15 min，將形成的血栓用濾紙吸干表面液體，測量長度;用扭力天平測量血栓濕重;然后在烘干機(jī)中37℃加熱20 min后取出，測量血栓干重。血小板粘附率測定采用玻球法，即用微量注射器取腹主動脈取血1 mL，迅速加入109 mmol/L的枸櫞酸鈉抗凝液0.2 mL，混勻后置球形瓶內(nèi)，置于體外血小板粘附儀，離心15 min，按常規(guī)方法分別測定粘附前后血小板計(jì)數(shù)。

1.5纖維蛋白原和紅細(xì)胞壓積的測定

取腹主動脈血0.8 mL于抗凝離心管中，10000 rpm/min離心5 min，吸取上層血漿根據(jù)試劑盒的要求測定纖維蛋白原含量。取腹主動脈血0.8 ml于抗凝離心管中，15000 r/min離心5 min，以微量毛細(xì)管法測定紅細(xì)胞壓積。

1.6血脂的測定

取1 mL腹主動脈血，離心后血清中的TC、TG、HDL－C、LDL－C根據(jù)試劑盒的要求，采用全自動生化分析儀測定。

1.7統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)采用SPSS 16.0軟件單因素方差分析及Bonferroni均數(shù)兩兩比較法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2　結(jié)果與分析

2.1三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠全血粘度的影響

與正常對照組比較，模型組的ηL、ηH、RV顯著性增加(P＜0.05) ;與模型組比較，氯吡格雷組、三七總皂苷組、PNSBGL組ηL、ηH、RV顯著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，而PNSBGL組較三七總皂苷、氯吡格雷組降低更為顯著(P＜0.05或P＜0.01)，見表1。

表1　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠全血粘度的影響Table 1 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood viscosity in hyperlipemia model rats

表1　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠全血粘度的影響Table 1 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood viscosity in hyperlipemia model rats

注:模型組與正常對照組比較，#P＜0.001;給藥組*與模型組比較P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;三七總皂苷、氯吡格雷組與PNSBGL組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別　　ηH　　ηL RV mPa/s正常對照組3.80±0.29　9.00±0.35　5.75±0.63模型組　5.78±0.50#　11.94±0.49#　9.70±0.50#三七總皂苷　5.29±0.36＊＊△　11.48±0.47＊＊△　8.90±0.49＊＊△氯吡格雷　5.41±0.34＊△△　11.50±0.37＊△△　9.08±0.45＊△△PNSBGL　4.91±0.31＊＊＊　10.29±0.39＊＊＊　7.58±0.47＊＊＊

2.2三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠血小板功能的影響

與正常對照組比較，模型組的血小板長度、濕重、干重、粘附率顯著性增加(P＜0.001) ;與模型組比較，氯吡格雷組、三七總皂苷組、PNSBGL組血小板長度、濕重、干重、粘附率顯著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，而PNSBGL組較三七總皂苷、氯吡格雷組降低為顯著(P＜0.05或P＜0.01)，見表2。

表2　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠血栓形成和血小板粘附率的影響Table 2 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the platelet function in hyperlipemia model rats

表2　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠血栓形成和血小板粘附率的影響Table 2 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the platelet function in hyperlipemia model rats

注:模型組與正常對照組比較，#P＜0.001;給藥組與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;三七總皂苷、氯吡

組別　　血小板粘附率(%)　　血小板長度(cm)　　血小板濕重(g)　　血小板干重(g)正常對照組24.0±4.6　7.73±0.35　0.25±0.02　0.10±0.01模型組　36.9±6.9#　9.60±0.38#　0.48±0.03#　0.25±0.03#三七總皂苷　32.7±5.6＊△△　8.48±0.45＊△△　0.43±0.05＊△△　0.21±0.02＊△△氯吡格雷　31.6±3.5＊＊△　8.05±0.44＊＊△　0.33±0.03＊＊＊　0.17±0.03＊＊＊PNSBGL　28.8±3.0＊＊＊　7.71±0.37＊＊＊　0.30±0.04＊＊＊　0.15±0.02＊＊＊

格雷組與PNSBGL組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

2.3三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠纖維蛋白原和紅細(xì)胞壓積的影響

與正常對照組比較，模型組的纖維蛋白原含量、紅細(xì)胞壓積顯著性增加(P＜0.001) ;與模型組比較，三七總皂苷、PNSBGL組纖維蛋白原含量顯著性降低(P＜0.001)，氯吡格雷組無顯著性改變(P＞0.05) ;與模型組比較，氯吡格雷組、三七總皂苷組和PNSBGL組紅細(xì)胞壓積顯著性降低(P＜0.05或P＜0.001)，而PNSBGL組較氯吡格雷組降低則更為顯著(P＜0.01)，見表3。

