某種豬場偽狂犬病血清流行率的橫斷面研究

楊 濤（廈門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建廈門 361009）

?

某種豬場偽狂犬病血清流行率的橫斷面研究

楊 濤
（廈門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建廈門 361009）

摘 要：[目的] 制定科學(xué)的豬偽狂犬病凈化策略，估計(jì)豬場偽狂犬病的流行率和群間分布情況。[方法] 通過科學(xué)合理抽樣，采用針對(duì)性的檢測方法，使用豬偽狂犬病病毒gE-ELISA試劑盒，對(duì)采自廈門市一種豬場不同豬群的1561份樣品進(jìn)行了血清學(xué)檢測。[結(jié)果]該豬場偽狂犬病血清學(xué)真實(shí)流行率為90.8%（95% CI：87.9% ～ 93.7%）；不同豬群中，種公豬的gE抗體陽性率最低，其次為育肥豬，哺乳仔豬的gE抗體陽性率最高；不同品種間，黑豬的gE抗體陽性率最高，其次為大白和長白，杜洛克的gE抗體陽性率最低。[結(jié)論]該種豬場可能感染了新的偽狂犬病毒，導(dǎo)致血清學(xué)流行率較高；在今后類似的偽狂犬病血清學(xué)流行率研究中，可以考慮把哺乳仔豬排除在研究群外；如無法在短期內(nèi)淘汰所有PRV gE抗體陽性種豬，建議首先要淘汰陽性種公豬，其次要探索合理的免疫程序，定期加強(qiáng)監(jiān)測。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬??；血清學(xué)；流行率

偽狂犬?。≒seudorabies，PR）又稱奧耶斯基氏?。ˋujeszky’s disease），是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的一種急性、發(fā)熱性傳染病，可感染各生長階段的豬群，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大。除澳大利亞外，該病在世界各地有養(yǎng)豬業(yè)的國家都曾發(fā)生。目前許多國家普遍使用gE基因缺失疫苗來控制該病，美國和一些歐盟國家還實(shí)現(xiàn)了凈化和根除[1-2]。我國于上世紀(jì)70年代從匈牙利引進(jìn)了PRV Bartha K61株。隨著gE基因缺失苗的普遍應(yīng)用，該病得到了有效控制?！秶抑虚L期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020）》將豬偽狂犬病列為優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病之一，并將其作為重點(diǎn)凈化的種畜禽疫病，要求到2020年全國所有種豬場都要達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心于2014年啟動(dòng)了規(guī)模化養(yǎng)殖場偽狂犬病凈化示范場和凈化創(chuàng)建場評(píng)估工作。為切實(shí)做好這項(xiàng)工作，參照國內(nèi)外動(dòng)物疫病凈化經(jīng)驗(yàn)，在廈門市某種豬場開展了豬偽狂犬病凈化工作。

該種豬場是一家存欄上萬頭的大型規(guī)模場，場區(qū)環(huán)境優(yōu)美，生產(chǎn)管理規(guī)范，防疫和生物安全工作開展較好，長期使用PRV gE基因缺失苗預(yù)防豬偽狂犬病。在2012年之前的垂直傳播性疫病監(jiān)測和日常監(jiān)測中，從未檢測到偽狂犬病野毒感染抗體，但從2013年開始，陸續(xù)檢測到了PRV gE抗體。為了掌握該種豬場偽狂犬病的感染狀況，估計(jì)其流行率和群間分布，2015年6月初至9月中旬，在該豬場開展了血清流行病學(xué)調(diào)查，為下一步凈化策略的制定提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1目標(biāo)群

采用橫斷面研究方法對(duì)廈門市某種豬場進(jìn)行抽樣檢測和問卷調(diào)查，估計(jì)其豬偽狂犬病血清學(xué)流行率。該豬場6月初存欄10 032頭，包含種公豬、生產(chǎn)母豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育豬和育肥豬等6大豬群，所有豬群都被納入調(diào)查范圍。

1.2抽樣策略和樣本量

針對(duì)不同豬群，采取不同的采樣策略。對(duì)種公豬、生產(chǎn)母豬和后備母豬全部采樣。對(duì)哺乳仔豬、保育豬和育肥豬，根據(jù)豬場內(nèi)各豬群的個(gè)體數(shù)量（N），用估計(jì)流行率的方法計(jì)算抽樣數(shù)量。按95%置信水平（CL）和10%可接受絕對(duì)誤差（d），設(shè)預(yù)期流行率為50%（p），根據(jù)計(jì)算公式：n=（1.96）2p（1-p）/d2，群體規(guī)模較小時(shí)再通過校正公式：na=n/ （1+n/N），確定需要抽取的樣本量（na）[3]?，F(xiàn)場抽樣時(shí)采取系統(tǒng)隨機(jī)抽樣，即按一定的欄位間隔進(jìn)行抽樣。

1.3血樣收集和檢測

將從豬場采集的全血樣品置于一次性采血器中，送至廈門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分離。檢測前置于-20℃冷凍保存。血清樣品用ID.vet公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病毒gE-ELISA試劑盒檢測PRV gE抗體。

