貓癬的流行病學(xué)調(diào)查與藥敏試驗(yàn)

栗婷婷，李茗瑜，施　堯，牛祺芳，金藝鵬，林德貴（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193）

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貓癬的流行病學(xué)調(diào)查與藥敏試驗(yàn)

栗婷婷，李茗瑜，施堯，牛祺芳，金藝鵬，林德貴
（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193）

李茗瑜（1990-），女，碩士生，從事臨床獸醫(yī)學(xué)研究，E-mail：357092696@qq.com

注：李茗瑜與栗婷婷對(duì)本文具有同等貢獻(xiàn)

貓癬，即貓皮膚真菌病，其致病菌主要為犬小孢子菌、石膏樣小孢子菌及須毛癬菌［1］。其病因是皮膚癬菌過(guò)量粘附、繁殖，侵入動(dòng)物毛發(fā)、表皮、趾爪角質(zhì)蛋白組織中，引起貓皮膚損傷、結(jié)痂、脫毛、脫屑。貓癬是一種高度接觸傳染性人畜共患皮膚病。貓一旦患病，病程長(zhǎng)、難治愈、易復(fù)發(fā)。人感染貓癬有時(shí)可引起大面積皮膚病變，且易繼發(fā)細(xì)菌感染，慢性病程可延續(xù)數(shù)月至數(shù)年［2］。因此，對(duì)貓癬的研究對(duì)獸醫(yī)臨床很重要，具有一定公共衛(wèi)生意義。

1　試驗(yàn)方法

1.1臨床調(diào)查與采樣筆者統(tǒng)計(jì)了2013年5月至2014年5月間，在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院確診為貓癬的病例信息，并對(duì)2014年1月至5月間疑似貓癬病例進(jìn)行毛發(fā)皮屑采樣鏡檢。

1.2皮膚癬菌菌種培養(yǎng)與鑒定用SDA沙氏瓊脂培養(yǎng)基在28℃、90%濕度下培養(yǎng)純化，至少3周仍無(wú)皮膚真菌生長(zhǎng)可報(bào)告培養(yǎng)陰性。

形態(tài)學(xué)鑒定：觀察其在SDA和米飯培養(yǎng)基上菌落形態(tài)并鏡檢。

分子生物學(xué)鑒定：用皮膚癬菌通用引物［3-4］CHS1 1S（5′-CAT CGA GTA CAT GTG CTC GC-3′）及CHS1 1R（5′-CTC GAG GTC AAA AGC ACG CC-3′）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，鑒定皮膚癬菌。再用皮膚癬菌隨機(jī)引物［3-4］FM1（5′-AGCCGCCTCCATGGCCCCAGG-3′）鑒別皮膚癬菌的種屬。對(duì)照采用犬小孢子菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-36299、須毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-28185。

1.3藥敏試驗(yàn)采用沙氏液體培養(yǎng)基制備孢子懸液至1～5氏液體1×106CFU/mL，特比萘芬和伊曲康唑藥液倍比稀釋10個(gè)梯度（工作濃度為0.50～0.001 μg/mL），根據(jù)M38-A2中微量稀釋法進(jìn)行試驗(yàn)并判定結(jié)果［5］。

2　試驗(yàn)結(jié)果

2.1流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

2.1.1季節(jié)調(diào)查的140個(gè)病例中，春季（3～5月份）發(fā)病率為22.86%，夏季（6～8月份）發(fā)病率為32.86%，秋季（9～11月份）發(fā)病率為23.57%、冬季（12月份～次年2月份）發(fā)病率為20.71%。3月份和8月份為貓癬高發(fā)月份，平均為11.43%。

2.1.2品種100個(gè)病例中，純種貓占86%，其中美國(guó)短毛貓23%，異國(guó)短毛貓18%、折耳貓14%、波斯貓10%及英國(guó)短毛貓9%。見(jiàn)圖1。