表3　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠纖維蛋白原和紅細(xì)胞壓積的影響(x±s)Table 3 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on fibrinogen and erythrocyte pressure product in hyperlipemia model rats

表3　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠纖維蛋白原和紅細(xì)胞壓積的影響(x±s)Table 3 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on fibrinogen and erythrocyte pressure product in hyperlipemia model rats

注:模型組與正常對照組比較，#P＜0.001;給藥組與模型組比較，*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;三七總皂苷、氯吡格雷組與PNSBGL組比較，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。

組別　　纖維蛋白原(g/L)　　紅細(xì)胞壓積(%)正常對照組1.53±0.21　34.8±3.2模型組　2.40±0.22#　47.6±3.4#三七總皂苷　1.84±0.16＊＊＊　38.1±2.2＊＊＊氯吡格雷　2.36±0.18△△△　44.0±3.1＊△△PNSBGL　1.83±0.15＊＊＊　37.6±4.7＊＊＊

2.4三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠血脂的影響

與正常對照組比較，模型組的TC、TG、LDL顯著性增加(P＜0.001) ;與模型組比較，三七總皂苷、PNSBGL組TC、TG、LDL顯著性降低，HDL顯著性增(P＜0.01) ;與模型組比較，氯吡格雷組TC、TG、LDL、HDL差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) ;與三七總皂苷組比較，PNSBGL組TC、TG、LDL、HDL差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表4。

表4　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠血脂的影響(Table 4 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood lipid in hyperlipemia model rats

表4　三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)合治療對高脂血癥大鼠血脂的影響(Table 4 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood lipid in hyperlipemia model rats

注:模型組與正常對照組比較，#P＜0.001;給藥組與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;三七總皂苷、氯吡格雷組與PNSBGL組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別TC　TG　HDL　LDL正常對照組111.9±14.7　141.1±13.2　45.5±5.9　37.8±5.4模型組　148±16.3#　235.3±15.7#　47.4±5.3#　54.3±4.9#三七總皂苷　131.1±14.2＊＊　222.8±11.5＊＊　56.0±6.2＊＊　45.5±3.6＊＊氯吡格雷　151.7±11.5△△　231.5±12.4△△　45.2±5.4△△　52.5±4.5△△PNSBGL　130.0±10.6＊＊　220.6±10.3＊＊　54.6±5.9＊＊　43.6±4.0＊＊

3　結(jié)論與討論

血液流變學(xué)改變是高脂血癥的一個主要特征，主要表現(xiàn)為血液粘稠度增高、血液流動減緩和血小板高聚集的血液高凝狀態(tài)。高血脂造成脂質(zhì)大量沉著、堆積在動脈內(nèi)膜上，造成內(nèi)皮損傷、動脈管腔狹窄、血流受阻，而血液過渡粘稠又造成血流緩慢、血流不暢，血細(xì)胞在血小板的作用下可聚集于損傷的內(nèi)皮部位而形成贅生物，最終可能堵塞血管而引起局部組織和器官的缺血壞死，脫落的栓子亦可隨著血流漂移導(dǎo)致異位栓塞。這些原因是導(dǎo)致老年心血管事件發(fā)生的重要病理機(jī)制［4］。因此臨床治療心腦血管疾病通常給予降血脂藥、抗血小板藥用以降低血液粘度和預(yù)防血栓的形成［5］。