1.4數(shù)據(jù)分析

表觀流行率（AP）為檢測到的陽性豬與抽樣研究群的占比。首先通過直接標(biāo)化法計(jì)算出全場的表觀流行率（AP’），標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)算公式為：AP’=Σ（Ih*Th），其中Ih是不同豬群的陽性率，Th是不同豬群在總?cè)褐械姆植急壤傮w比例的95%置信區(qū)間（CI）根據(jù)公式：CI=AP’± Z*Sp計(jì)算，。式中，Sp是總體抽樣誤差，ph是第h層樣本中陽性率，Wh是第h層權(quán)重，nh是第h層樣本量，fh是第h層抽樣比例；然后結(jié)合敏感性（Se）和特異性（Sp）計(jì)算真實(shí)流行率（TP），計(jì)算公式：TP=(AP+Sp-1)/(Se+Sp-1)。陽性率的95%CI根據(jù)公式計(jì)算，其中p是陽性率，Z為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布中概率為0.05所對(duì)應(yīng)的值，n為抽樣數(shù)量。

2　結(jié)果與分析

2.1不同階段豬群gE抗體陽性率分布

在耗時(shí)3個(gè)半月的調(diào)查中，共采集了1 561份不同豬群的血清樣品。其中在計(jì)劃全群抽樣的生產(chǎn)母豬中，實(shí)際采樣數(shù)量未達(dá)到抽樣有求，而哺乳仔豬、保育豬和育肥豬的采樣數(shù)量均超過了抽樣有求。從不同豬群gE抗體陽性率分布情況來看，種公豬的gE抗體陽性率最低，其次為育肥豬，哺乳仔豬的gE抗體陽性率最高，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1　不同階段豬群gE抗體陽性率分布

2.2流行率估計(jì)

在1 561份血清樣品中，檢出gE抗體陽性樣品1 412份，陽性率為90.5%。通過直接標(biāo)準(zhǔn)化法，得到該豬場偽狂犬病的血清學(xué)表觀流行率為89.0% （95% CI：86.1% ～91.9%）。根據(jù)ELISA診斷試劑盒的試驗(yàn)敏感性（Se）為98%，特異性（Sp）為99.9%[5]，得到該豬場偽狂犬病的真實(shí)流行率為90.8%（95% CI：87.9% ～ 93.7%）。

2.3不同品種豬群gE抗體陽性率分布

該場共有4個(gè)品種的豬群。分品種計(jì)算后，黑豬的gE抗體陽性率最高，其次為大白和長白，杜洛克的gE抗體陽性率最低。經(jīng)c2檢驗(yàn)，p = 0.097，說明各品種間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各品種的不同階段豬群gE抗體陽性率差異也不顯著，具體數(shù)據(jù)見表2。

表2　不同品種豬群gE抗體陽性率分布

3　討論

本研究通過科學(xué)抽樣，采用合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，對(duì)某種豬場偽狂犬病血清學(xué)流行率進(jìn)行了估計(jì)。在現(xiàn)場采樣中，考慮到采血行為會(huì)導(dǎo)致懷孕初期和重胎母豬流產(chǎn)，因而對(duì)生產(chǎn)母豬采樣時(shí)，避開了這兩類懷孕母豬，因此導(dǎo)致了生產(chǎn)母豬的抽樣數(shù)量未達(dá)到研究設(shè)計(jì)的要求。但如果采用估計(jì)流行率的方法計(jì)算生產(chǎn)母豬的抽樣數(shù)量，本次研究抽取的生產(chǎn)母豬數(shù)量，還是遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了理論采樣量，因而生產(chǎn)母豬的調(diào)查結(jié)果是可靠的。調(diào)查發(fā)現(xiàn)哺乳仔豬的gE抗體陽性率最高，這個(gè)結(jié)果影響了對(duì)豬場偽狂犬病血清學(xué)流行率的估計(jì)。導(dǎo)致其血清學(xué)流行率偏高的原因是由于哺乳仔豬攜帶母源抗體。即使出生健康未感染偽狂犬病病毒的仔豬，也能檢測出gE抗體陽性。因此建議在今后類似的豬偽狂犬病血清流行率研究中，可以考慮把哺乳仔豬排除在研究群外。調(diào)查結(jié)果顯示，該種豬場偽狂犬病的血清學(xué)流行率較高，這可能與豬場感染了新流行的偽狂犬病毒有關(guān)。在2011年底，北方部分省份在一定范圍內(nèi)暴發(fā)了豬偽狂犬病[6-7]，甚至一些免疫過偽狂犬病疫苗，偽狂犬病控制較好的規(guī)?；i場也出現(xiàn)了疑似偽狂犬病的流行。安同慶、徐秀玲[8-9]等研究表明，新流行的偽狂犬病毒致病性有所增強(qiáng)，現(xiàn)有的商用疫苗Bartha K61株對(duì)其僅有50%的保護(hù)率。調(diào)查中了解到，該豬場曾在2012年12月下旬從廣州引進(jìn)一批種公豬，但未對(duì)其進(jìn)行偽狂犬病檢測，此后在2013年的垂直傳播性疫病監(jiān)測結(jié)果中出現(xiàn)了很少幾例母豬PRV gE抗體陽性。當(dāng)時(shí)并未引起重視，直到2014年初開始發(fā)現(xiàn)母豬流產(chǎn)，才意識(shí)到有可能因此傳入了偽狂犬病。