圖1　貓癬患貓品種分布情況

圖2　貓癬患貓發(fā)病部位分布情況

2.1.3年齡146例中，2歲以下患貓占76.03%，其中1歲以內(nèi)占53.42%，兩歲以上的患貓僅占23.97%。

2.1.4性別143例中，雄性發(fā)病率為60.84%，雌性29.37%，絕育（1.40%）或去勢(shì)后（8.39%）的貓發(fā)病率較低。發(fā)病率雌雄總數(shù)之比為1∶2.25。

2.1.5發(fā)病部位130例中，各部位發(fā)病頻率為頭部57.69%，其中耳周（20.77%）最多。背部31.54%、尾部17.69%，頸部14.62%。

2.1.6臨床癥狀76例中，脫毛的出現(xiàn)頻率為84.21%，結(jié)痂為40.79%，皮屑32.89%，瘙癢22.37%，皮膚發(fā)紅17.11%，色素沉著10.53%。

2.1.7皮膚癬菌毛發(fā)內(nèi)外分布情況記有皮膚癬菌毛發(fā)分布情況的共38例，出現(xiàn)毛發(fā)內(nèi)侵襲情況占65.79%，單純毛發(fā)外感染占34.21%。

2.2培養(yǎng)與菌種鑒定結(jié)果采集的65個(gè)樣本培養(yǎng)顯示，有47株疑似皮膚癬菌。其中38株菌培養(yǎng)產(chǎn)生犬小孢子菌特異性大分生孢子。通過(guò)分子學(xué)鑒定，確認(rèn)這38株均為皮膚癬菌且均為犬小孢子菌（100%），其余9株為非皮膚癬菌。證實(shí)貓癬的主要病原真菌仍為犬小孢子菌，與前人研究一致［6］。

圖3　皮膚癬菌通用引物PCR擴(kuò)增M：Marker；犬?。喝℃咦泳鷺?biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-36299；須毛：須毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-28185；陰：陰性對(duì)照；23-33、34-38、39-42分別來(lái)自臨床樣本

圖4　皮膚癬菌隨機(jī)引物PCR擴(kuò)增M：Marker；犬?。喝℃咦泳鷺?biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-36299；須毛：須毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-28185；陰：陰性對(duì)照；23-31、32-38分別來(lái)自臨床樣本

2.3藥敏試驗(yàn)結(jié)果隨機(jī)選取30株貓?jiān)慈℃咦泳R床株進(jìn)行了體外藥敏試驗(yàn)。對(duì)特比萘芬60%的菌株敏感性較好，23.3%中等，16.7%較差。對(duì)于伊曲康唑，73%的菌株敏感性較好，27%中等，10%較差。

對(duì)比同一菌株對(duì)兩種藥物的敏感性可見(jiàn)，60%的菌株對(duì)二者的敏感性差異不大，30%的菌株對(duì)伊曲康唑敏感性更好，只有10%的菌株對(duì)特比萘芬更敏感。

3　討論

貓癬發(fā)病具有明顯季節(jié)性。其規(guī)律可能由四季氣候、真菌感染繁殖特點(diǎn)及動(dòng)物皮膚抵抗力三重因素決定。北京夏季溫濕度條件適宜，真菌繁殖活性與感染力增強(qiáng)，冬季寒冷干燥則會(huì)影響真菌生長(zhǎng)。在初春回暖，致病真菌的繁殖活性及感染力可能有較大的提高，因此會(huì)在3月份出現(xiàn)一個(gè)發(fā)病高峰。

貓癬的發(fā)病率在品種間差異明顯，可能由于不同品種貓的皮毛結(jié)構(gòu)、表皮微環(huán)境和皮脂分泌量有很大不同。純種貓發(fā)病率高于混血貓，可能由于純種貓皮脂分泌不足，因而更易受到侵害。未絕育的雄性貓發(fā)病率最高，雌性次之，絕育或去勢(shì)后的貓發(fā)病率明顯降低。這可能是激素分泌的差異導(dǎo)致，同樣也與飼養(yǎng)總數(shù)有關(guān)。