高脂血癥是臨床常見病和多發(fā)病?；颊叱巳粘Ｗ⒁饪刂浦镜臄z入外，嚴(yán)重者需要給予降血脂治療。對于高脂血癥合并嚴(yán)重心腦血管疾病的患者，除了常規(guī)給予降血脂治療外，尚需給予抗血小板藥以改善血液的高凝狀態(tài)。臨床常采用的降血脂藥為他汀類，抗血小板藥常采用氯吡格雷或阿司匹林。由于阿司匹林對胃腸粘膜刺激性強(qiáng)，長時(shí)服用可誘發(fā)出血、潰瘍及導(dǎo)致肝腎損傷等副作用，使其應(yīng)用受到一定的限制，而氯吡格雷不會引起嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)和肝腎毒性，安全性及療效較好，因此在防治心腦血管事件方面較阿司匹林應(yīng)用更為廣泛［6］。但氯吡格雷與他汀類藥物的聯(lián)合應(yīng)用會產(chǎn)生相互拮抗作用，從而使臨床治療效果降低。為此，本實(shí)驗(yàn)采用三七總皂苷代替他汀類藥物與氯吡格雷聯(lián)合應(yīng)用，以觀察他們對高脂飲食所致的血液流變學(xué)改變是否具有協(xié)同預(yù)防或改善作用。三七總皂苷是三七的提取物，具有活血祛瘀，通脈活絡(luò)功效，對血脂具有良好的調(diào)節(jié)作用，亦具有明顯抗血小板功能和降纖作用［7］。而氯吡格雷是一種新穎的抗血小板藥，通過阻斷二磷酸腺苷受體而抑制血小板活性，常用于防治動脈粥樣硬化性疾病、心肌梗死、腦卒中及外周血管疾病等疾病，療效確切，與阿司匹林相比副作用更小。本研究結(jié)果顯示兩藥聯(lián)用后，無論是在降低全血粘度還是在抗血小板功能方面作用都得到了增強(qiáng)，而在降血脂方面基本與單獨(dú)使用三七總皂苷持平，可見三七總皂苷與氯吡格雷對高脂血癥引起的血液流變學(xué)改變具有顯著的協(xié)同抑制作用，而氯吡格雷并不影響三七總皂苷對血脂的調(diào)節(jié)作用。研究也顯示氯吡格雷對纖維蛋白原含量未產(chǎn)生明顯的影響而三七總皂苷則能夠顯著下調(diào)纖維蛋白原，可見兩藥在改善血液高凝狀態(tài)方面的作用機(jī)制并不相同或完全相同，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致［8］，亦或是兩藥協(xié)同改善高脂血癥引起的血液流變學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)之一。

綜上所述，三七總皂苷與氯吡格雷聯(lián)用即可產(chǎn)生良好的降脂作用，又可發(fā)揮強(qiáng)大的抗血小板功能和降低血液粘度的作用，提示聯(lián)用可能在預(yù)防心腦血管事件應(yīng)用方面具有不錯的前景和開發(fā)價(jià)值。

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(責(zé)任編輯:馬世堂)

Effect of Clopidogrel Combined with Total Panax Notoginseng Saponins on the Hemorheology in Hyperlipemia Model Rats

XIONG You－yi
(College of Food and Drug，Anhui Science and Technology University，F(xiàn)engyang 233100，China)

Abstract:Objective: To explore the effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins in the treatment of the hemorheology in hyperlipemia.Methods: Rats were assigned randomly to one of the following six experimental groups: normal control，model，total panax notoginseng saponins，clopidogrel，clopidogrel combined with total Panax notoginseng saponins.All rats，except for those in the control group，were administrated with high－fat diet to establish hyperlipemia model，once every day for eight successive weeks.Starting from the date of the molding，all treatment groups of rats were respectively administrated with corresponding drugs: total Panax notoginseng saponins，clopidogrel or clopidogrel combined with total Panax notoginseng saponins.After 8 weeks，rat blood was collected to explore levels of blood viscosity，platelet function，blood lipid，fibrinogen and erythrocyte pressure product.Results: Compared with normal control group，levels of blood viscosity，platelet function，blood lipid，fibrinogen and erythrocyte pressure product showed significant improvement in groups of total Panax notoginseng saponins and PNSBGL，and levels of blood viscosity，platelet function and erythrocyte pressure product showed significant improvement in the group of clopidogrel (P＜0.05，P＜0.01 or P＜0.001).Compared with the group of total Panax notoginseng saponins，levels of blood viscosity，platelet function and erythrocyte pressure product showed significant improvement in the group of PNSBGL (P＜0.05 or P＜0.01).levels of blood viscosity，platelet function，blood lipid，fibrinogen and erythrocyte pressure product showed significant improvement in the group of PNSBGL(P＜0.05，P＜0.01 or P＜0.001).Conclusions: There is an outcomes of the clinical synergy and complementary advantages for the clopidogrel combined with total Panax notoginseng saponins group to treat the hemorheology in hyperlipemia.

Key words:Total Panax notoginseng saponins; Clopidogrel; Hyperlipemia; Hemorheology

中圖分類號:R965.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

文章編號:1673－8772(2016) 02－0027－05

收稿日期:2016－01－10

基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金(81403268) ;安徽科技學(xué)院引進(jìn)(穩(wěn)定)人才專項(xiàng)(ZRC2013355)。

作者簡介:熊友誼(1974－)，男，安徽省合肥市人，博士，講師，主要從事中藥活性物質(zhì)研究。