動(dòng)物疫病防控主要分為3個(gè)階段：控制、凈化和消滅。目前我國在《國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》中，明確要求到2020年所有種豬場要達(dá)到偽狂犬病凈化標(biāo)準(zhǔn)。按照該豬場目前的偽狂犬病血清流行率，建議首先要控制豬偽狂犬病流行，降低流行率。只有將流行率降低到一定程度，才能進(jìn)一步做到疫病的凈化?？紤]到該豬場的經(jīng)濟(jì)效益，無法在短期內(nèi)淘汰所有PRV gE抗體陽性種豬，建議首先要堅(jiān)決淘汰陽性種公豬，其次是探索最合理的免疫程序，定期加強(qiáng)監(jiān)測。另外，在條件允許的情況下，可以建立豬偽狂犬病野毒抗體陰性的生產(chǎn)核心群，以生產(chǎn)核心群為軸心，逐步擴(kuò)大凈化效果，最終建立凈化場。

參考文獻(xiàn)：

[1] Komaromi M，Szabo I. Eradication of Aujeszky’s disease from a large-scale pig farm[J]. Acta Veterinaria Hungarica，2005，53（4）：515-524.

[2] Elbers A R W，Braamskamp J，Dekkers L J M，et al. Stegeman Aujeszky’s disease virus eradication campaign successfully heading for last stage in the Netherlands[J].Veterinary Quarterly， 2000，22（2）：103-107

[3] 沈朝建，王幼明. 獸醫(yī)流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測抽樣技術(shù)手冊(cè)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2013：43.

[4] 孫向東，劉擁軍，王幼明. 獸醫(yī)流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測：抽樣技術(shù)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011：85-86.

[5] Morenkov O S， Fodor N， Fodor I. Indirect ELISAs based on recombinant and affi nity-purifi ed glycoprotein E of Aujeszky’s disease virus to differentiate between vaccinated and infected animals[J]. Acta Vet Hungarica，1999，47（1）：137-150.

[6] 彭金美，安同慶，趙鴻遠(yuǎn)，等. 豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35（1）：1-4.

[7] 解偉濤，梁躍，喬松林，等. 豬偽狂犬病實(shí)驗(yàn)室檢測與控制凈化常見問題[J].今日養(yǎng)豬業(yè)，2015（9）：80-81.

[8] An T Q，Peng J，Tian Z，et a1. Pseudorabies Virus Variant in Bartha K61-Vaccinated pigs，China，2012[J]. Emerging Infectious Diseases，2013，19（11）：1749-1755.

[9] Yu X L，Zhou Z，Hu D M，et a1. Pathogenic Pseudorabies Virus，China，2012[J]. Emerging Infectious Diseases，2014，20 （1）：102-104.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

A Cross-sectional Study on Sero-prevalence of Pseudorabies in a Pig Breeding Farm

Yang Tao
（Xiamen Animal Disease Prevention and Control Center，Xiamen，F(xiàn)ujian 361009）

Abstract：[Objective] To formulate scientifi c purifi cation strategies of pseudorabies in pigs，to estimate the prevalence rate of pseudorabies and its distribution in swine herds by scientifi c and reasonable sampling and specifi c test methods. [Methods]A total of 1 561 serum samples from a pig breeding farm in Xiamen were collected and tested by PRV gEELISA kits. [Results] The true prevalence of pseudorabies in the pig farm was 90.8%（95% CI：87.9% ～ 93.7%）. In different swine herds，the breeding boars’ positive rate of gE antibody was lowest，the following was fattening pigs，and the suckling pigs’ positive rate of gE antibody was the highest. In different species of pigs，the Black Pigs’ positive rate of gE antibody was the highest，the following was Large White and Landrace，and the Duroc’s positive rate of gE antibody was lowest. [Conclusions] The breeding pig farm might be infected with the new pig pseudorabies virus causing the higher serological prevalence rate. In the future，the lactation piglets should be count out of the research groups in the similar pig pseudorabies serology prevalence rate studies. If all breeding pigs with PRV gE positive antibody couldn’t be eliminated in the short term，it was suggested that the positive breeding boars could be eliminated fi rstly，and then should explore reasonable immunity procedure and strengthen monitoring on a regular basis

Key words：porcine pseudorabies；serology；prevalence rate

中圖分類號(hào)：S851.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1005-944X（2016）05-0014-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.05.005

基金項(xiàng)目：廈門市科技計(jì)劃項(xiàng)目（3502Z20154095）