貓癬的發(fā)病具有一定年齡規(guī)律。據(jù)統(tǒng)計(jì)，年幼尤其是小于1歲的犬貓發(fā)病率明顯較高［7-8］，這與本次調(diào)查結(jié)果一致?？赡茉蛴?：其1是幼貓皮脂腺發(fā)育尚不完全，皮脂分泌量少，抑制真菌的功能不強(qiáng)。皮脂能抑制真菌可能是由于其中的不飽和脂肪酸可維持細(xì)胞膜完整性，必需脂肪酸參與細(xì)胞膜中磷脂的合成，缺乏則上皮細(xì)胞及纖維母細(xì)胞出現(xiàn)成熟障礙，其細(xì)胞膜脂質(zhì)的脂肪酸結(jié)構(gòu)改變，通透性增加使真菌更易侵入引發(fā)皮膚?。?］。皮脂抑菌作用還可能由于皮脂中的不飽和脂肪酸可維持表皮屏障功能。正常時(shí)由于必需脂肪酸的屏障，皮膚對(duì)水分和其他多種物質(zhì)是不通過(guò)的。這種屏障完整的功能取決于脂質(zhì)封閉層。若犬貓缺乏皮脂，脂質(zhì)層會(huì)形成漏洞，導(dǎo)致表皮屏障功能缺陷，皮膚干燥、瘙癢［9］。原因之2是其免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完善，更易受致病真菌感染。原因之3可能是缺少某種存在于血清內(nèi)屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白的抑制因子，其有助于減少皮膚癬菌侵入深層組織。這種因子的產(chǎn)生與動(dòng)物的年齡直接相關(guān)，幼貓平均10～13個(gè)月齡之后才能真正自身合成該物質(zhì)［1］。

貓癬多發(fā)于面部尤其是耳部。正常貓?bào)w表各部位分泌的脂肪酸量從高到低依次為足墊、四肢、軀干，頭部最少，所以幼貓?zhí)貏e易患犬小孢子菌性頭癬［1］。本調(diào)查中脫毛是貓癬最常出現(xiàn)的臨床癥狀，因?yàn)槠つw癬菌能分泌角蛋白酶導(dǎo)致斷毛。瘙癢癥狀的比例僅為22.37%。皮膚癬菌的存在與否與瘙癢癥狀無(wú)關(guān)［7］。此外，皮膚癬菌分布于毛發(fā)內(nèi)的概率較大，也是與其侵入毛髓的致病機(jī)制相關(guān)。臨床上單獨(dú)外用抗真菌藥常常療效不佳，可能是因?yàn)槠つw癬菌分布在毛發(fā)內(nèi)，外用藥無(wú)法根除，應(yīng)配合口服抗真菌藥治療。

試驗(yàn)中，有兩例樣本鏡檢陰性但培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性可能是取樣量太少或主觀漏檢所致，因此建議將鏡檢與培養(yǎng)相結(jié)合。由于菌落形態(tài)受多種因素影響且變化極大，因此只能用來(lái)初步篩選疑似菌株。相比之下，分子生物學(xué)鑒定方法特異性敏感性高、結(jié)果穩(wěn)定可靠。因此，最佳方案是將形態(tài)學(xué)鑒定與分子生物學(xué)鑒定相結(jié)合。

數(shù)據(jù)顯示，多數(shù)菌株對(duì)特比萘芬和伊曲康唑已經(jīng)有一定的耐藥性，這可能是貓癬治愈困難的原因之一。其中伊曲康唑比特比萘芬抑菌效果稍好，這可能與目前臨床用藥相關(guān)，以特比萘芬為主要成分的抗真菌藥物相對(duì)較多，可導(dǎo)致皮膚癬菌對(duì)其耐藥性增高。體外藥敏試驗(yàn)的結(jié)果對(duì)臨床用藥有一定指導(dǎo)意義。但動(dòng)物皮膚本身微環(huán)境復(fù)雜，應(yīng)綜合各項(xiàng)分析以改進(jìn)貓癬的綜合治療方案。

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中圖分類號(hào)：S858.293

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：0529- 6005（2016）03- 0091- 02

收稿日期：2014-11-26

作者簡(jiǎn)介：栗婷婷（1991-），女，碩士生，從事臨床獸醫(yī)學(xué)研究，E-mail：ltt49new@163.com

通訊作者：林德貴，E-mail：csama@sina.com